The increasing incidence of acyclovir (ACV) and multidrug-resistant strains in patients with Herpetic Stromal Keratitis (HSK) is a major health problem and often results in blindness. In the study we examined the effectivity of mAb 2c in preventing experimental HSK in BALB/c mice. Mice were infected with HSV-1 (KOS) and subsequently either systemically or topically treated with mAb 2c. Systemic treatment was performed by intravenous administration of mAb 2c 24 h prior to infection (pre-exposure prophylaxis) or 24, 40, and 56 hours after infection (post-exposure immunotherapy). For topical treatment antibody-containing eye drops or PBS as control was administered (5 times per day). Systemic antibody treatment markedly reduced viral loads and completely protected mice from developing HSK. The administration of antibody prior or post infection was equally effective. Topical treatment had no improving effect on the severity of HSK. In conclusion, our data demonstrate that mAb 2c proved to be effective for the treatment of corneal HSV-infections and for prevention of HSK and blindness. Moreover, the humanized counterpart (mAb hu2c) was equally potent in protecting mice from HSV-induced HSK when compared to the parental mouse antibody.

It has previously been shown that HIV-infected patients develop anti-lymphocyte antibodies. The relationship between anti-lymphocyte antibodies and antibodies against different viral antigens is unknown, and it remains controversial whether some lymphocyte subpopulations are targeted preferentially. We have set out using three-colour flow cytometry to measure antibodies against different lymphocyte subsets. Staining with anti-human immunoglobulin and two MoAbs was performed to characterize the immunoglobulin load of different lymphocyte subsets. Comparison was done between patients' antibody reactivity against HIV-1 antigens and anti-lymphocyte antibodies. We were able to demonstrate the presence of anti-lymphocyte antibodies in approximately 75% of the HIV-infected patients (n = 78) (healthy controls were all negative). MHC class II-negative T cells showed a stronger reaction with anti-lymphocyte antibodies than B cells or MHC class II-positive T cells. Patients with antibodies against CD4 lymphocytes showed a significantly higher antibody reaction with the retroviral antigen gp41 than patients without these antibodies. An association between anti-lymphocyte antibodies and antibody reactivity against other HIV-1 antigens was not noticed. In conclusion, anti-lymphocyte antibodies in HIV-1-infected patients show a preferential reactivity with T cells which lack expression of MHC class II molecules. There is an increased antibody reactivity against gp41 in patients with anti-CD4+ T cell antibodies. The association hints at a specific origin of anti-lymphocyte antibodies in HIV-1-infected patients due to cross-reactivity with viral epitopes or network phenomena. These anti-CD4 cell antibodies could be of interest in the clinical course of HIV infection.

Die konsequente Testung der Blutspenden auf Antikörper gegen die humanen Immundefizienzviren and die Hepatitis-B- and -C-Viren sowie die routinemäβige Anwendung von viruziden Verfahren während des Herstellungsprozesses von plasmatischen Gerinnungsfaktor-XIII- oder -IX-Konzentraten haben die Gefahr einer Virusübertragung deutlich gesenkt. Die Einführung der Genomamplifikationstests verspricht eine weitere Minimierung des Risikos gegentiber diesen Viren.

A therapeutic dilemma arises once HIV-infected patients develop a break-through of HIV-replication under potent antiretroviral therapy. Therefore, we studied whether patients (n = 12) who failed double nucleoside reverse transcriptase (NRTI) plus indinavir or ritonavir triple therapy can be rescued when therapy is switched to double protease inhibitor (PI) treatment (nelfinavir and hard gel saquinavir) and stavudine. With the rescue regimen HIV-RNA levels initially dropped from 148,571 +/- 45,258 copies/ml to 9,310 +/- 6, 965 copies/ml at week 4 (p = 0.0117). However, virus load subsequently increased to almost baseline levels (131,230 +/- 37,743 copies/ml) at week 12. Likewise, CD4-cell counts could only be stabilized initially (baseline 267 +/- 51; week 4 296 +/- 65 cells/microl), but gradually declined thereafter (216 +/- 34 cells/microl week 12). Before therapy was switched, the viral protease gene from 5 analyzed patients showed 3-5 amino acid substitutions. Moreover, 4 of these patients had one amino acid substitution associated with resistance to nelfinavir. Our data suggest that HIV-infected patients resistant to indinavir or ritonavir and double NRTI combination therapy respond to double PI nelfinavir/saquinavir and D4T rescue therapy only initially but have no sustained benefit.

