背景与目的 铁死亡是一种以铁依赖方式由脂质过氧化物过度积累引起的调节性细胞死亡,近年来发现铁死亡抵抗与肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)发生发展有关.细胞内抗氧化系统是抗铁死亡所必需的.本研究旨在探讨细胞外系统是否以及如何使LUAD细胞对铁死亡失去敏感性.方法 在本研究中,使用已建立的人肺成纤维细胞(MRC-5、WI38)、人肺腺癌细胞(H1650、PC9、H1975、H358、A549和H1299细胞系)、LUAD肿瘤及相匹配的癌旁正常组织、健康个体及LUAD患者的血浆,应用免疫组化和免疫印迹方法分析蛋白表达,实时荧光定量PCR(quantitative reverse transcription-PCR,qPCR)法分析mRNA表达.通过测定细胞活力、细胞死亡和脂质活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成评估细胞对铁死亡的反应.通过透射电镜观察外泌体,用点击化学法配合共聚焦显微镜检测花生四烯酸(arachidonic acid,AA)的定位.采用RNA pull down、RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)、光激活核糖核酸苷增强交联和免疫沉淀(photoactivatable ribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation,CAR-CLIP)等方法检测RNA和蛋白质之间的相互作用.用蛋白质组学方法来分析RNA调控蛋白,用代谢组学方法分析代谢物.细胞源性异种移植物(cell derived xenograft,CDX)模型、患者源性异种移植物(patient-derived xenograft,PDX)模型、细胞植入肺内LUAD小鼠模型和来自LUAD患者的血浆/组织标本被用于分子机制的验证.结果 LUAD患者血浆外泌体特异地降低了脂质过氧化,使LUAD细胞对铁死亡敏感性下降.可能的机制是在LUAD中,外泌体circRNA_101093(cir93)中维持了细胞内cir93的升高,调节AA,一种对铁死亡相关的质膜过氧化增加至关重要的多不饱和脂肪酸.对具体机制而言,cir93与脂肪酸结合蛋白3(acid-binding protein 3,FABP3)相互作用增加其表达,后者转运AA并促进其与牛磺酸的反应.因此,总体AA被降低,而N-花生四烯酰基牛磺酸(N-arachidonoyl taurine,NAT;AA和牛磺酸的产物)被诱导产生.值得注意的是,NAT在抑制AA合并到质膜中的作用也被揭示.在临床前的体内模型中,减少外泌体提高了以铁死亡为基础疗法的疗效.结论 外泌体和cir93是抑制LUAD细胞铁死亡敏感性的关键,阻断外泌体可能有助于未来LUAD的治疗.

药物洗脱支架(DES)在冠状动脉疾病的治疗中起到巨大作用,不但能机械支撑血管狭窄区,而且可以通过持续释放药物显著降低病灶处再狭窄率.然而,长期临床研究表明,载药DES在后期有引发血栓的风险.在DES表面载入基因药物,通过表面涂层输送系统局部缓慢释放治疗基因,能针对引起再狭窄的细胞过程进行修改.选择合适的治疗基因,可以抑制内膜增生,促进再内皮化,提高洗脱支架的有效性和安全性,是非常有前途的抗再狭窄方法.同时,良好的涂层材料不仅改善了支架表面的生物相容性,更能通过不同的基因药物输送系统有效控制治疗基因的释放速率.本文首先介绍了一部分针对再狭窄的治疗基因,在此基础上,综合阐述了基因缓释系统中使用的材料和技术,分析提炼了基因缓释系统的释放机理,举例分析了载基因洗脱支架的研究进展,并展望了该领域的发展前景.

