为了提高课堂教学质量,作者教学团队在2018级109名临床本科生的"医学生物化学与分子生物学"教学中开展对分课堂.将每一知识单元的教学分为3个环节:首先教师讲授主体框架和重点难点;随后学生进行当堂自主学习;最后为课堂讨论阶段,学生进行分组讨论,教师给予及时反馈和总结.进行教学评价时,对分课堂模式教学得到绝大部分学生认可,提高了学生的学习主动性,能够培养团队合作精神和交流沟通技巧.

随着信息时代的到来,计算机技术、互联网技术的高速发展为线上线下相结合的混合式教学模式提供了无限可能.混合式教学指线上授课、自主学习与线下面授教学的混合,强调借助丰富的媒体化资源,鼓励自主、合作与碎片化学习,是对传统教学的内涵式提升和外延式发展.据调查,在新冠疫情发生后有76.5％的高校教师愿意采用"线上+线下"的混合式教学,有过在线教学经历的教师大多数对在线教学持积极的接受态度,不愿意继续采用混合式教学的教师比例只有9.8％[1],说明教师通过自身的教学实践逐渐认识到了在线教学的优势.

目的:建立702糖浆中何首乌、鸡血藤、钩藤的薄层色谱鉴别及何首乌中有效成分2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷)的含量测定方法,为702糖浆的质量控制提供依据.方法:采用薄层色谱法(TLC)定性鉴别702糖浆中的何首乌、鸡血藤、钩藤等成分,采用高效液相色谱法(HPLC)测定二苯乙烯苷的含量.结果:何首乌、鸡血藤、钩藤等的TLC斑点清晰、阴性对照无干扰,具有较强的特异性;二苯乙烯苷在1.014 6～25.019 0 μg/mL范围内与峰面积呈现良好线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为99.6％,RSD为1.58％;各批样本间二苯乙烯苷含量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:该方法可以定性鉴别702糖浆并测定其有效成分的含量,且操作简便,重复性好,稳定性高,可用于702糖浆的质量控制.

随着虚拟仿真技术和人工智能技术的日趋成熟,人们逐渐意识到虚拟仿真实验在教育领域中具有巨大应用价值.如何在实验教学中合理运用虚拟仿真实验成为教育者们关注的热点之一.文章概述了我国虚拟仿真实验项目的建设情况,虚拟仿真实验与传统实验的特征以及虚实结合实验教学方法的优势,并探讨虚实结合教学模式在医学研究生分子生物学实验教学中的应用.这将为提升分子生物学实验教学质量和培养具有科研创新能力的医学研究生提供重要参考.

课程质量是人才培养质量的核心.人体代谢与疾病是广西医科大学一门重要的教学改革课程,它将物质代谢的基础知识与临床应用有机融合.文章结合多年的教学实践,对PBL+LBL教学模式引入课程的重要性、教学目标设定、教学实施方案、考核方式及反馈、存在问题及改进措施进行了深入探讨,为高等医学院校基础课程建设及教学改革提供了有益的经验.

从绞股蓝转录组挖掘可能与绞股蓝皂苷生物合成相关修饰酶基因细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP)及UDP-糖基转移酶(UDP-dependent glycosyltransferase,UGT)基因的cDNA进行克隆并开展了以下研究.根据课题组前期绞股蓝转录组数据,筛选CYP及UGT Unigenes,利用RT-PCR克隆ORF全长,并结合生物信息学对其编码蛋白进行功能分析,最后通过荧光定量PCR验证其在根、茎、叶的差异性表达.结果 克隆得到两个ORF序列,分别命名为CYP94A1和UGT91A1;CYP94A1序列包含1 509 bp的开放阅读框架,编码一条含503个氨基酸残基的肽链,具有CYP保守结构域;UGT91A1序列包含1 383 bp的开放阅读框架,编码一条含461个氨基酸残基的肽链,具有UGT保守结构域.这两个基因的转录表达均具有组织特异性,在叶或茎中的表达均高于根.CYP94A1和UGT91A1的克隆、转录表达及生物信息学分析为进一步挖掘绞股蓝中CYPs、UGTs及功能验证提供了帮助,增加对CYP和UGT两个超基因家族的认识.