Anfang 1995 erschienen die ersten Publikationen Liber das GB-Virus-C (GBV-C) und das Hepatitis- G-Virus (Simons et al. 1995; Linnen et al. 1996). Das Hepatitis-G-Virus ist ein vom GB-Virus C (GBV-C) unabhängiges Isolat (Sequenzhomologie 95%) and eng verwandt mit dem Hepatitis-C-Virus and den GB-Viren A und B(GBV-A, GBV-B) (Decker 1996). Das Genom (9392 Nukleotide) enthält einen kontinuierlichen offenen Leserahmen (ORF) and kodiert für ein Polyprotein von 2873 Aminosäuren (Linnen et al. 1996; Muerhoff et al. 1995). Das Virus wird parenteral übertragen, and in einigen Fällen akuter and chronischer Hepatitiden wurde nur HGV bzw. GB-Virus C als mögliche Ursache nachgewiesen (Simons et al. 1995; Yoshiba et al. 1995). Es ist weltweit verbreitet and kommt in der Bevölkerung je nach Risikogruppe mit unterschiedlicher Prävalenz (Blutspender 1–2%, i.v. Drogenabhängige 38%) vor, die Antikörperprävalenz liegt zwischen 9% bei Blutspendern and 40% bei i.v. Drogenabhängigen (Alter et al. 1997; Nübling et al. 1996; Star et al. 1996; Tacke et al. 1997).

Ein β-Propiolacton-UV-inaktiviertes Blutgerinnungsfaktorkonzentrat PPSB war 1989/90 verantwortlich für die HIV-Infektion von 7 Hamophilie-B-Patienten in Bonn. Weitere 10 Bonner Patienten erhielten ebenfalls Infusionen der gleichen Charge PPSB, wurden jedoch nicht mit HIV infiziert. Die Infizierten hatten nicht wesentlich mehr von dem Konzentrat erhalten als die Nichtinfizierten. In der Vergangenheit wurde der Virusgenotyp und die Viruslast im Konzentrat bestimmt. Nach diesen Analysen konnte man davon ausgehen, daβ in jeder Flasche der kontaminierten Charge etwa die gleiche Menge Virus vorhanden war. Auβerdem wurde nur ein einziger HIV-Genotyp im Konzentrat nachgewiesen, und zwar derjenige, der auch zum Zeitpunkt der Serokonversion in allen infizierten Patienten vorherrschte. Trotzdem entwickelten sich die Krankheitsverläufe der Infizierten bis heute sehr unterschiedlich.

Wenn man versucht, HIV aus dem Blut HIV-Seropositiver anzuzüchten, kann man in einem Teil der Fälle stark zytopathogene, Synzytien-induzierende Virusvarianten isolieren, den sog. SI-Phänotyp (Abb. 1a). In einem anderen Teil der Fälle kann man in den Kulturen keinen oder nur einen ganz schwachen zytopathischen Effekt (cpE) erkennen. Wenn die Virusvermehrung dann aber zweifelsfrei durch einen positiven p24-Antigen-ELISA des Kulturüberstandes nachgewiesen wird, handelt es sich um eine Virusvariante vom NSI-Phänotyp (Abb. 1b). In einem dritten Teil der Fälle gelingt es gar nicht, HIV aus dem Blut der Patienten anzuzüchten. Die Kulturüberstände bleiben p24-Antigen-negativ. Diese Beobachtungen sind keine Laborartefakte, sondern können oft bei einem Patienten konstant über mehrere Jahre bestehen bleiben (Abb. 2a-c). Bei anderen Patienten kann man eine Fortentwicklung des Virus von kulturell negativ über NSI zu SI beobachten (Abb. 2d), wenn nicht die NSI-Phase durch einen zu großen zeitlichen Abstand zwischen der letzten negativen und der ersten positiven Virusanzucht verpaßt wurde (Abb. 2e).

Ende 1994 wurde erstmals die Nukleinsäure des Hepatitis-G-Virus im Plasma eines Patienten mit chronischer Hepatitis unklarer Ätiologie nachgewiesen [1, 2, 3]. Das Hepatitis-G-Virus gehört zur Familie der Flaviviren. Das vollständige Genom (9392 Nukleotide) kodiert für ein Polyprotein von 2873 Aminosäuren und enthält einen kontinuierlichen offenen Leserahmen (ORF) [3, 4] (Abb. 1).

