对影响思茅松SRAP-PCR反应体系的各参数进行分析,建立并优化出一套适合思茅松的SRAP-PCR反应体系。在25μL反应体系中,模板DNA 60 ng、Mg2+2.0 mmol/L、引物1.0μmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶1 U;在此基础上,从100对引物组合中筛选出条带清晰、多态性丰富的引物组合24对。
采用L9(34)正交试验设计,了解发芽环境、微波辐射和激素浸种对云南松种子发芽的影响,结果表明,3种因素共同影响云南松种子的发芽。其中,发芽环境是影响发芽率和发芽势的主要因子,夜间无光照的温度相对较低环境适宜云南松种子的发芽,但与全天光照且温度相对较高环境的差异并不显著。微波辐射对云南松种子发芽的影响比激素浸种小,2个因素均显著地影响云南松种子的发芽率,但都对发芽势的影响不显著。发芽率和发芽势最佳的组合分别为A3B1C1和A3B2C1,即无微波辐射、清水浸种置于夜间无光照环境下的种子,和微波辐射15 s、清水浸种置于夜间无光照环境的种子,其2个指标分别达83.0%和48.8%。