新城疫病毒(NDV)是我国活禽最重要的疫病之一.2015-2017年对广西东兴市某活禽市场进行了系统监测,共采集到各种棉拭子样品1482份,将处理好的样品接种鸡胚,后运用荧光RT-PCR检测方法对待测样品进行检测和分析.结果显示,2015-2017年东兴市某活禽市场的NDV整体阳性率为2.43％,其中2015年阳性率最高为6.06％,2016年为0.74％和2017年为0.83％;NDV可以在鸡、鸭和环境样品中检测到,其中环境样品的阳性率最高为5.85％,鸡次之为2.78％,鸭最低为1.33％.NDV的流行病学调查和后续监测可为NDV的防治提供重要的流行病学信息.

为了解广西动物防疫物资管理情况,广西动物疫病预防控制中心采用现况调查法,制定调查表,对所辖市、县、乡三级动物疫病预防控制机构进行问卷调查.结果显示:100％的市级机构配备了动物疫苗冷藏设备,使用率达到92.86％,动物疫苗冷链运输温度100％合格,而县级机构的冷藏设备配备和使用率分别为75.23％和59.63％,仅67.89％能保障冷链运输温度;100％的市级、90.83％的县级、89.90％的乡级机构能够按要求贮存消毒药品,92％以上的各级机构能够按要求正确填写有关物资凭证,95％以上的各级机构能够做到"账账相符、账实相符";不到70％的乡级防疫机构回收屠宰、养殖环节的畜禽标识,不到70％的养殖场申报政府采购疫苗计划及对自购强制免疫疫苗进行备案.结果表明:广西市级机构的动物疫苗冷藏和冷链运输设备齐全,而县、乡两级配备明显不足;各级机构能够按要求贮存消毒药品,相关台帐、凭证管理到位,但畜禽标识回收率偏低,养殖场自购强制免疫疫苗备案意识淡薄.结果提示:应积极与财政部门沟通、协调,争取资金,完善基层机构的动物疫苗冷藏设施设备配备;加强各环节畜禽标识的回收和销毁管理,尽快建立"移动戴标制度";继续加强物资监管,做好重大动物疫病防控应急物资的储备和管理工作.

动物防疫物资包括动物疫苗、畜禽标识、消毒药等等.为了进一步规范防疫物资的管理,原广西壮族自治区水产畜牧兽医局颁布了《广西壮族自治区动物疫苗管理办法》(桂渔牧办[2016] 84号)、《广西壮族自治区畜禽标识管理办法》(桂渔牧办[2014]40号).同时,为了进一步推进全区动物防疫物资管理的信息化和规范化建设,提高动物防疫物资管理水平,自2013年起,广西壮族自治区启用了自治区、市、县三级广西动物防疫物资信息管理系统,2016年起,自治区动物疫病预防控制中心将防疫物资管理系统功能模块扩建到乡级,经对系统测试运行、改进完善和培训各级管理员,2018年在乡级全面启用防疫物资管理系统,实现自治区、市、县、乡四级联网管理.

为建立一种快速检测H6亚型禽流感病毒的基因检测方法,根据GenBanK中H6亚型禽流感病毒的HA基因保守序列设计一对引物和一条Taq Man探针,通过各项条件优化建立了检测H6亚型禽流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法.结果显示,该方法特异性强,与其它亚型(H1、H3、H4、H5、H7、H9)禽流感病毒、传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、马立克氏病毒、传染性喉气管炎病毒等均不发生交叉反应.该方法经实验室和临床上多次试验,证明其特异性强、重复性好、灵敏度高,可用于H6亚型流感病毒的监测.

为探明2016年广西猪群主要疫病的感染情况,从发病猪场和屠宰场共采集猪组织样品340份,应用RT-PCR方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV),应用PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV).结果显示,发病猪场中的CSFV、PRRSV、PEDV、PCV2和PRV感染率分别为1.97%、16.45%、0.00%、34.21%和3.95%,而屠宰场猪的感染率分别为0.53%、11.17%、0.00%、43.09%和0.00%.对猪群的混合感染情况进行分析发现,PCV2和其它病原的混合感染率最高.其中,发病猪场二重感染率最高的为"CSFV+PCV2",为3.95%;其次为"PRRSV+PCV2",为3.29%.屠宰场二重感染率最高的是"PRRSV+PCV2",为2.66%.结果表明:临床健康屠宰猪群和发病猪群中的PCV2和PRRSV感染率较高,其中PCV2感染率最高,且常与CSFV和PRRSV发生混合感染;PRV和CSFV主要在发病猪中被检出;加强PCV2和PRV的监控,对控制猪群发病具有重要意义;应通过加强生物安全措施来净化PRRSV和PRV.

