双抗体夹心酶联免疫吸附法检测鱼糜制品中鸡蛋卵白蛋白

目的 建立双抗体夹心酶联免疫吸附(sandwich enzyme linked immunosorbent assay,sELISA)法检测鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)的方法,组装定量检测鱼糜制品中OVA含量的ELISA检测试剂盒.方法 确定各步骤反应时间,使用棋盘法确定捕获抗体和检测抗体的最佳工作浓度,建立检测方法并对其性能进行评价.结果 反应最佳条件为:抗原孵育20 min,检测抗体孵育20 min,酶促反应显色10 min.兔抗OVA抗体为捕获抗体,工作质量浓度为1 μg/mL,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记兔抗OVA抗体为检测抗体,1:5000(V:V)稀释.采用四参数逻辑曲线拟合标准曲线,所建立sELISA方法的检测范围为8.5～200.0 ng/mL,检出限为 3.5 ng/mL,定量限为 8.5 ng/mL.批次内和批次间的变异系数分别为 2.31％～4.58％和 6.06％～12.23％;鱼糜基质中的回收率为80％～130％;测得28种常见食物样品中4种样品的交叉反应率小于0.002％;试剂盒在4℃保存 6 个月期间,标准品检测结果的变异系数为 4.29％～18.91％.结论 建立的方法快速、灵敏、准确、稳定性好,可用于鱼糜制品中鸡蛋OVA的定量检测.