目的 探索扶芳藤总三萜对D-半乳糖诱导的小鼠衰老模型抗氧化作用.方法 取健康清洁级雄性昆明小鼠75只,以皮下注射D-半乳糖(D-galactose)方法建立衰老小鼠模型;并将小鼠以单纯随机抽样法分为阳性药物组、模型组、扶芳藤总三萜高、低剂量组及正常对照组,每组15只,各组每天按预设方案给药连续21 d后,检测小鼠血清、心脏、肝脏及骨骼肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)三项抗氧化指标.结果 与对照组比较,高、低剂量组小鼠的血清T-AOC及GSH-Px水平均升高,其中低剂量组的T-AOC水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但其他各组的T-AOC及GSH-Px水平升高不明显,差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,高、低剂量组小鼠心脏组织的T-AOC、CAT、GSH-Px水平均升高,其中高、低剂量组的T-AOC水平明显高于对照组,高剂量组CAT水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但其他各组的T-AOC、CAT、GSH-Px水平升高不明显,差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,高、低剂量组小鼠肝脏组织的T-AOC、CAT、GSH-Px水平均升高,其中高剂量组的CAT水平明显高于对照组,高剂量组的GSH-Px水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但其他各组的T-AOC、CAT、GSH-Px水平升高不明显,差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,高、低剂量组小鼠骨骼肌组织的T-AOC、CAT、GSH-Px水平均升高,其中高、低剂量组的T-AOC水平明显高于对照组,高剂量组的CAT水平明显高于对照组,高剂量组的GSH-Px水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但低剂量组的CAT水平和GSH-Px水平升高均不明显,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 扶芳藤总三萜可提高衰老小鼠抗氧化能力,具有抗衰老功效.

目的 探讨肿节风SCAR分子标记克隆与验证.方法 从随机引物库中挑选出45条10碱基的随机引物,采用RAPD方法对4种不同产地肿节风基因组DNA进行扩增,从中筛选出S41号引物扩增的RAPD分子标记,克隆测序后,经比对确定其同源序列获得SCAR分子标记,设计引物,对9种不同产地的肿节风和3种同科混淆品鸡爪兰、及己与金粟兰进行特异PCR扩增,验证引物特异性.结果 RAPD扩增获得中药肿节风的SCAR分子鉴定标记,据此设计出鉴定肿节风的特异引物,PCR扩增显示肿节风在500 bp左右处均出现有条带,与预期扩增长度基本相符,而3种同科植物均未出现条带.结论 本研究获得肿节风SCAR分子标记,并设计出特异引物,可用于鉴别该药材与其混淆品.

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)中黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)基因启动子甲基化程度与MAGE-D4 mRNA表达水平及患者临床病理特征的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测38例NSCLC患者癌组织及其癌旁组织中MAGE-D4启动子甲基化程度,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测组织中MAGE-D4 mRNA相对表达量,分析MAGE-D4启动子甲基化频率与患者临床病理特征的关系.结果:肺癌组织中MAGE-D4基因甲基化频率为23.68％,明显低于癌旁组织的86.84％(P<0.05);而癌组织中MAGE-D4 mRNA表达水平则显著高于癌旁组织(5.49±5.65 vs.1.44±1.08,P<0.05),MAGE-D4表达量与启动子甲期化程度呈负相关关系(r=-0.663,P<0.05).肿瘤直径>3 cm的肺癌患者MAGE-D4甲基化发生率明显低于肿瘤直径≤3 cm患者(P<0.05).结论:NSCLC中MAGE-D4基因转录活性的增强与其启动子低甲基化相关;肿瘤直径较大的NSCLC患者MAGE-D4甲基化发生率较低.