In order to understand the situation of H6 subtype AIV infection in Guangxi,we randomly collected the chicken cotton swabs,duck cotton swabs and environmental cotton swabs from the live poultry market in Nanning,Liuzhou,Beihai,Fangchenggang,and Wuzhou cities in 2013～2015,and employed the PCR detection the swabs.The analysis results showed that the positive rate of H6 subtype AIV infection in Guangxi was 5.93％(736/12 415) with a tendency of rising year by year.The duck cotton swab infection rate was 6.91％ (434/6 280),which was higher than that of the chicken cotton swab infection rate of 4.06％ (203/4 995).We totally isolated 9 H6 subtype AIV strains,and the isolation rate was 0.08％.In addition,the infection rate was higher in spring and winter affected by the climate and infection rate in Nanning was higher than the other four cities.The results of epidemiological investigation could display a good evaluation of H6 subtype influenza virus infection in Guangxi,which would provide an important experimental data for prevention and controlling the H6 subtype AIV infection.

To investigate the biological characteristics,drug resistance and virulence of the pathogen which caused the death of weaned pigs,an isolate was identified through bacteria morphology,physiological and biochemical assays,the sequence analysis of 16S rDNA,drug susceptibility test and median lethal dose(LD50) test.The results showed that the isolate was Proteus mirabilis.The analysis of phylogenetic tree showed that the isolate was highly similar to the P.mirabilis CIFRI P-TSB-13 (JF784025) strain which was separated from Indian seawater.Drug susceptibility test indicated the isolate was highly sensitive to cefoxitin,ceftazidime,spectinomycin and aztreonam,moderately sensitive to 10 kinds of antibiotic including minocycline,amikacin and nitrofurantoin,etc.,and fully resistant to 21 kinds of antibiotic including gentamycin,ofloxacin and levofloxacin,etc.,indicating that the isolate had multi-drug resistance.When zebrafish were cloacal injected and mice were intraperitoneally injected with the strain,it had high virulence as measured by the LD50 of 2.12 × 105 CFU/mL and 1.46 × 107 CFU/mL.This research confirmed that the pathogen of the diseased pigs was P.mirabilis,and suggested to use the highly sensitive antibiotic drugs on clinical treatment.

To investigate genetic variation of Marek's disease virus(MDV)in Guangxi province,three isolates of MDV were isolated from infected chicken.One pair of primers for amplifying Meq gene of MDV was designed according to nucleotide sequence in GenBank,Meq gene of the isolates were amplified by PCR,and then cloned,sequenced and compared with reference MDV strains published in GenBank.The results showed that Meq gene from all of the MDV isolates consisted of 1 020 bp,coding for 339 amino acids.Compared with reference strains published in GenBank,the sequences of Meq gene in different isolates were relatively conserved and the homologies of nucleotide and amino acid sequence of the isolates were 83.8%to 99.9% and 88.4%to 99.6%,respectively.The proline-rich repeats of Meq gene of the MDV isolates had site mutations,and it was related to MDV's virulence.The isolate were nearly related to YL and GXY2,and far away from RB1 B,GA,Md5,648 Aand the immune strain phylogenetically.The study would provide research materials for the prevalence,genetic variation,protection and control of MDV in China.

2009年至2014年间我单位在广西南宁、防城港和梧州三市活禽交易市场进行流行病学调查时,在鸭咽喉和泄殖腔中分离到10株H6亚型禽流感病毒(AIV)毒株.为了解这10株病毒的神经氨酸酶基因(NA)的分子特征和差异,我们运用RT-PCR对这10株H6亚型禽流感病毒的NA基因进行了扩增、序列测定及分析.结果显示,所分离的10株病毒均为H6N6亚型流感病毒.序列同源性分析结果表明A/DK/NN/6121/2013株的NA基因与其他9株NA基因差异性较大,差异性达到5.4％～5.9％,其余9株之间相似性在97.9％～100％;南宁与防城港、南宁与梧州以及梧州与防城港毒株相似性分别为94.5％～100％、94.1％～98.1％和97.8％～98.5％,这些数据表明不同毒株呈现一定的地域性差异.氨基酸序列分析发现10个毒株NA基因上潜在的糖基化位点也有所不同,表明这些毒株有异源性.遗传进化分析表明10株NA基因片段均属于欧亚谱系的禽源演化分支,除了南宁市的DK/NN/6121与福建相应毒株遗传进化关系较近外,其他9株与越南的相应毒株相互之间遗传进化关系都很亲近,且与越南A/duck/Vietnam/LBM235/2012 (H3N6)株的NA基因存在很近的遗传关系,推测它们之间的基因可能存在基因交流;同时发现与台湾和韩国等的毒株关联不大.

