目的 按照动物试验3R原则,建立改良NIH法(modified NIH,M-NIH)即单一稀释法检测狂犬病疫苗效价,替代传统的NIH法.方法 通过比较单一稀释度的待检疫苗与第八批狂犬病疫苗效力试验用国家标准品的小鼠保护率,建立狂犬病疫苗效价测定的改良NIH法,并对该方法进行重复性、准确性及适用性验证.采用M-NIH法和NIH法对52 批狂犬病疫苗进行比较研究,再联合9 家实验室验证共计247 批次,使用Kappa系数和Mcnemar-Bowker检验评价两种方法的一致性.并采用 3 家企业生产的狂犬病疫苗,进行适用性验证.对M-NIH法获批准后近 4 年来应用于狂犬病疫苗批签发检验做回顾性分析.结果 52 批次狂犬病疫苗效价测定的两种方法比较研究结果显示,两种方法的符合率为 92.3％(Kappa=0.82,P<0.01);247 批次扩大验证结果表明两种方法的符合率为80.2％(Kappa=0.54,P<0.01).采用M-NIH法测定标准品保护率时,实验室内变异系数为21.7％,实验室间变异系数为 23.4％.3 家企业批签发狂犬病疫苗适用性验证结果表明 M-NIH 重复性检测结果与 NIH 结果符合率为100％.近4 年来批签发机构采用M-NIH法抽检820 批狂犬病疫苗效价,合格率为93.8％;M-NIH不合格批次最终经NIH法测定后,合格率合计为 99.8％.结论 建立了改良NIH法.该方法获得批准后用于狂犬病疫苗的效价检测,大大减少了动物使用量,提高了狂犬病疫苗的批签发效率.

疫苗对于预防疾病非常有效.弱毒和灭活疫苗具有很强的免疫原性,制备过程简单,成本较低.然而,在大规模应用中,由于长时间的病毒培养周期,这些疫苗的产量通常无法满足需求,而且安全性可能较差.新型纯净性较高、安全性较好的疫苗正在逐渐取代一些弱毒和灭活疫苗在临床实践中的应用.然而,这些新型疫苗的免疫原性较弱,单独使用时无法引发有效的免疫反应[1].因此,佐剂被用于提高免疫反应并增强疫苗的功效.

目的 对制备的第九批候选人用狂犬病疫苗国家标准品的效价进行协作标定,并最终赋值.方法 组织人用狂犬病疫苗生产、研发等有资质的实验室,以第七批狂犬病疫苗国际标准品(NIBSC代码:16/204)为检测标准品,采用NIH法对候选狂犬病疫苗国家标准品进行效价测定.对协作标定单位的检测结果进行统计学分析,取有效检测值的几何均值作为候选标准品的最终效价值.根据国家药品标准物质制备的要求,对该候选标准品进行热加速破坏后检测糖蛋白抗原,考察其稳定性.结果 参加协作标定的单位有20家,剔除未严格按照协作标定SOP操作的2家,剩余协作单位数据均有效,经统计学分析,第九批狂犬病疫苗国家标准品效价最终赋值为11.4IU/mL,95％可信限为10.9～11.9 IU/mL,ED50的95％参考范围为2.10～2.75.37 ℃放置不同时间(2、4、8和16周)糖蛋白抗原检测结果未见明显差异.结论 完成了第九批候选人用狂犬病疫苗国家标准品(批号:201906001)的协作标定,其效价赋值科学、严谨、数据可靠,热稳定性符合要求.目前该标准品已获得国家药品标准物质委员会批准使用,对人用狂犬病疫苗的质量控制,尤其是有效性的质控具有重要意义.

目的 通过对新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)mRNA疫苗(新冠mRNA疫苗)免疫小鼠后产生的中和抗体进行检测,探索中和抗体检测法应用于mRNA疫苗体内效力评价的可行性.方法 采用 6～8周BALB/c小鼠进行后肢肌肉免疫,检测不同免疫剂量和不同免疫程序的中和抗体滴度.并对 8 家企业生产的新冠mRNA疫苗免疫的小鼠血清进行中和抗体和IgG抗体检测.结果 2、5、10 μg不同剂量mRNA疫苗按照不同免疫程序免疫小鼠后中和抗体检测结果显示,抗体阳转率均为 100%,中和抗体反应有明显的剂量-效应关系.2 针间隔14d加强免疫组抗体滴度显著高于间隔7d加强免疫组及1 针组(F=57.13,P<0.001).2 μg剂量间隔7d加强免疫和间隔 14d加强免疫产生的中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为 218 和 468,差异有统计学意义(t=3.40,P=0.003);5 μg剂量间隔 7d加强免疫和间隔 14d加强免疫产生的中和抗体GMT分别为499 和 1 436,差异有统计学意义(t=3.62,P=0.002);10 μg剂量间隔 7d加强免疫和间隔 14d加强免疫产生的中和抗体GMT分别为 608 和 1 909,差异有统计学意义(t=3.23,P=0.005).国内8 家企业生产的新冠mRNA疫苗免疫小鼠后均可产生高滴度的IgG抗体(104.5～107.5)和中和抗体(102.6～104.8),效力测定结果均符合企业质量标准.各企业生产的mRNA疫苗的中和抗体滴度结果差异有统计学意义(F=70.03,P<0.001).结论 小鼠免疫后中和抗体检测可用于mRNA疫苗的体内效力评价.

目的 对第六批狂犬病免疫球蛋白国家标准品开展赋值研究.方法 组织10个有资质的实验室,分别采用小鼠中和试验(mouse neutralization test,MNT)和快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescence focus inhibition test,RFFIT),用第二批狂犬病免疫球蛋白国际标准品(RAI)对新标准品进行协作标定.随机抽取一定数量的新标准品,检测其pH值,方差分析检验标准品的均匀性;将新标准品分别在不同的温度(4、25和37℃)放置不同时间(1、2、3和4周),每个时间点取3支先于-20℃保存,待所有样本收集完成后采用RFFIT法检测抗体效价,方差分析检验标准品的稳定性.结果 协作标定的数据经统计学分析,MNT法的赋值为35.4 IU/mL,95％可信限为32.6～38.2 IU/mL;RFFIT法的赋值为38.7 IU/mL,95％可信限为36.8～40.6 IU/mL;将两种方法的赋值取几何均值(37.0IU/mL)即为第六批狂犬病免疫球蛋白国家标准品的赋值,其均匀性和稳定性良好.结论 完成了第六批狂犬病免疫球蛋白国家标准品(批号:250011-201306)的赋值研究,其结果准确可靠、科学严谨,对狂犬病人免疫球蛋白类制品的质量控制具有重要意义.