布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺借鉴、采纳布氏菌病活疫苗(S2株)成熟的冻干工艺及菌液的配比,对冻干保护剂的选择进行了优化.我们选择蔗糖明胶保护剂和蔗糖脱脂乳保护剂,保护剂与布鲁氏菌Rev.1株菌液以1:6的比例混合,冻干后测定其活菌含量.结果显示,3批使用蔗糖脱脂乳保护剂的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12×109CFU/mL、12.44×109CFU/mL、12.65×109CFU/mL;使用蔗糖明胶再加入终浓度约1％硫脲的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.34×109CFU/mL、12.62×109CFU/mL、12.91×109CFU/mL;使用蔗糖明胶的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.22×109CFU/mL、12.64×109CFU/mL、12.8×109CFU/mL.3种冻干保护剂对冻干疫苗的活菌含量影响无明显差异,但使用蔗糖明胶保护剂制备冻干疫苗时加入适量硫脲可适当增加冻干疫苗的耐热性,因此我们选择10％明胶、20％蔗糖冻干保护剂与菌液以1:6配比比例混合,再加入终浓度约为1％的硫脲作为布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺.

为了用激流式生物反应器纸片微载体培养BHK-21（C-13）细胞制备兽用狂犬冻干活疫苗,采用纸片微载体培养BHK-21（C-13）细胞,接种狂犬病病毒Flury株（LEP）,测定病毒液滴度。将收获的病毒液制备兽用狂犬冻干活疫苗,按照狂犬病活疫苗规程进行检验。结果显示,3批收获的病毒液滴度平均达105.0LD50/0.03 mL;3批实验疫苗检验结果均符合质量标准。实验证明激流式生物反应器纸片微载体培养BHK-21（C-13）细胞制备兽用狂犬冻干活疫苗提高了细胞密度、病毒滴度,增加了病毒液收获体积,减小了批间差,保证了产品均一性,适合工业化大生产。