参照GenBank中鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR扩增IBV广西株的M基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中.序列分析结果表明,M基因全长为678 bp,编码225个氨基酸,近N端含有2个潜在的N-糖基化位点,3个跨膜区位于23-98肽段区,亲水区较疏水区更易变异.IBV广西株与国内外IBV参考毒株相比,核苷酸序列同源性为83.6％～92.5％,氨基酸序列同源性为82.7％～95.1％.系统进化分析结果显示IBV广西株与SAIB20和LX4两参考株位于同一个分支上,它们的亲缘关系较近,而与其他参考株属于不同的分支,亲缘关系较远.结果表明IBV广西株是1株新的IBV变异株.

为了解H9N2亚型禽流感病毒广西分离株的遗传变异情况,采用RT-PCR技术扩增了10株从2011 ～2014年广西不同地区分离的H9N2亚型AIV的HA基因片段,并对所得序列进行同源性和遗传进化分析.结果显示,10个毒株的HA基因全长1 683 bp,编码560个氨基酸;10株分离株的裂解位点均为PSRSSR ↓ GLF,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列.10株分离株234位氨基酸均为L,具有与哺乳动物唾液酸α-2,6受体结合的特征.分离株与参考毒株HA基因的核苷酸与氨基酸同源性均较高,分别为79.3％ ～98.7％和85.0％ ～98.6％,均属欧亚种系,其中与A/Duck/HongKong/Y280/97亲源关系较近.研究结果从分子水平上证明H9 N2亚型禽流感病毒近年来未发生较大变异.

通过ELISA方法对广西6个规模场的874份血清样品进行禽网状内皮病毒抗体检测,结果发现血清抗体阳性率平均为79.63％;用PCR方法对6个规模场的18个批次的鸡痘疫苗和8个批次的禽马立克氏病疫苗进行禽网状内皮增生症病毒检测,结果18个批次的鸡痘疫苗检测出1个批次为禽网状内皮增生症病毒阳性,8个批次的马立克氏病疫苗均未检测出禽网状内皮增生症病毒.

禽流感（Avian influenza ，AI）是由 A 型流感病毒引起的急性高度接触性传染病 A 类传染病，被列入国际生物武器动物类传染病名单，成为继“疯牛病”之后的又一重大人畜共患病，严重危害公共安全。禽流感病毒（Avian influenza virus ，A IV ）不仅能感染许多不同种类的鸟类，包括野禽、笼养鸟类、鸡、鸭、鹅、火鸡和其它各种家禽，还可以从呼吸道、结膜和消化道排出病毒，直接、间接或气溶胶传播病毒，感染其他动物如水生动物、马哺乳动物等，其传播方式与病毒类型、禽类品种和环境因素等有关。哺乳动物是禽流感病毒潜在的传播者之一，其中猪是流感病毒的天然混合器。以前认为，禽流感病毒（A IV ）有较严格的宿主受体特异性，而人呼吸道上皮细胞只能裂解一个碱性氨基酸的酶体系，所以 A I V 基本不能进入人体，2013年以前很少有人感染 A IV。但随着病毒重组、漂移、变异，流感病毒不断组合而产生了新的类型，逐渐有报道人感染事件，如2013年上海出现 H7N9亚型A IV感染人事件，2013年 12月江西南昌出现的H10N8禽流感致人死亡事件，都是全球首发人感染禽流感。从20世纪70年代以来，新发传染病每年以1种或以上的速度增加。禽流感作为一种新型的人畜禽共发传染病，其变异、组合速度之快，完全超出了人们的预期，成为公共卫生事件中重点防控的疾病之一。

为了解广西鸭圆环病毒(DuCV)流行情况,试验采用PCR技术对2010-2014年间采自南宁、柳州、桂林等10个城市活禽市场的2 897份临床健康鸭内脏组织样品进行检测,同时对采自83个鸭群的187份发病或死亡鸭组织样品分别进行DuCV、大肠杆菌(E.coli)、鸭疫里氏杆菌(RA)、禽流感病毒(AIV)、鸭肝炎病毒(DHV)、副黏病毒(AMPV)、鸭坦布苏病毒(DTUMV)检测.结果表明:10个城市均检测出DuCV阳性样品,其平均检出率为8.01％(232/2897);187份鸭组织样品中DuCV样品阳性率为20.32％(38/187),其中DuCV单纯感染仅占18.42％(7/38),而二重感染和三重感染的比率分别为50.00％(19/38)和31.58％(12/38).说明DuCV在广西大部分地区鸭群中呈不同程度的流行,感染率逐年升高,且DuCV感染往往造成其他病原继发感染而引起鸭群发病甚至死亡.

