目的 评价水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)在食蟹猴体内的长期毒性.方法 将50只食蟹猴随机分为5组,分别为阴性对照组(0.9％氯化钠,2.5 mL/只)、细胞基质对照组(SV-1细胞基质,5剂/只)、市售疫苗对照组(5剂/只)、供试品低剂量组(1剂/只)和高剂量组(5剂/只),每组10只,雌雄各半.经动物单侧或双侧后肢皮下注射,每点注射量不超过2 mL,每3周给药1次,共3次.观察动物临床表征,并进行体重、体温、心电、血细胞计数、凝血功能、血液生化、尿液、眼科、免疫指标、大体解剖、主要脏器称重、组织病理学等检查.结果 各组动物临床表征、体重、体温、心电图参数、眼科检查、血液学、凝血功能、血液生化、尿液分析、T淋巴细胞亚群、细胞因子和PBMCs分泌IFNγ的淋巴细胞斑点数等指标均未见具有毒理学意义的规律性改变.ELISA法测定血清水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)特异性IgG抗体结果表明,给药后市售疫苗对照组、供试品低剂量组和高剂量组所有动物均可检测到抗体,最高抗体滴度为1∶800,该结果与荧光抗体膜抗原(fluorescent antibody to membrance antigen,FAMA)法检测结果具有可比性.各组动物脏器重量和脏器系数均未见与给药相关改变,组织病理学检查均未见与给药相关的系统毒性病理改变.结论 水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)在食蟹猴体内未见与其相关的全身毒性反应,安全剂量为5剂/只.

目的 观察SD大鼠注射水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)后可能出现的毒性反应、毒性反应的恢复情况及可能出现的延迟性毒性反应.方法 将SD大鼠随机分为8组,1～4组(主试验组)分为阴性对照组(生理盐水,2.5 ml/只)、细胞基质对照组(SV-1细胞基质,2.5ml/只)、疫苗低剂量组(水痘减毒活疫苗l剂)和疫苗高剂量组(水痘减毒活疫苗5剂),每组30只;5～8组(卫星组)分组同1～4组,每组10只.均经大鼠颈背部皮下单点注射,每2周注射1次,连续注射3次,末次免疫后6周为恢复期.试验期间进行一般临床观察、体重、食量、体温、眼科、血细胞计数、凝血功能、血液生化、免疫指标、大体解剖观察、主要脏器称重、组织病理学等检查.结果 试验期间,主试验组各组动物一般状况良好,各项指标检测均未见有毒理学意义的规律性改变,且动物脏器重量均未见与疫苗相关的明显改变,各组织脏器大体解剖观察均未见明显与给药相关的毒性病理学改变,注射局部组织未见明显与疫苗相关的刺激性反应;卫星组大鼠免疫前血清抗体均为阴性,末次免疫后2周,阴性对照组和细胞基质组抗体检测结果均为阴性,低剂量组和高剂量组抗体阳转率100％,抗体几何平均滴度(GMT)分别为1∶73.5和1∶111.4,仅有部分大鼠可检测到分泌IFNγ的T淋巴细胞.结论 水痘减毒活疫苗(SV-1细胞)经大鼠长期毒性试验未见明显毒性反应,初步证实该疫苗具有良好的安全性及有效性.

目的 研究水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株在人二倍体细胞株SV-1上的遗传稳定性,并对不同代次毒株进行全基因测序及差异位点分析.方法 将VZV Oka株在SV-1细胞株上连续传至48代,检测病毒滴度.对VZV Oka株33、35、38、39及48代病毒进行全基因测序,应用DNASTAR.Lasergene.v7.1软件进行数据的拼接及序列分析.结果 VZV Oka株在SV-1细胞上连续传代获得的33～48代病毒滴度在4.000 ～4.625 lgCCID50/ml之间,病毒滴度的算数平均值为4.292 lg CCID50/ml; VZV Oka株基因组全长125 114 bp,GC含量46％;33、35、38、39、48代病毒的核苷酸序列同源性为99.99％,这5代病毒与标准疫苗株V-Oka的核苷酸序列同源性为99.96％;VZV Oka株在MRC-5、SV-1细胞上制备的38代病毒全基因序列有1个差异位点;本研究中的各代次病毒基因序列高度同源,与Varivax和Varilrix疫苗株、野毒株Dumas及亲本株p-Oka相比,与疫苗株V-Oka的同源性最高.结论 VZV Oka株在SV-1细胞上的适应性及遗传稳定性均良好.