目的 采用18 S rRNA基因、ITS2序列、SCAR标记等3种DNA分子标记法鉴别草珊瑚,为其分子鉴定提供依据.方法 通过PCR扩增、克隆测序后获得草珊瑚18 S rRNA基因序列,并进行Blast比对;通过PCR扩增、测序并注释后获得草珊瑚ITS2序列,从GenBank上收集混伪品和其他植物的ITS2序列,使用MEGA 5.5软件,计算种内种间遗传距离,构建系统聚类树;通过RAPD法获得草珊瑚SCAR分子标记,克隆测序后,设计特异性引物扩增草珊瑚及其混伪品.结果 获得的草珊瑚18 S rRNA基因长度为1 820bp,Blast比对显示草珊瑚与金粟兰科同源性最高,同源性为99％,证明其为草珊瑚的18 S rRNA基因.获得的草珊瑚ITS2序列长度为500 bp,草珊瑚与其混伪品之间的遗传距离为0.190～0.219,混伪品之间的遗传距离为0～0.074,聚类分析显示草珊瑚聚为一支,混伪品聚为一支,与其他植物距离较远.获得草珊瑚的SCAR分子标记,用特异性引物扩增出现草珊瑚特异性产物,混伪品未出现特异性产物.结论 3种分子标记法联合可更有效地鉴别草珊瑚及其混伪品,从而建立一套新的鉴别草珊瑚与混伪品的方法,为其鉴别提供新的思路.

Triterpenoid saponins are secondary metabolites synthesized through isoprenoid pathways in plants. Cucurbitaceae represent an important plant family in which many species contain cucurbitacins as secondary metabolites synthesized through isoprenoid and triterpenoid pathways. Squalene synthase (SQS) is required for the biosynthesis of isoprenoids, but the forces driving the evolution of SQS remain undetermined. In this study, 10 SQS cDNA sequences cloned from 10 species of Cucurbitaceae and 49 sequences of SQS downloaded from GenBank and UniProt databases were analyzed in a phylogenetic framework to identify the evolutionary forces for functional divergence. Through phylogenetic construction and positive selection analysis, we found that SQS sequences are under positive selection. The sites of positive selection map to functional and transmembrane domains. 180L, 189S, 194S, 196S, 265I, 289P, 389P, 390T, 407S, 408A, 410R, and 414N were identified as sites of positive selection that are important during terpenoid synthesis and map to transmembrane domains. 196S and 407S are phosphorylated and influence SQS catalysis and triterpenoid accumulation. These results reveal that positive selection is an important evolutionary force for SQS in plants. This provides new information into the molecular evolution of SQS within the Cucurbitaceae family.

目的:探索黑素瘤相关抗原D4 (MAGE-D4)基因工程菌原核诱导表达的最佳条件,以提高目的蛋白产量.方法:设置不同宿主菌(DH5α、TB1、Rosetta)、诱导时机(重组菌分别培养0.5～3 h后进行诱导)、诱导剂IPTG浓度(0.1～0.9 mmol/L)和诱导时间(1～8 h)等条件,诱导MAGE-D4重组质粒表达,通过SDS-PAGE电泳和Image J软件扫描电泳图谱的方法,对目的蛋白的表达量和可溶性进行分析.通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对35例肝癌患者血清MAGE-D4抗体进行检测,分析MAGE-D4融合蛋白的免疫活性.结果:将重组质粒转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,菌液OD600达到0.8时加入IPTG至终浓度0.9 mmol/L,37℃诱导培养7h,可有效提高目的蛋白的表达量.可溶性MAGE-D4融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的25.5％.肝癌患者血清中MAGE-D4抗体的阳性率为28.57％(10/35),其MAGE-D4抗体平均效价明显高于正常人(P＜0.05).结论:本研究优化了MAGE-D4融合蛋白的原核表达条件,获得了可溶性、具有免疫活性的重组蛋白.

生物化学是医学院校中一门重要的基础课程.随着我国教育改革的发展,对该课程的教学提出了新的要求,针对这些要求,文章从教学对象、教学目标、教学内容、教学方法等方面进行了总结与反思,以此提高教学能力,改善教学效果来适应当前教育教学改革的发展.

