为了解昆明滇池红嘴鸥(Larus ridibundus)携带的沙门氏菌(Salmonella spp.)的耐药性、毒力特征及致病性等情况,2019年11月,从昆明滇池随机选择100只越冬红嘴鸥,对其泄殖腔内容物进行细菌分离培养、生化鉴定、染色镜检、分子生物学鉴定、多位点序列分型和血清学鉴定;采用药敏纸片琼脂法对5大类14种抗菌药物进行耐药检测,使用PCR扩增检测耐药基因,分析耐药情况;通过毒力基因检测及动物致病性试验对所分离的细菌进行致病性分析.结果显示:确定其为ST19型鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium),抗原结构式为O抗原1,4,[5],12;H抗原i,1,2,主要对阿莫西林、环丙沙星、四环素和多西环素耐药,且检出四环素类耐药基因tetB,喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB、parC和psrE.该分离菌检测出mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB、spvC、spvB、stn、fimA、orgA、sopB、sipB和spaN 13种毒力基因.动物试验结果表明,该分离菌株对试验小鼠有一定致病性,接种浓度为5×106、5×107、5×108 cfu/mL的小鼠死亡率分别为60％、100％和100％,死亡小鼠出现肝脏肿大、肺部局部充血和肠壁变薄等病变.

为了分离姜厚朴中的单体化合物和厚朴酚,并探究其抑菌效果,试验采用高效液相色谱筛选色谱条件,以保留时间、色谱图及标准曲线进行分离物的定性和定量分析;对提取得到的和厚朴酚运用K-B纸片法对9种微生物进行抑菌圈直径的测定,将筛选得到的对和厚朴酚敏感的菌株用微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC).结果表明:以60％乙醇为最佳提取溶剂,以乙酸乙酯-石油醚(5∶5,V∶V)为最佳萃取条件,甲醇-0.5％甲酸水(80∶20,V∶V)等度洗脱为最佳色谱收集条件.结合保留时间和色谱图,确定收集物为和厚朴酚单体化合物,绘制的标准曲线方程为Y=1.15×107X+5.91×104,R2=0.998,线性范围为0.001 6～1 mg/mL,计算得到收集的和厚朴酚单体化合物纯度为85.1％.药效学评价和厚朴酚对大肠杆菌、溶血性大肠杆菌、沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯菌无抑制作用,对粪肠球菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用,抑制圈直径分别为(15.00±0.16)mm、(17.00±0.20)mm、(19.00±0.23)mm,MIC、MBC 分别为 375.00,93.75,187.50 μg/mL 和 750.00,375.00,375.00 μg/mL.说明本试验提取得到的单体化合物和厚朴酚对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、无乳链球菌有抑制作用.

为了研究黄连生物碱的抑菌活性,采用高速逆流色谱(HSCCC)法分离黄连生物碱,K-B法检测其抑菌活性,测其对敏感菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).结果显示:从黄连中分离出黄连碱、掌叶防己碱、小檗碱、表小檗碱,提取率分别为44.41％、36.72％、68.54％、18.33％;对金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为10.00、29.50、21.00和12.50 mm;对无乳链球菌分别为11.40、27.50、14.00和15.50 mm;对粪肠球菌、大肠杆菌O157等均无效;黄连碱、表小檗碱对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的MIC和MBC均分别为136.36、272.73 μg/mL;小檗碱对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为62.18、136.36 μg/mL,对无乳链球菌的MIC和MBC分别为136.36、272.73 μg/mL;掌叶防己碱对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的MIC和MBC均分别为62.18、136.36μg/mL.结果表明:用HSCCC制备生物碱,省时、方便,4种生物碱对金黄色葡萄球菌和无乳链球菌作用明显,对其余试验菌无效.