家庭农场是与现阶段农村发展特点相适应,并可被引导成为畜禽粪污治理的社会化组织,开展种养结合生态循环模式,对推进污染治理和乡村振兴意义重大.作为新型农业经营主体的重要主体,家庭农场高质量发展需要理论研究与具体实践的良性互动.本文基于发展分析和一个家庭农场的实践,以期为从事种养结合型家庭农场提供参考.

[目的]表达具有生物学活性的肠炎沙门菌(Salmoniella Enteritidis)avrA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究肠炎沙门菌avrA蛋白对猪肠道细胞免疫功能的影响提供参考.[方法]根据GenBank中肠炎沙门菌avrA蛋白全基因序列(基因ID:1254388)设计引物扩增avrA基因,回收的目的片段与表达载体pGEX-4T-1进行重组、克隆,用限制性内切酶和基因测序验证重组表达质粒的正确性.将验证后的重组表达质粒转化大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞,并在不同条件下对重组表达菌进行诱导表达.应用SDS-PAGE和Western blotting检测avrA蛋白的表达情况.将酶切测序后目的基因序列进行BLAST比对分析,并用ExPASy-Translate Tool软件预测avrA蛋白的氨基酸组成.应用生物信息学软件预测avrA蛋白的跨膜结构域、二级结构、三级结构及抗原性.[结果]肠炎沙门菌avrA基因CDS序列全长为909 bp,编码302个氨基酸.限制性内切酶及基因测序分析结果表明,重组表达质粒pGEX-4T-1-avrA构建成功.SDS-PAGE和Western-blotting结果表明,重组菌所表达的avrA蛋白为可溶性蛋白.重组菌在15℃诱导16 h表达的蛋白量为10 mg/L,蛋白溶解度为40％.生物信息学分析表明,avrA蛋白为膜外蛋白,该蛋白的16-301位氨基酸具有来自超家族YopJ丝氨酸/苏氨酸乙酰转移酶的保守结构域;avrA蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链分别占43.71％、39.40％和16.89％;avrA蛋白三级结构预测结果与二级结构一致;avrA蛋白有9个与B细胞结合的抗原表位,分别在第5-40、51-68、80-92、94、101-109、146-157、160-168、199-231和236-298位氨基酸处.[结论]试验成功克隆出肠炎沙门菌avrA基因,并成功构建重组表达质粒和表达菌,诱导表达的avrA蛋白为可溶性表达;avrA蛋白为膜外蛋白,有9个能与B细胞结合的抗原表位.本研究结果为进一步制备检测肠炎沙门菌感染的抗体提供参考.

通过优化LAMP反应体系中镁离子、甜菜碱、dNTP等反应组成成分,而后进行特异性试验,并优化钙黄绿素与氯化锰的比例放入LAMP体系内,最后应用LAMP检测含有小肠结肠炎耶尔森氏菌(耶氏菌)的肉品,从而建立一种能够检测耶氏菌并通过肉眼观察和判断试验结果的LAMP方法.结果 显示,优化的25 μL反应体系如下:9 mmol/L Mg2+、1.8 mmol/L dNTPs、1.0 mol/L betaine、0.2 μ mol/L外引物、0.8μmol/L内引物、1 μL Bst DNA polymerase(8 U/μL)、2.5 μL 10×thermpol reaction buffer、228 μmol/L钙黄绿素、324 μmol/L氯化锰,反应温度65℃孵育60 min.LAMP检测耶氏菌基因组DNA的最低检测限是85.3×101ng/μL,比文献PCR方法灵敏性高出2个数量级.LAMP方法对耶氏菌gDNA的最低检测限对应的基因拷贝数最低检测限是35,对应的CFU最低检测限是7×102 CFU/mL.本试验建立的这种可视化的检测耶氏菌的LAMP方法,为耶氏菌的检测提供了一种新的参考.

为研究枫泾猪保种群乳头数性状的遗传规律,统计分析了镇江牧苑动物科技开发有限公司种猪场23头种公猪、103头母猪、3612头仔猪的乳头数资料.结果显示,保种群种公猪、母猪及其后代的总乳头数(个)平均分别为17.14、16.86、16.65,种公猪、母猪间差异不显著(P>0.05),种公猪、母猪与后代间差异均极显著(P<0.01);平均乳头数右侧比左侧分别多0.50、0.25、0.25,左右两侧间差异均极显著(P<0.01).总乳头数性状的表型相关系数父子间、母子间、父母双亲均值与子间分别是0.2723、0.2182、0.2528,均达极显著水平(P<0.01);用亲子回归法、公畜内母仔回归法、父系半同胞相关法估算的遗传力分别为0.2035、0.1059、0.9040,也均达极显著水平(P<0.01).镇江牧苑动物科技开发公司种猪场枫泾猪保种群的乳头数性状在近10年内遗传稳定.

