利用Sonogashira偶联反应合成了 3种具有不同羟基数量的马来酰亚胺基烯二炔,它们可以通过马来酰亚胺促进的重排和环芳香化反应(MARACA)作用机制产生高活性的双自由基中间体.电子顺磁共振实验结果证实了体系中自由基中间体的产生.DNA凝胶电泳实验结果证实了这些烯二炔能够在生理温度下对质粒DNA产生裂解作用,并表现出浓度依赖性.蛋白质凝胶电泳实验结果表明烯二炔对蛋白质的降解能力与其产生自由基的能力一致.对于炔丙位上具有杂原子的高反应活性烯二炔,其可在低浓度(5 mmol/L)下破坏蛋白质主链结构的完整性致使蛋白质失活.研究结果为探究马来酰亚胺基烯二炔分子对病毒蛋白质等生物大分子的损伤作用奠定了基础,为开发此类分子潜在的临床应用价值提供了新的思路.
首先在产酶溶杆菌来源的赖氨酰内切酶(Lys-C)成熟肽序列的N端和C端分别融合人工前肽(MGSK)和 6×His标签,将密码子优化后的序列插入表达载体 pET-28a;其次以IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导型启动子 PT7 控制 Lys-C的高效表达,并针对重组菌株JM109DE3_PT7-LysC开展生物反应器高密度发酵生产Lys-C;再次收集和溶解包涵体得到Lys-C变性液,通过Sephadex G25层析脱除DTT(二硫苏糖醇),并在Lys-C复性液中添加前导肽(pre-N-pro)辅助成熟肽蛋白折叠;进一步通过切向流过滤、Ni NTA-Sepharose亲和层析和Sephacryl S-100层析等一系列纯化步骤,获得高纯度的重组Lys-C;最后进行酶切三肽底物和门冬胰岛素前体检测,分析重组Lys-C的活性水平.结果表明:重组Lys-C的发酵产量为2.4 g/L,经复性和纯化后的终产量可达48 mg/L;添加80 mg/L pre-N-pro促进了重组Lys-C的复性,复性后酶活相比于未添加pre-N-pro时提升了 4.8倍,最高可达到 13.8 U/L;经过多步纯化后,重组Lys-C的比酶活为 10.2 U/mg,且对于门冬胰岛素前体的酶切转化率可达 93.5%.
设计开发了直流电场作用下层流火焰实验系统,通过对甲烷-氧气非预混层流火焰施加直流电场,改变电极间距及燃烧当量比(氧气与甲烷实际物质的量之比与氧气和甲烷完全燃烧时物质的量之比的比值),对高速相机下火焰脉动幅度受电场影响的变化规律进行分析,探究了直流电场对火焰稳定性的作用及电场约束火焰的可行性.结果表明:对于存在脉动的层流扩散火焰,当对其施加高压直流电场时,火焰受到离子风的作用,其脉动幅度会逐渐减弱直至趋于稳定状态,且火焰稳定时所对应的电场强度与其初始的脉动幅度有关,初始振幅越大则火焰稳定所需的电压越高.同时,电极间距的改变也会影响火焰稳定时所需的电场强度,当电极间距改变较大时,对同一当量比的火焰,间距越大则所需的稳定电压就越高.
采用 1064 nm近红外激光对不锈钢筛网(SSM)进行表面刻蚀,通过调节激光器参数得到表面粗糙度最佳的SSM.以激光刻蚀的SSM为基体,壳聚糖(CS)为亲水组分,丙烯酰胺(AM)为单体,将不同含量的二氧化硅(SiO2)分散到体系中,加入光引发剂,以N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)为交联剂,利用紫外光引发自由基聚合制备水下超疏油油水分离复合筛网PAM/CS/SiO2@SSM.利用激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)、扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等测试方法对PAM/CS/SiO2@SSM进行表征,研究了不同CS组分和不同SiO2 添加量对复合筛网表面粗糙度的影响;采用重力驱动的方法分离油水混合物并研究了复合筛网的油水分离效率.实验结果表明:激光刻蚀筛网具有工艺简单、刻蚀快速且参数可控的优势;制备的PAM/CS/SiO2@SSM分离筛网水下油接触角为 155°,具有良好的亲水疏油性能;分别对液体石蜡、正己烷和石油醚进行油水分离实验,结果表明复合筛网对这 3种油品的分离效率分别为99.1%、98.8%和98.4%,具有较高的油水分离效率.
通过对市面上的奶茶产品进行调研和测定,结合人们日常消费习惯,以奶茶中总糖和咖啡因浓度的中位数为标准灌胃小鼠.在常规饲料和高糖高脂饲料喂养的基础上,使用C57 BL/6J雄性小鼠模拟人每天喝 1杯奶茶摄入的蔗糖和咖啡因量,以体重、血糖、血脂、炎症因子和组织学检查作为评价指标,研究蔗糖和咖啡因的持续摄入对小鼠生理代谢的影响.实验结果表明:所选取奶茶样品中总糖质量浓度范围为 25～135 g/L,咖啡因质量浓度范围为 190～853 mg/L;与常规饲料组相比,常规饲料加蔗糖和咖啡因组空腹血糖值由(4.27±0.06)mmol/L上升至(5.43±0.39)mmol/L,血清肿瘤坏死因子-α质量浓度由(89.48±2.85)ng/L上升至(112.94±1.76)ng/L,血清白细胞介素-6 质量浓度由(49.31±3.23)ng/L上升至(65.44±4.70)ng/L,体重增加值由(3.33±0.64)g下降至(2.45±0.51)g,血清甘油三酯浓度由(0.88±0.29)mmol/L下降至(0.74±0.04)mmol/L;与高糖高脂饲料组相比,高糖高脂饲料加蔗糖和咖啡因组体重增加值由(8.38±1.42)g下降至(3.67±1.23)g,血清甘油三酯浓度由(0.86±0.07)mmol/L下降至(0.71±0.06)mmol/L.长期摄入蔗糖和咖啡因混合溶液能使小鼠体重和血清甘油三酯下降,但会使空腹血糖和促炎因子增加.