目的研究Salvinorin A对原代培养的大鼠皮层神经元缺氧无糖（OGD）损伤的保护作用及其可能的机制。方法原代培养Sprague-Dawley胎鼠原代皮层神经元。实验分为两个部分,第一部分检测Salvinorin A是否具有神经保护效应,将培养的神经元分为正常对照组、单纯Salvinorin A组（只加入终浓度为10μmol/L的Salvinorin A,不做OGD）、OGD组和OGD加不同浓度Salvinorin A组（0.1μmol/L组、0.5μmol/L组、1μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组）,检测各组的乳酸脱氢酶（LDH）漏出率。第二部分检测Salvinorin A的神经保护机制是通过丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）3条途径中的何种途径发挥作用,将原代神经元分为正常对照组、OGD组、OGD+Salvinorin A组（OGD+SA组）、抑制剂+OGD+Salvinorin A组[U0126+OGD+SA组、SB200235+OGD+SA组、SP600125+OGD+SA组,U0126为细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）通路抑制剂、SB200235为P38通路抑制剂,SP600125为c-jun氨基末端激酶通路抑制剂],检测各组的LDH漏出率。结果第一部分实验:正常对照组的LDH漏出率与单纯Salvinorin A组的差异无统计学意义（P＞0.05）,OGD组、0.1μmol/L组、0.5μmol/L组、1μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组的LDH漏出率均显著高于正常对照组（P值均＜0.05）,1μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组的LDH漏出率均显著低于OGD组（P值均＜0.05）,0.1μmol/L组、0.5μmol/L组的LDH漏出率与OGD组的差异均无统计学意义（P值均＞0.05）。第二部分实验:U0126+OGD+SA组的LDH漏出率与OGD组的差异无统计学意义（P＞0.05）,但显著高于OGD+SA组（P＜0.05）;SB200235+OGD+SA组、SP600125+OGD+SA组的LDH漏出率均显著低于OGD组（P值均＜0.05）,但与OGD+SA组的差异均无统计学意义（P值均＞0.05）。结论 Salvinorin A对大鼠原代神经元OGD损伤具有保护作用,其机制与MAPK/ERK通路有关。

目的:制备一种姜黄素共聚物胶束以提高姜黄素的水溶性及其抗肿瘤活性.方法:采用乳化溶剂挥发法制备了载姜黄素的共聚物胶束(Cur/PTLl胶束),对其粒径、载药量、包封率和体外药物释放行为进行了考察;并采用MTT法考察了PTL1空白胶束和Cur/PTL1胶束的体外细胞毒作用.结果:制备了粒径在40 nm左右的载姜黄素共聚物胶束,载药量为9.78±0.29％,包封率为97.24±2.68％.体外药物释放实验表明,游离姜黄素在24h内的药物累积释放率达到90％以上,而Cur/PTL1胶束在24h内药物累积释放率为23.8％,能够持续释放14天,14天内累积释放率为85.9％,具有一定的缓释能力.MTT实验结果表明,当PTL1空白胶束浓度达到1 mg/mL时,细胞的存活率仍在90％以上;Cur/PTL1胶束组IC50为4.73± 0.23 μg/mL,游离姜黄素组IC50为6.42± 0.35 μg/mL.结论:实验结果表明,Cur/PTL1胶束可以作为一种有前景的纳米药物输送系统.

Objective To investigate the broad-spectrum antibacterial efficacy of chitosan(CHI) and its derivatives.Methods The antibacterial test of Pseudomonas aeruginosa was performed by CHI and quaternized chitosan(QCHI).The volumes of per 1 mL at 0,3,6,9 and 12 h by CHI and QCHI were determined.The results were compared with those of control hole volume.The Pseudomonas aeruginosa RNA was extracted simultaneously.The ahpF,pa3187,aprA and rpoS genes were amplified,and their expressions were determined.The remaining Pseudomonas aeruginosa were cultured by LB medium for 3 d.The floating bacteria were flushed by PBS buffer solution,and were stained by crystallization violet.After decolorizing by 95% ethanol,the biofilm formation function of Pseudomonas aeruginosa was analyzed by enzyme-labeled analyzer at 570 nm.Results There were significant differences between CHI and QCHI hole volumes of live bacteria after culturing 6 h compared with control hole volumes,but there was no obvious difference CHI and QCHI volumes.The pa3187 expression was increased by CHI and QCHI,but aprA expression was decreased by them.QCHI can decrease ahpF expression,but CHI can improve ahpF expression.The rpoS expression was also decreased by QCHI.Biofilm formation showed that the significant inhibitory effect could be seen in Pseudomonas aeruginosa biofilm formation by CHI and QCHI from culturing 6 h.Conclusions In a certain extent,CHI and QCHI can inhibit the proliferation and biofilm formation of Pseudomonas aeruginosa.