Im Bonner Hämophiliezentrum werden z. Z. ca. 800 Patienten betreut. Alle Patienten erhalten spätestens seit Anfang 1984 Gerinnungspräparate, die unterschiedlichen Virusinaktivierungsprozessen unterworfen wurden. Trotzdem mußten Infektionen beobachtet werden. Die Virusnukleinsäuren wurden z. T. im entsprechenden Konzentrat nachgewiesen (HIV: Kupfer et al. 1995; HCV: Gerritzen et al. 1992; HAV: Normann et al. 1992; HBV1: Jantsch-Plunger et al. 1995). Andererseits führte eine Untersuchung des Konzentrats, welches 1989/90 für die Übertragung von HIV auf Hämophile verantwortlich war, auch zu einem Nachweis von HCV-RNA. Bei den 10 HCV-seronegativen Bonner Patienten, die mit dieser Charge behandelt wurden, ist jedoch keine Serokonversion bzgl. HCV eingetreten.

In addition to quantification of viral load the graded cytopathogenicity of the human immunodeficiency virus may provide prognostic information for the course of HIV infection. However, the prognostic value of graded cytopathogenicity in addition to the CD4 count has not been evaluated in a large longitudinal study. Therefore a total of 216 HIV-seropositive hemophiliacs have been followed up from 1985 to 1998 (mean follow-up 70.4 +/- SD 26 months, median 72, range: 12 to 120 months). In vitro virulence was determined according to cytopathic effects on freshly isolated PBMC of healthy donors and graded from A (strongest cytopathogenic effect) to D (no cytopathic isolate effect). Survival was analyzed among patients with different virus isolates by Kaplan-Meier statistics (log rank) and factors independently associated with decreased survival were analyzed by Cox hazard regression analysis. - A virus isolate A was found in 22 (10.2%) patients, a virus isolate B was found in 21 (9.3%) patients, a virus isolate C was found in 9 (4.2%) and a virus isolate D was found in 10 (4.2%) patients. Mean survival times were 48 months (95% Confidence Interval (CI) = 36 - 60) in patients with isolate A, 72 months (CI = 36 - 108) with isolate B, 84 months (CI = 48-120) with isolate C, 72 months (60 - 96) with isolate D and 96 months (CI = 96 - 108) in patients with a negative virus culture (p < 0.001). Cox regression analysis indicated significant associations with outcome for young age (p <0.001), positive virus culture (p < 0.0001) and CD4 count (p < 0.0001) as independent predictors of survival. The presence of an isolate A revealed the strongest odds ratio (6.3, 95% CI 2.9-13.2). Our data indicate that the presence of a virus isolate A represents a strong risk factor for mortality in the course of HIV infection. Besides quantification of viral load and CD4 count, the graded cytopathogenicity may provide additional information for early and aggressive antiretroviral treatment, since the mean survival in patients with cytopathogenic virus isolates is reduced significantly.

Die gentechnische Erzeugung von Gerinnungsfaktor VIII bedeutet einen enormen Fortschritt für die Therapie der Hämophilie A, kann doch hiermit ein ansonsten aus Plasma gewonnenes Protein in unbegrenzter Menge und frei von kontaminierendem Virus zur Verfügung gestellt werden. Zur Sicherung der enzymatischen Faktoraktivität während der Präparations- und Reinigungsprozedur muß allerdings bei den derzeit zugelassenen rekombinanten Faktor-VIII-Konzentraten Humanalbumin zugesetzt werden, welches durch Pasteurisierung inaktiviert wird.

Die Durchseuchung der 800 Patienten der Bonner Hämophilie-Ambulanz liegt für Hepatitis C bei 65%. Die Seroprävalenz in der deutschen Bevölkerung wird auf 0.3–0.5% geschätzt. Der Infektionszeitpunkt kann für die meisten Hämophiliepatienten auf vor 1984 datiert werden. Dies kann durch die damals mangelhafte Verfügbarkeit an virusinaktivierten Plasmapräparaten erklärt werden.