通过云班课在"养猪与猪病防治"课程教学中的实践,信息化教学模式和手段更能调动学生学习兴趣和能动性,增强师生互动,提高教学效果,但这一切都是基于科学的课堂设计、优质的资源、有创意的活动和及时的跟踪反馈.

为挖掘感染A L V-J汶上芦花鸡的肝差异表达致病相关基因.本研究以汶上芦花鸡为试验素材,分别在42和300日龄进行ALV血液病毒分离检测筛选ALV阴性和阳性个体,对ALV阳性个体有病理变化的肝组织和阴性个体肝组织进行PCR检测,分别选取3只ALV阳性(G1组)和阴性(G2组)个体的肝组织,并对G1组PCR产物测序、聚类分析确定ALV亚型,利用RNA-Seq测序技术筛选差异表达基因,并进行功能分析,利用荧光定量qRT-PCR对部分差异表达基因进行验证.结果表明,G1组样品经PCR检测、PCR扩增产物测序和聚类分析确定ALV为J亚型,转录组分析发现,共有42个差异基因在GO和KEGG中富集,其中,上调基因18个,下调基因24个.随机选取的5个差异表达基因qRT-PCR验证结果与RNA-Seq测序结果相一致.GO分析显示,差异表达基因主要涉及细胞过程、代谢过程、对刺激的反应、免疫系统等;KEGG分析显示,差异表达基因主要富集在细胞过程、信号传导、疾病、新陈代谢等信号通路.本研究通过转录组分析发现了影响ALV-J致病性的多个基因和关键信号通路,为深入了解ALV-J致病的分子机制提供了思路.

试验选择体重80 kg左右的杜长大三元杂交育肥猪96头,随机分为4个处理组,每个处理4个重复,每个重复6头猪,研究日粮中添加α-硫辛酸对育肥猪免疫功能的影响.对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加300、600和900 mg/kg的α-硫辛酸,试验期28 d.结果表明,α-硫辛酸添加组血清中IgG含量、IL-2的浓度均显著高于对照组,对IgA和IgM含量均无显著影响.血清中IL-6和TNF-α随着α-硫辛酸添加水平增加而下降,其中600和900 mg/kgα-硫辛酸添加组的IL-6和TNF-α浓度与对照组相比下降显著,900 mg/kg组的IL-6浓度与300 mg/kg组差异达到显著水平.这表明硫辛酸可以调节免疫球蛋白和细胞因子水平,提高育肥猪体液免疫水平,进而改善其免疫功能.α-硫辛酸的适宜添加水平为600～900 mg/kg.

试验拟探讨α-硫辛酸对氧化应激育肥猪甲状腺激素、炎性细胞因子及抗氧化能力的影响.试验选用体重(72.64±4.78) kg的DLY育肥猪60头,采用2×2因子试验设计,随机分为4组,每组3个重复,每个重复5头猪.即日粮类型(0、900 mg/kg α-硫辛酸)和氧化应激处理(注射diquat溶液或生理盐水),试验期28 d.结果 发现:日粮添加α-硫辛酸和腹腔滴注diquat对14 d时育肥猪血清中超氧化物歧化酶(SOD)、白介素-2(IL-2)、丙二醛(MDA)和28 d的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)产生极显著或显著的互作效应.腹腔滴注diquat在14 d和28 d时,极显著或显著降低育肥猪血清中SOD、GSH-Px、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、过氧化氢酶(CAT)活性、三碘甲腺原氨酸(T3)含量和总抗氧化能力(T-AOC)、IL-2含量,极显著或显著提高甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)和白介素1β (IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、MDA含量.饲粮添加α-硫辛酸在14d和28 d时,极显著或显著提高育肥猪血清中SOD、GSH-Px、GST含量、T3和T-AOC、IL-2含量,极显著或显著降低IL-1 β、IL-6、TNF-α、MDA含量.结果 表明,补充硫辛酸可逆转氧化应激育肥猪血清T3降低,T4和TSH升高的激素模式,并可通过调节氧化应激育肥猪抗氧化能力和血清中多种细胞因子的生成,增强免疫功能,从而减弱氧化应激.

通过比较舒泰与陆眠宁9个不同浓度组合C57BL/6小鼠麻醉的诱导时间、麻醉时间和恢复时间,初步评价舒泰和陆眠宁的麻醉效果,探索舒泰与陆眠宁配伍对C57BL/6小鼠麻醉的精准控制方案.结果 表明:随着2种药物浓度的增加,诱导时间逐步缩短,麻醉时间和恢复时间逐渐增加,但剂量和时间并不呈线性相关关系,增加舒泰剂量产生的效果优于陆眠宁.在不产生可逆性眼球发白及死亡的情况下,舒泰30mg· kg-1配比陆眠宁40 mg·kg-1的组合能最快诱导麻醉,麻醉时间也最长.