为了建立一种快速的新城疫病毒(NDV)病原检测方法,试验针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因序列保守区域设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过构建重组阳性标准质粒的方法建立了检测IBV核酸的荧光定量PCR方法,优化反应体系和反应条件后进行特异性、敏感性、重复性试验.结果表明:该检测方法特异性强,与其他禽源病毒如NDV、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、禽流感病毒(AIV)、马立克病毒(MDV)均不发生交叉反应;该方法可检测到3.1×101拷贝/μL的病毒核酸,比常规RT-PCR的敏感性高100倍;重复性试验的变异系数小于2％.说明研究建立的Real-time RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于IBV的定量检测.

A pair of specific primers and a specific probe was designed according to the ALV-J conserved gene sequence and a plasmid containing the target gene was constructed as a standard control. A real-time PCR assay was developed for detection of ALV-J. After optimization of the reaction conditions,the assay was tested for its specificity,sensitiv-ity and repeatability. Result showed that the assay was highly specific and there were no cross-reactions with other avian pathogens including ALV-A,ALV-B,NDV,AIV,CIAV and MDV. The assay had a detection limit of 3.2×102 cop-ies/μL viral RNA,100 times more sensitive than the conventional PCR,and its coefficient of variations was less than 2%in the reproducible test. The results indicated that this real-time RT-PCR assay was of high specificity,sensitivity and reproducibility,and could be used for the quantitative detection of ALV-J.

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了1株IBV.参照GenBank中IBV的核苷酸序列设计2对引物,利用RT-PCR技术对分离毒株的N、M基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株进行比对分析.结果显示,N基因序列全长为1 230 bp,编码409个氨基酸,M基因序列全长为678 bp,编码225个氨基酸.与参考毒株相比,分离株的N基因核苷酸序列同源性为87.2％～93.3％,推导的氨基酸序列同源性为90.0％～94.4％;M基因的核苷酸序列同源性为83.6％～91.0％,推导的氨基酸序列同源性为82.7％～92.9％.在遗传进化树中,本试验分离株Guangxi156株与BJ株和LX4株两个参考株位于同一个分支上,亲缘关系较近,而与其他参考株属于不同的分支,亲缘关系较远.结果表明,本试验分离株是一株新的IBV变异株.

To develop a rapid multiplex RT-PCR assay for detection of H5,H7,H9 subtype AIV,specific primers were designed with Primer 5.0 software according to the conserved region of the H5,H7,H9 sub-type AIV hemagglutinin gene.The results of this one step-multiplex RT-PCR demonstrated that the specif-ic bands of 380 bp,501 bp and 732 bp were observed simultaneously for RNA isolated from H5,H7 and H9 subtype AIV.And the reaction conditions were optimized to develop one step-multiplex RT-PCR assay for detection of H5,H7,H9 subtype AIV.The method has high specificity and sensitivity.The minimal amount of detection was 10-4 copies/μL RNA of H5,10-4 copies/μL RNA of H7 and 10-2 copies/μL RNA of H9 subtype AIV,respectively.There was no cross-reaction with other avian pathogens after amplifica-tion.The molecular diagnose method was preliminarily established to detect H5,H7 and H9 subtypes of a-vian influenza viruses rapidly,sensitively and specifically.

根据猪瘟病毒(CSFV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列特点,设计3对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV以及美洲型、欧洲型PRRSV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)方法.该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪的其它常见病毒无交叉反应;对CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV3种重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5％.应用该方法对253份临床疑似样品进行检测,结果病原阳性106份,其中20份为CSFV阳性,86份为美洲型PRRSV阳性,11份为CSFV和美洲型PRRSV混合感染,未检测到欧洲型PRRSV.试验表明,研究建立的多重qRT-PCR方法可用于CSFV和PRRSV的快速鉴别检测及流行病学调查.