Wegen der großen Tenazität gegenüber physikalischen und chemischen Einflüssen sowie der hochgradigen Virämie während der akuten Infektion gehört das Parvovirus B19 (B19) zu den Viren, die auch mit virusinaktivierten Blutprodukten übertragen werden könnten. Eine direkte Evaluierung der Virusabreicherung und -inaktivierung bei der Herstellung von Gerinnungsfaktorkonzentraten oder deren Zwischenprodukten wird durch die schlechte Kultivationsmöglichkeit von B19 verhindert. Aufgrund der hohen Rate an asymptomatischen und uncharakteristischen Verläufen kann eine Infektion nach Gabe von Gerinnungsfaktorkonzentraten nur in Einzelfällen bewiesen werden [1,2,3]. Wir untersuchten daher Seren von Hämophilen auf anti-B19 IgG- und IgM-Antikörper und verglichen die Ergebnisse mit denen von nicht-hämophilen Personen ohne klinischen Verdacht einer B19-assoziierten Infektion. Für diese Arbeiten verwendeten wir einen neuartigen indirekten Immunfluoreszenztest, bei dem in Insektenzellen exprimiertes, rekom-binantes B19-Protein als Antigen verwendet wird.

Non-syncytium inducing (NSI) and syncytium inducing (SI) variants of human immunodeficiency virus (HIV) isolated from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) could be definitely typed by sequence analysis of the env-gene V3 region. It was thus possible to compare the genotypes of viral variants isolated from PBMC and accompanying monocyte cultures and those derived directly from the patients' blood cells prior to cultivation. Within the investigated group of patients it was shown that HIV variants colonizing monocytes displayed a similar shift from NSI to SI as observed previously for PBMC, i.e. lymphocyte derived isolates. Lymphocytic SI variants could be isolated from the blood of patients, while simultaneously the predominant provirus in both blood and monocytic isolate was NSI. Consequently, we observed a delayed switch in the predominant provirus genotype found in blood which was associated with a synchronous change in the genotype of the corresponding monocytic isolate. The results show that monocytes/macrophages can be colonized by heterogeneous HIV variants in vivo and can therefore also function as carriers for the spread of highly virulent SI variants into the tissues.

Alle z.Zt. zugelassenen antiretroviralen Chemotherapeutika sind nukleosidische Polymerase-Hemmer. Als Nukleosid-Analoge müssen sie von zellulären Kinasen phosphoryliert werden, um dann an die virale Polymerase zu binden und in die naszierende Virus-DNA eingebaut zu werden. Infolge der abweichenden Struktur der Substanzen — Azidothymidin (AZT) (Abb. 1) unterscheidet sich vom 2’-deoxy-thymidin nur durch eine Azid (N3)-Gruppe anstelle der OH-Gruppe in der Position 3 der Pentose — kann aber kein weiteres Nukleotid angeknüpft werden. Die Synthese der Virus-DNA kommt zum Erliegen. Es entsteht keine provirale DNA, die in das zelluläre Genom integriert werden könnte, und die Zelle bleibt uninfiziert.

Ein HIV-infizierter Hämophilie-Patient fiel wegen neurologischer Symptome auf. Der Patient zeigte gleichzeitig eine sehr ungewöhnliche Konstellation von Laborbefunden: Während einige Marker, wie die CD4+-Zellzahl und der Immunoblot, auf ein fortgeschrittenes Krankheitsstadium hinwiesen, zeigten andere Laborbefunde wie Virusisolierungen und RNA-Quantifizierung im Blut ein ganz gegensätzliches Bild. Um Ursachen für die deutliche Schwächung des Immunsystems trotz Vorherrschens einer wenig cytopathogenen Virusvariante zu finden, wurden drei Gene sequenziert, die für die Cytopathogenität (env-Gen) [1], die Infektiösität von Viruspartikeln (vif-Gen) [2] und die qualitative Ausprägung der HIV-Infektion (nef-Gen) entscheidend sind [3].

1990 wurden 8 Hämophilie B-Patienten durch ein Faktor IX-Präparat mit HIV-1 infiziert [1]. Die Homogenität der infizierenden Viruspopulation wurde dadurch nachgewiesen, daß die Sequenzanalyse (pro) viraler Strukturgene (env: V1/2, V3) eine sehr geringe Variabilität zwischen den Sequenzen der verschiedenen Patienten zeigte [2]. Außerdem konnte die Einheitlichkeit der Infektionsquelle durch Stammbaumanalyse des viralen p17-Gens, das als epidemiologischer Marker gilt, bestätigt werden. Dieser Vorfall eröffnete die einzigartige Möglichkeit zu untersuchen, in welchem Ausmaß sich eine homogene Viruspopulation in verschiedenen Patienten weiterentwickelt und inwieweit sich dies auf den Krankheitsverlauf auswirkt.