在当前非洲猪瘟防控形势下,校内外养猪实训基地关闭了学生实训的大门.课程教学团队通过及时调整授课计划和实训实习方案,采用信息化教学手段和方法、选用优质教材、把猪请进校等措施,从而达到活跃课堂氛围,调动学生学习的主动性,提高教学效果,让学生掌握养猪技能.

为定量检测梅山猪公猪精子动态学参数,丰富梅山猪种质特性研究基础.采用计算机辅助精液分析系统对国家级梅山猪保种场6头成年种公猪精液进行实时检测.结果显示:梅山猪公猪精液中快速精子占74.69％,前向性运动精子占61.45％,a级精子占47.30％;根据精子前向性运动分级标准,梅山猪公猪精子曲线速度(VCL)、直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、线性指数(LIN)、直线指数(STR)、头部侧向运动平均振幅(ALH)、鞭打频率(BCF)分别为(63.23±0.26)μm/s、(18.88±0.13)μm/s、(33.89±0.15)μm/s、29.86％、55.71％、(3.16±0.013)μm、(6.13±0.028)Hz;在运动速度分级标准、世界卫生组织(WHO)分级标准、前向运动判断标准这3种分类标准中,除LIN、STR和振动指数(WOB),上述其他指标均呈极显著差异(P<0.01).研究首次及时准确地定量分析了梅山猪公猪精子的动态学参数,丰富了梅山猪的研究素材.

为检验实行教考分离改革的效果,对2013—2014第一学期实行教考分离的《动物遗传繁育》课程试卷进行了难度、区分度、信度、效度及正态分布等的深入分析,结果表明成绩呈负偏态分布,集中分布在平均数周围,差异较小,难度系数为0.69,克伦巴赫系数为0.624,说明本次试卷难度适中,信度中等,但也存在试题难易度分配不当等问题,提示教师在今后命题过程中应予以重视.

猪群生长需要一定的环境和空间,为保证猪群健康生 长,并提高生产管理水平,畜牧兽医工作者必须从动物防疫、采光、通风换气、生产流程、动物福利、管理效率等方面科学规划猪场和合理布局猪舍.本文以中小型猪场为例,介绍猪场规划和猪 舍布局的基本原理和方法,以供参考.

为了检测不同品种公猪精子运动参数、从运动学角度探讨品种间精子活力的差异,试验利用计算机辅助精子分析系统对梅山猪、长白猪、大白猪、杜洛克猪和巴克夏猪的精子活力及单个精子运动参数进行检测.结果表明:梅山猪的前向运动比例(61.45％)最高,其次为巴克夏猪(60.68％),最低的为大白猪(53.44％);梅山猪总运动(前向运动+非前向运动)活力最高(99.79％),长白猪最低(94.55％).前向运动精子参数中,梅山猪有3个指标靠前,分别是曲线速度、平均路径速度、头部侧向运动平均振幅,大白猪只有鞭打频率指标靠后;在总运动活力参数中,梅山猪有6个指标靠前,分别是曲线速度、直线运动速度、平均路径速度、振动指数、头部侧向运动平均振幅、鞭打频率,长白猪有5个指标靠后,分别为曲线速度、直线运动速度、平均路径速度、振动指数、头部侧向运动平均振幅.说明总运动活力对运动参数的影响更大.

分析气温对母猪人工授精受胎率的影响.按月份整理某猪场一年度内12843头母猪(长白×大白)第一次情期配种受胎率数据.结果发现1月份和2月27日～5月21日的受胎率极显著高于全年平均水平(p<0.01);1月30日～2月26日和5月22日～9月10日以及11月16日～12月3日的受胎率与全年平均水平比较差异不显著(p﹥0.05);9月11日～11月5日和12月4日～12月31日的受胎率显著低于全年平均水平(p<0.05).夏季要做好防暑降温工作和对夏秋两季因高温产生高温后续效应进行饲养管理以增加受胎率,同时要加强猪场自身的管理与经营.

为了定量检测和比较不同品种公猪的精子活力,试验采用计算机辅助精子质量分析技术(CASA)检测长自猪、大白猪、杜洛克猪、巴克夏猪和梅山猪的精子活力.结果表明:运动速度分级标准中,梅山猪快速运动精子的比例最高为74.69％,长白猪的快速运动精子比例为50.27％,总体来看在50.27％～ 74.69％之间;世界卫生组织(WHO)分级标准中,梅山猪的a级和b级比例均为最高,分别为47.30％、41.54％,a级+b级比例梅山猪最高,为88.84％,长白猪最低,其他品种在74.06％～78.22％区间波动;前向性运动分级标准中,梅山猪的前向运动精子比例最高,为61.45％,大白猪最低,仅为53.44％.说明三个精子活力分类标准中,前向性运动分级标准最能真实客观反映精子的运动速度和直线性;而梅山猪的精子活力优于其他外来品种.