[目的]探讨橄榄中甘油三酯的含量测定方法.[方法]以索氏提取法提取橄榄油,采用紫外-可见光谱法对甘油三酯的含量进行测定.[结果]甘油三油酸酯标准液浓度在0.202～1.010 mg/ml范围内与吸光值呈现较好的线性关系(r2=0.9948),橄榄中甘油三酯含量可达88.58％.[结论]紫外-可见光谱法可作为测定橄榄中甘油三酯含量的快速方法,且该方法简便、重现好、结果准确.

为了探索白桂木凝集素在分子水平的作用机制,本研究采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法首次克隆了白桂木凝集素(Atrocarpus hypargyreus lectin,AHL) cDNA序列的全长.序列分析与预测结果表明,AHL cDNA序列全长933 bp,含有一个编码40个氨基酸的信号肽和1个编码235个氨基酸的708 bp开放阅读框(ORF);AHL分子量为25 579.2 Da.同源性分析表明AHL与木菠萝家族相关凝集素氨基酸序列有很高的同源性.

目的 克隆红花栝楼鲨烯合酶(squalene synthase,SS)的基因并进行序列分析,为进一步研究葫芦科植物三萜合成通路关键酶SS的正选择位点与功能的关联性分析奠定基础.方法 根据绞股蓝与罗汉果SS基因cDNA比对分析的结果,设计SS的5'端简并引物,采用3'RACE扩增红花栝楼SS全长cDNA基因.结果 获得红花栝楼SS cDNA全长共1 466个核苷酸,其中包括一个含有1 254个核苷酸的开放读码框,编码417个氨基酸残基.通过NCBI的Blast比对,发现红花栝楼SS基因编码的氨基酸序列与已知植物SS基因编码的氨基酸序列同源性为78％～94％,核苷酸的同源性为74％～93％.结论 成功克隆了红花栝楼SS的全长cDNA,为进一步研究红花栝楼SS基因结构、基因表达、基因突变提供了基础,并为葫芦科植物三萜合成通路关键酶SS的正选择位点与功能的关联性分析提供了数据支持.

[目的]寻找适合白桂木基因组DNA的提取方法.[方法]采用改良的CTAB法及试剂盒法提取白桂木基因组DNA.用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法检测白桂木DNA纯度、浓度,比较两种方法的适用性.[结果]试剂盒法能够较好去除多糖及其他次生代谢产物.[结论]试剂盒法更适合从白桂木中提取高质量的DNA.

在医学教育国际标准"本土化"的背景下,进行课程整合,将传统的生物化学课程中与人体代谢有关的部分内容,结合临床问题,设计人体代谢与疾病整合课程,为这门整合课程设计相应的教学案例,从而为开展PBL、CBL、TBL等模式的教学提供相应的素材。

Objective To research the polymorphism of three kinds of medicinal plants Uncaria.from Guangxi,by radom amplified polymorphic DNA(RAPD) analysis and provide a basis for germplasm identification. Methods The modified extraction kit was used to extract the genomic DNA of several plants,including 3 regions of Uncaria Macrophylla Wall,Uncaria Sessilifmctus Roxb.and Uncaria Hirsute Havil,then amplified by 18 selected random primers with 10bp. Results Optimized extraction kit was effective for 3 Uncaria species genome DNA.With the DNA extracted from several plants as template,18 primers amplified a total of 260 bands,231 bands were polymorphic,polymorphism rate was 88.85%,and the effect amplification was good.Then we constructed a dendrogram based on genetic distances by using UPGMA method.The dendogram reflected that 5 samples clustered into three taxa. Conclusion This result is in accordance with their species and geographic origin,but may be different from morphological observed.RAPD markers can be used to analyze polymorphisms of medicinal plants Uncaria,and provide the genetic basis for identification.

Applying PBL and CBL teaching practices in the course of metabolic abnormalities and disease course,developing the student-centeredand autonomous as the main content of education,and to cultivate students' innovative thinking and explore a lifelong learning ability of diversified teaching methods.