Abstract Research on establishing continuous cell line (CCL) has gained much attention recently, especially for its promising usage as an alternative substrate for vaccine production. In order to set up a ready-for-use protocol for potentially immortalizing animal originated cells, this study used MDCK as the pilot cells to explore the method using hTERT and SV40-LT genes transfected through liposome and lentivirus. Results showed that hTERT transfection with liposome and lentivirus, and SV40-LT with lentivirus could be successfully expressed in MDCK cells. Transfection efficiency of lentivirus was higher than liposome, and SV40-LT was easier to induce cell proliferation than hTERT. No mutation occurred during the passage and the original phenotype was maintained. The study provided a reference and potential method for the subsequent immortalization of primary cells.

细胞永生化使细胞能够在保持遗传性状的同时无限增殖,细胞的体外永生化需要将HPV的E6和E7基因、SV40的LT基因或人端粒酶逆转录酶(hTERT)等导入目标内,而SV40-LT是建立永生化细胞最便捷的基因.本试验利用慢病毒感染方式将SV40-LT导入MDCK细胞中,阳性筛选后经qPCR和免疫荧光实验均检测到SV40-LT的表达,成功建立了利用慢病毒方式导入SV40-LT的实验体系,为后续永生化细胞建系研究提供了技术依据.

为研究藏獒体细胞的生物学特性,保存藏獒遗传资源,以实验室前期自主分离的藏獒肾脏细胞为材料,探讨了其体外培养的形态特征、传代次数、冻存复苏、生长特性、细胞核型以及G418最低致死浓度.结果表明:藏獒肾脏细胞体外培养时形态均为成纤维细胞,形状梭形,呈放射状与旋涡状样式生长;细胞冻存后复苏活率为91％,且复苏后形态与长势均呈现良好状态;F1代至F5代,细胞增殖较快,F5代至F8代,细胞增殖减弱甚至停滞,细胞呈多边形状态,出现细胞脱落现象,最终于F8代无法继续生长;生长曲线测定结果显示,24孔板内细胞数目最高值达到4.06×105个/mL,最短倍增时间为27 h;藏獒核型2n=78;藏獒肾脏细胞的G418筛选最低致死浓度为500μg/mL.

疫苗接种是保护机体免受疫病侵害的一种有效的防御机制.随着科技的进步以及疫苗需求量的日益上升,疫苗生产商通过不断探索,在疫苗生产工艺的上游融合细胞培养技术,利用细胞基质对病毒性疫苗进行大规模的生产.面对监管部门颁布的严格的安全生产条令,如何对细胞基质进行安全性评估已经成为疫苗生产商必须考虑的重点.本文将着重介绍疫苗生产用细胞基质的相关安全性问题,旨在为生产新型病毒性疫苗提供细胞基质安全性方面的相关参考.

植物内生放线菌是一种特殊的微生物类群,广泛存在于自然界.其次级代谢产物具有丰富的药用价值和多种生物学功能,如抑菌、抗疟疾、抗癌,能保护和促进植物生长等.文章从植物内生放线菌次级代谢产物的功能及不同培养条件对大规模生产的影响进行综述,以期为植物内生放线菌的进一步研究提供参考.

为评估一种血清替代物(Billion cell)支持动物细胞体外培养的效果,分别在含10％ Billion cell(3个储存温区37℃、4℃、-20℃)和10％FBS的DMEM培养液中连续传代培养MDCK细胞,利用传代稳定性观察、克隆形成率、绘制生长曲线及生长动力学分析的方法,评价Billion cell对MDCK细胞促生长效果的影响.结果显示:静置培养,-20℃、4℃储存温区的Billion cell和FBS能较好促进MDCK细胞增殖,平均集落形成率从高到低依次为-20℃Billion cell、FBS、4℃Billion cell、37℃Billion cell;生长动力学分析发现平均比生长速率、平均倍增时间和最大增殖浓度从高到低依次为-20℃Billion cell、FBS、4℃Billion cell、37℃Billion cell,故-20℃储存温区的Billion cell支持MDCK细胞培养效果最佳且优于FBS.通过Billion cell对MDCK细胞培养效果影响的研究,旨在开发替代牛血清支持动物细胞培养的有效血清替代物,为生物制品生产提供必要条件.