从疑似赛鸽绿脓杆菌感染病料中分离绿脓杆菌并进行相关致病性试验和药敏试验,为今后赛鸽绿脓杆菌防治提供参考.采用常规方法从肝脏、肺脏等组织中无菌钓取细菌于普通琼脂、麦康凯、鲜血琼脂平板培养基中,随后进行染色镜检、生化试验鉴定;对分离菌株进行致病性研究,将10只未经免疫的30～40日龄的雏鸽随机分为对照组和试验组进行感染,10只BALB/c小鼠同样随机分组进行感染,观察并记录感染动物临床症状及死亡率;通过药敏试验检测该菌对庆大霉素、恩诺沙星、复方新诺明等10余种药的敏感性.结果表明,分离得到的菌株根据培养及菌落特征、生化试验确定为绿脓杆菌;人工感染小鼠发病率为100％,死亡率为60％;试验组鸽子发病率为60％,无死亡;该菌对庆大霉素、恩诺沙星、妥布霉素和环丙沙星高度敏感.

为了确定猪源H9N2亚型流感病毒(SIV)在人肺腺癌上皮细胞(A549)中增殖的最佳条件,将A549细胞培养至单层后,通过不同浓度TPCK-胰酶维持液(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/mL)、不同浓度的H9N2亚型SIV(10-1～10-7)、不同病毒吸附时间(0 h、1.0 h、1.5 h和2.0 h)及不同pH值的细胞培养液作用细胞条件下,观察A549细胞形态学变化并取样检测细胞上清液中的HA滴度.结果显示:在未加病毒作用时,A549细胞对TPCK-胰酶的最大耐受浓度为1μg/mL;用含1μg/mL的TPCK-胰酶的细胞培养液(不含牛血清)将H9N2亚型SIV稀释为不同的浓度感染A549,在0.3μg/mL的胰酶维持液、病毒稀释倍数为10-2、吸附时间为1 h、细胞培养液pH值为7.5感染条件下,培养时间为60 h和72 h时HA滴度分别为5.4log2和6.4log2.结果表明,当TPCK-胰酶维持液浓度为0.3μg/mL、病毒接种浓度为10-2、吸附时间为1 h、细胞培养液pH值为7.5时,H9N2亚型流感病毒在A549细胞中增殖情况最佳,培养72 h并冻融后上清液HA滴度可达到峰值7.2log2.

为有效控制临床中赛鸽新城疫的发生,将分离到的鸽新城疫河北毒株(HB株)灭活后制备咸水佐剂疫苗,并对其物理性状、安全性、毒性、最佳免疫剂量和抗体产生时间、免疫持续期和保护效果及与鸡新城疫疫苗(LaSota株)对比效果进行检测.结果 显示,使用0.10％甲醛37℃灭活16 h可彻底将病毒灭活,并且对病毒的效价影响最小;制备的水佐剂疫苗安全无毒副作用,采用0.3 mL剂量免疫雏鸽后7d,有较低水平抗体产生,21 d抗体水平达到8.1 log2,28 d达到顶峰9.0 log2;免疫30 d后保护指数为100.0;与鸡新城疫疫苗(LaSota株)进行对比发现,制备的水佐剂疫苗攻毒保护率为100％,而鸡新城疫疫苗(LaSota株)仅为30％;制备的水佐剂疫苗在4℃条件下可保存180 d,20℃条件下可保存90 d.综上,采用鸽新城疫病毒HB株制备的水佐剂疫苗可在免疫后短时间内产生有效抗体,并且在受到强毒攻击时较鸡新城疫疫苗的保护率高.

为了解赛鸽群中新城疫流行毒株的分子遗传特征及变异情况,从河北省疑似赛鸽新城疫病例中采集病料,常规处理后接种SPF鸡胚,经血凝试验( HA)和血凝抑制试验( HI)鉴定病毒,并对分离毒株进行致病性试验、毒力测定,采用RT-PCR方法扩增F基因,并与其他不同种属新城疫毒株进行遗传进化发育分析和氨基酸序列同源性分析.结果显示,从病料中分离到1株新城疫病毒(命名为HB株) ,致病性试验产生与发病鸽相似的临床症状和剖检变化;其鸡胚平均死亡时间(MDT) 、1日龄雏鸡脑内致病指数( ICPI)和6 周龄雏鸡静脉致病指数( IVPI)分别为52. 8 h、1. 78和2. 59,表明HB株新城疫病毒为强毒株;HB株F基因碱基序列包含1个大小为1 662 bp的完整开放阅读框,基因分型结果显示,HB株属于基因型Ⅵ型.根据遗传进化发育关系和同源性分析结果发现,HB株与pi/CH/LGD/110208、dove/Italy/2736/00、Q-GB 506/97 等毒株核苷酸序列相似性和氨基酸同源性较高,尤其与pigeon/Qinghai/1344/2017 毒株亲缘关系最近,分别达98. 45%和99. 5% ;与目前使用的传统新城疫疫苗毒株LaSota、B1、V4、Mukteswar株等遗传关系较远;F蛋白裂解位点氨基酸序列为112 R-R-Q-K-R-F117 ,符合强毒株特征.以上结果表明,HB株为强毒株且与目前广泛使用的新城疫疫苗毒株遗传关系较远.

目的:探讨瞬时受体电位阳离子通道 M2(TRPM2)在 H9N2猪流感病毒(H9N2-SIV)感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤中的表达与作用.方法:采用 H9N2-SIV感染小鼠PMVEC(每组设立 3个重复).在病毒感染后 24 h和 48 h进行采样,根据试剂盒方法测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧簇(ROS)和一氧化氮合成酶(NOS)的变化;电镜观察 PMVEC超微结构变化;利用 Transwell培养 PMVEC单层细胞,测定跨膜电阻及辣根过氧化物酶渗出率;real-time PCR和 Western blot方法检测 TRPM2 mRNA与蛋白的表达;采用 Annexin V/PI双染法观察病毒感染细胞的凋亡情况.结果:H9N2-SIV感染后小鼠 PMVEC 中 GSH-Px和SOD活性显著下降,而 ROS水平和 NOS活性显著高于未感染对照组(P＜0.01);病毒感染细胞细胞器明显减少,出现空泡化结构,线粒体基质减少,细胞发生凋亡;病毒感染后跨膜电阻值明显降低,辣根过氧化物酶渗出率则显著增加;TRPM2 mRNA和蛋白表达随病毒感染时间增加显著升高(P ＜ 0.01);Annexin V/PI双染法显示病毒感染细胞的胞膜荧光显著增强,同时大量细胞的胞核显现红色,表明大量细胞发生凋亡现象.结论:TRPM2在 H9N2-SIV感染 PMEVC过程中表达明显增强,提示其参与了四N2-SIV感染导致的 PMVEC损伤和凋亡过程.

为了合成环丙沙星抗原,试验应用3-溴丙氨氢溴酸盐制备半抗原环丙沙星-溴丙氨衍生物,采用戊二醛方法与碳二亚胺法合成环丙沙星免疫抗原(CIP-NH2-BSA)与环丙沙星包被抗原(CIP-NH2-OVA),其中环丙沙星-溴丙氨衍生物采用红外光谱(IR)、电喷雾电离质谱(ESI-MS)和核磁共振(1H-NMR、13C-NMR)进行结构确证,CIP-NH2-BSA与CIP-NH2-OVA采用紫外扫描法进行鉴定.结果表明:环丙沙星-溴丙氨衍生物合成成功,环丙沙星-溴丙氨衍生物与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)耦联成功.说明通过制备环丙沙星衍生物可以合成高效的抗原.