To guide the breeding of Sumei pigs,the research were summarized datas of generation Zero barkshire×Meishan(BM0) and hybrid cross BAME first generation (BM1),second generation (BM2) piglets and replacement gilts in each stage of weight,daily gain and 6 month old body size,and comparized with Meishan pig breed at the same growth stages since the development of the Sumei pig breeding.The results showed that the weight of piglets and replacement gilts of BM1 and BM2 were higher than that of BM0 and M at the same stage,and BM1 was higher than that of BM2 at the partial stage;The average daily weight of piglets and replacement gilts of BM0,BM1,BM2 were higher than that M at the same stage,except the average daily weight gain of BM0 and BM1 in 21 day old piglets;BM0,BM1,BM2 of 6 month old replacement boar and sow body size characters of body length,body height,chest circumference,leg hip circumference and tube circumference were improved compared with M,abdominal circumference and body length,chest ratio compared with M ratio were increased,which displayed thin meat type direction.The traits of M0,BM1 and BM2 all reached the target of breeding and showed stability in the three generations,and BM0,BM1 and BM2 have a good inheritance of the reproduction characteristics of M and growth and meat production of barkshire.

旨在探明禽白血病病毒(ALV)在地方鸡种惠阳胡须鸡和汶上芦花鸡的垂直传播特性.以惠阳胡须鸡和汶上芦花鸡为素材,43周龄时进行血液与精液ALV病毒分离检测,结合系谱追溯筛选个体组建两个大试验组:阳性惠阳胡须鸡♂×阴性汶上芦花鸡♀;阴性汶上芦花鸡♂×阳性惠阳胡须鸡♀.后代群体隔离饲养,进行1日龄胎粪p27抗原、42日龄泄殖腔拭子p27抗原和病毒分离检测,并对ALV分离检测阳性样本进行PCR扩增、测序和遗传演化分析确定ALV的亚型.结果表明,阳性公鸡后代胎粪p27抗原、泄殖腔拭子p27抗原和血浆病毒分离阳性率显著高于阳性母鸡后代(P＜0.05),阳性公、母鸡后代病毒分离阳性率分别为8.54％和0％;阳性公、母鸡S/P值高低与其后代的p27抗原阳性率没有显著相关性(P＞0.05);胎粪和棉拭子p27抗原的假阳性率较高,且与病毒分离相比,胎粪p27抗原检测的漏检率为15％;序列分析和遗传演化分析结果表明病毒分离检测阳性个体均为ALV-J.公鸡在地方鸡种惠阳胡须鸡和汶上芦花鸡ALV垂直传播中发挥重要作用,在禽白血病净化过程中要加强对于公鸡感染的监测.

研究时间和密度对公猪精子活力和运动参数的影响,采用计算机辅助精子分析(CASA)系统在采精后0、10、20、30、60 min时检测精子运动参数,比较精子活力[用前向运动(PR)的精子百分率表示]、精子活动率[用前向运动和非前向运动(NP)的精子百分率表示]、精子运动速度等参数在不同时间节点不同密度下的变化情况.结果显示,精子活力和精子活动率整体上均表现为随时间延长而降低的趋势,在20 min时均极显著低于0 min时的检测水平,60 min时两者的检测水平降幅分别达29.91％、16.48％.在1.0亿个/mL及以下(D1)、1.0亿～1.5亿个/mL(D2)、>1.5亿～2.0亿个/mL(D3)、2.0亿个/mL以上(D4)密度级别下,60 min时精子活力和精子活动率检测结果降幅不一,D1降幅最大,D4最小;曲线速率(VCL)、直线速率(VSL)和平均轨道速率(VAP)等精子运动速度指标均呈现随时间而下降现象;线性(LIN)、直向(STR)和摆动(WOB)变化较平缓,上下波动幅度较小,交打频率(BCF)中,0 min时检测水平最高,为(6.059±0.197)Hz,之后呈现明显下降趋势,至60 min时下降1.201 Hz,降幅为19.82％,差异极显著(P<0.01),0 min时与20和30 min时比较,差异显著(P<0.01).结果表明,密度大的精液缓冲能力强,精子活力和运动参数降幅小,密度小的精液缓冲能力弱,精子活力和运动参数降幅大;精液品质检查和精液稀释等工作最好在采精后10 min内完成.

实践教学内容与评价关系到学生职业认知和能力锻炼,依托职业技能大赛,对高职畜牧兽医专业实践教学内容与评价有益探索,对培养畜牧兽医专业技术技能型人才有重要的促进作用.