牛病毒性腹泻病毒感染羔羊已继代到22代,经过临床观察,病毒继代羔羊在感染后逐渐出现软便,肠黏膜脱落,体温上升至40.1～40.8 ℃的一过性低热.病理解剖观察,肠系膜淋巴结肿大、水肿;右心室扩张,心内膜出血;小肠黏膜出现肥厚、水肿及轻重不同的充血及出血性炎症,大肠黏膜出现轻重不同的充血、出血性卡他性炎性变化,大小结肠水分吸收不全,肠内容物呈软泥样.对继代试验中每一代病毒样品作补体结合反应检查,其病毒抗原性逐渐提高,阳性程度由10倍提高到300倍.对不同继代的病毒样品用BVDV标准阳性免疫血清进行琼脂凝胶免疫扩散试验检查,出现阳性反应,免疫沉淀线部分吻合.以BVDV制备高免血清,并作补体结合反应检查,说明在羊体内BVDV的补反抗体存在一年以上.

呼肠孤病毒为自然界特有的分段dsRNA基因组,其宿主范围十分广泛,包括哺乳动物、无脊椎动物、植物、真菌与细菌.随着结构生物学与信息处理等新技术的运用与发展,近年来,在呼肠孤病毒结构研究方面已取得突破性成果.特别是运用X射线晶体衍射及低温电镜与三维重构术对呼肠孤病毒核心蛋白与完整颗粒结构高分辨率的解析,不仅揭示了呼肠孤病毒核衣壳蛋白所具有的转录酶活性,同时阐明了内源性RNA转录与调节的结构基础.

分析棉铃虫核多角体病毒基因组,结合GenBank中已知的序列,发现iap2基因位于其基因组的BamHⅠ-F片段上,回收此片段作为模板,设计引物,通过PCR扩增得到了抗细胞凋亡基因iap2的DNA片段.将扩增产物克隆到pGEM T载体上,再进一步将插入片段酶切并连接到表达载体pET-28a上,构建了重组质粒pET-iap2.DNA序列分析结果表明,克隆得到的DNA序列与所发表序列完全相同.含重组质粒pET-iap2的大肠杆菌BL21(DE3)表达了抗细胞凋亡蛋白IAP2.

水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属.草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鮁鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鮁鱼病毒病病原.本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究.结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异.此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型.在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性.Western blot 检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇.

草鱼呼肠孤病毒是引起草鱼出血病的主要病原,隶属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属.序列分析表明,GCRV S2 片段长为3 877核苷酸,编码一个分子量为138kDa 的蛋白VP2,具有RNA聚合酶性质.为进一步了解该病毒 RNA聚合酶特性,本研究在对GCRV RNA聚合酶基因(GCRV-RdRp)保守区(约1.5kb)重组质粒pR/RRp高效表达的基础上,分别构建了编码GCRV RNA聚合酶保守区N端与C端部分基因的 pR/RRpN及pR/RRpC重组表达载体,并在原核细胞中获得成功表达.筛选的重组表达菌株经IPTG诱导培养,得到分子量分别为98kDa、103kDa的目的表达融合蛋白.Western blot分析表明,该表达产物与兔抗GCRV-VP2血清呈阳性反应.通过ProBond柱亲和层析,纯化了融合有6个组氨酸的重组表达产物,并获得约90%纯的目的蛋白.上述结果为GCRV RNA聚合酶特性分析提供了依据.

将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒（Autograph Colifornica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV）的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317、ts538、ts8感染草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）Sf21细胞,并在允许温度（25℃）或非允许温度（33℃）下培养,分别采用过氧化物酶标记的抗P47蛋白、抗P143蛋白、抗多体蛋白和抗病毒结构蛋白的单克隆抗体检测病毒增殖过程各蛋白出现的时间。结果表明:1)P47蛋白是一种晚期（12hpi）表达蛋白,各突变株在允许温度（25℃）能够表达,但在非允许温度（33℃）不能表达。2)P143蛋白是一种早期（8hpi）表达蛋白,在允许温度和非允许温度时都能表达,ts8的表达量较少。3)在非允许温度条件下,蛋白质的合成速度高于允许温度。4)野生型和突变株ts317的病毒结构蛋白（P80、GP64、VP39、P24和PTP）在允许温度增殖下都能检测到,ts538和ts8表达量相对少些。5)除了GP64和P24外,ts538和ts8感染的细胞在非允许温度下不能表达病毒的结构蛋白。6)野生型毒株HR3在允许温度和非允许温度下的蛋白表达无明显差异。

2002年11月,一种神秘不明的疾病出现在我国广东省继页肆虐全球,世界上有27个国家和地区相继报道出现这种疫情.

从湖南长沙分离到一株致病性强的草鱼呼肠孤病毒(GCRV991),该病毒能使草鱼CIK,肥头鲤FHM细胞产生明显的CPE,对水生动物BF2,EPC及哺乳动物BHK,VERO细胞株不敏感.中和实验显示,GCRV873抗体能有效地中和GCRV991病毒颗粒,形成抗原抗体免疫复合物.纯化的病毒核酸与蛋白经SDS-PAGE分离,分别呈现11条清晰的核酸带及5条主要与2条微量结构多肽图谱,其核酸蛋白分子量大小与GCRV873相近似.该毒株基因组总分子量为14.48×106kD,大小范围是0.55～2.61×106kD;5条主要与两条微量结构多肽分子量近似值分别为136kD、132kD、65kD、43kD、34kD及138kD、82kD.上述结果提示,新分离的GCRV991与GCRV873具有相似的抗原性.

在棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera Single-nucleocapsid Nucleopolyh edrovirus,HaSNPV)基因组中发现了lef-3基因,该基因位于病毒基因组的BamHⅠ -F片段上, 全长1140bp,编码379个氨基酸,预计蛋白质分子量为44kD,启动子区具有TATAbox,位于起 始密码子ATG上游40～43nt处,在终止密码子下游具典型的poly(A)终止信号AATAAA.并且 在它的氨基酸序列的N-端也具有一个类似SSB保守序列的基元结构.

棉铃虫核多角体病毒(Helicoverpa armigera sinle-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus,HaSNPV)基因组中发现了一个抗细胞凋亡基因iap2.该基因位于病毒基因组的BamH I-F片段,全长753个核苷酸,编码250个氨基酸,预计蛋白质分子量29.2kD.在iap2基因上游-30～-33的位置有一个TATA框,在-50～53的位置有一个早期转录信号CAAT,在终止密码子下游有一个poly(A)信号AATAAA,HaSNPV iap2基因编码一个锌指结构和两个BIR结构.与LdMNPV、AcMNPV、SeMNPV和OpMNPV的IAPs及果蝇DIAP2和人类XIAP等九种IAPs相比较,HaSNPV IAP2与其它的BIR(baculovirus IAP repeater)和RING结构在Cys/His基元(motif)位点上高度保守.

蜀柏毒蛾(Parocneria orienta Chao)是柏木、桧柏、干头柏等柏科树种的重要食叶害虫[1],到目前为止仅存在于我国.蜀柏毒蛾核型多角体病毒(Parocneria orienta nuclear polyhedrovirus,PaorNPV)[2]于1991年被分离,该病毒对蜀柏毒蛾幼虫具有较强毒力,已作为一种新型的生物农药初步应用于柏木林区害虫的防治上[3].对这种病毒已进行了一些研究,包括生物活性测定,形态结构,理化特性,限制性内切酶分析[4,5].为了进一步研究其分子生物学特性,开发我国这种特有的病毒资源,我们构建了部分PaorNPV基因组DNA片段的基因文库,同时以中国棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒(HearSNPV)几丁质酶基因作探针,对PaorNPV几丁质酶基因进行了定位,结果报道如下.

A strain of E. coli W3350 was cultured in different time, NaCl concentration, pH and temperature. Western-blotting was employed for measuring #sigma# factor. The strip was scanned and analyzed by computer. The results showed that #sigma#~(70) was not the only important factor in the stationary growth phase by also a overall regulator in E. coli.

The shape, structure, structural polypeptides and restriction pattern of Parocneria orienta Nuclear polyhedrovirus (PaorNPV)was studied. Assayed by vertical slab SDS PAGE, polyhedrin treated by heat contained a single polypeptide with molecular weight of 31.5 kD, while polyhedrin untreated by heat contained three polypeptides with molecular weight of 31.5 kD, 29.1 kD, 28.6 kD respectively; virion contained 25 structural polypeptides with molecular weight range from 17.6 kD to 114.6 kD. Digestion of PaorNPV DNA with restriction endonucleases, Bam H I, Eco R I, Hin d Ⅲ, Pst I and Xho I, resulted in 9,12,12,12 and 14 fragments, respectively. The PaorNPV genome was about 124.6 kilobasepairs (kb).

TCTCCC nucleotide sequence in -35 region of promoter recognized by σ 38 subunit of RNA polymerase in E.coli was supposed to be the conservative.The primers,founding -20 to -60 of osm Y promoter were synthesized.A set of 19 variant promoters that were enriched by PCR was constructed,each carrying a single base substitution within the TCTCCC (nucleotide positions from -39 to -34 relative to the transcription start site of osm Y promoter).Using the DNA plate enriched by PCR and purified E.coli polymerase holoenzyme (Eσ 38 ) in vitro transcription was performed.The following conclusions were drawn from the data presented:1)The nucleotide sequence in -39 to -34 of osm Y promoter was important,and other base substitution might affect its level of in vitro transcription.2)There were rich cytosines in -35 region of promoter recognized by σ 38 .but less or more than three of cytosines might reduce in vitro transcription level.3)The sequence of TCTCCC was not conservative,and TCTCTC was proposed as a consensus sequence of specific promoters recognized by σ 38 .4)The suitable proportion and space structure of two or three dimensions were more important than position of thymidine and cytosine base for σ 38 .

The immunogenic comparison of three grass carp hemorrhage viruses, GCHV873, GCHV875 and GCHV876 derived from different areas has been carried out on the basis of the levels of the elicited serum antibodies in rabbits. The anti-GCHV873 antibody titre was 2 folds higher than GCHV875 and 8 folds than GCHV876. Their neutralizing titres were 1 : 1778(10~(-3.25)), 1: 386(10~(-2.59)) and 1: 181(10~(-2.25)) respectively.These experimental results suggested that GCHV873 is a stronger immunogen among three isolates.