目的 观察噬菌体对阴沟肠杆菌所致皮下脓肿的抗感染作用,为噬菌体疗法应用于细菌性感染提供依据.方法 家兔的侧背部皮下注射阴沟肠杆菌(4×107 CFU/mL)造成皮下脓肿,且脓肿的持续时间应在4d以上.在脓肿的部位注射噬菌体(1×109 PFU/mL)后,测量脓肿面积的大小、计数脓肿内细菌和噬菌体的数量.结果 噬菌体治疗组动物的脓肿面积和脓肿部位的细菌数量明显低于对照组(P＜0.05),而噬菌体的数量虽高于皮下单独注射噬菌体的数量,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 噬菌体对阴沟肠杆菌所致皮下脓肿的治疗是有效的,提示噬菌体疗法对阴沟肠杆菌的感染具有潜在的应用价值.

目的 纯化B型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA).方法 使用不同浓度的菠萝蛋白酶酶切B型流感病毒HA,超速离心获得含HA的上清后,经蔗糖密度梯度离心进行纯化,HPLC分子筛分析纯化效果.纯化后的蛋白经糖苷酶PNGaseF处理后,切取丰度较高的蛋白条带,进行质谱鉴定.结果 病毒蛋白与菠萝蛋白酶蛋白含量的最佳比例为40:1;5％ ～ 30％梯度浓度的蔗糖能很好地去除低相对分子质量的蛋白,流感病毒内丰度较高的NP及M蛋白得到很好的去除;纯化的HA蛋白的纯度大于90％,且HPLC分析显示仅有1个主峰,均一性良好.结论 优化了B型流感病毒HA蔗糖密度梯度离心纯化方法,获得了高纯度的HA蛋白,为制备HA标准抗血清奠定了基础.

Objective To develop and verify a fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for infectious titer of live attenuated mumps vaccine.Methods Primers and TaqMan fluorescent probe were designed specific to the conserved region of hemagglutinin (H) gene of live attenuated mumps vaccine virus strain S79.The final product prepared with strain S79,with a lot No.of 05008,was served as a reference.Vero cells were inoculated with the reference or test sample,then broken by hypoosmotic method combined with freeze-thawing method,of which the supematant was collected and determined by fluorescent quantitative RT-PCR.The time for virus infection was optimized,and the developed method was verified for specificity,precision and accuracy.Results The optimal time for virus infection was 18 h.The developed fluorescent quantitative RT-PCR assay was specific to live attenuated mumps vaccine,while no amplification curves were observed in the vaccine after inactivation,varicella virus,rabies virus,measles virus,rebulla virus or Vero cells.The relative standard deviations (RSDs) of six groups of data on samples at four concentrations (1,1 ∶ 5,1 ∶ 52 and 1 ∶ 53) were less than 5％.The R2 values of regression equation of standard curves of samples at four concentrations (1,1 ∶ 5,1 ∶ 52 and 1 ∶ 53) determined by various personnel on various dates were more than 0.97,with RSDs of less than 5％.The difference between determination results of 11 batches of live attenuated mumps vaccine by the developed method and by CPE method was not more than 0.2 LgCCID50/ml,which showed no significant difference (P ＞ 0.05).Conclusion The developed fluorescent quantitative RT-PCR assay for infectious titer of live attenuated mumps vaccine showed high specificity,precision and accuracy,which was rapid,simple,and suitable for the in-house quality control during production.

To analyze the quality risks during vaccine production related to the personnel,utilities,equipments,raw materials,manufacturing process,and cleaning environments.The corresponding quality risk control methods were proposed after indentifying many factors which would have impacts on the quality and safety of vaccines.