目的:探讨细胞分裂周期相关蛋白7(cell division cycle-associated protein 7,CDCA7)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,及其可能的作用机制.方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达谱数据动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析胰腺癌组织及癌旁组织中CDCA7表达水平的差异,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测CDCA7 mRNA和蛋白在人正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌Bxpc-3、CFPAC-1、PANC-1、MIAPaCa-2、Capan2及SW1990细胞中的表达水平.构建干扰CDCA7基因表达的重组慢病毒,稳定转入PANC-1细胞,并分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测干扰效率.干扰CDCA7基因表达后,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测对PANC-1细胞增殖能力的影响,细胞划痕愈合实验及Transwell小室法检测对PANC-1细胞迁移及侵袭能力的影响;进一步采用蛋白质印迹法检测干扰CDCA7表达后对上皮-间质转化相关蛋白波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin),以及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cyclin E1表达水平的影响.通过生物信息学网站(STING和GEPIA)预测CDCA7与微型染色体维持蛋白3(minichromosome maintenance protein 3,MCM3)的关系,并进一步采用免疫共沉淀法检测CDCA7与MCM3的相互作用,采用蛋白质印迹法检测干扰CDCA7表达后MCM3蛋白表达水平的变化.结果:CDCA7在胰腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P ＜0.05);CDCA7 mRNA及蛋白在胰腺癌PANC-1、MIA PaCa-2和SW1990细胞中的表达水平均明显高于人正常胰腺导管上皮细胞HPDE(P值均＜0.05).干扰CDCA7表达后,PANC-1细胞中CDCA7 mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P值均＜0.05),PANC-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显降低(P值均＜0.05);Vimentin、cyclin D1和cyclin E1蛋白的表达水平均明显下调,而E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P值均＜0.05).CDCA7与MCM3存在相互作用,且干扰CDCA7表达后MCM3蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05).结论:CDCA7在部分胰腺癌细胞中高表达,干扰其表达可抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力.

Purpose The tripartite motif-containing family member TRIM37 is involved in a number of important biological and pathological processes, and it has recently been shown to be an essential regulator of protein ubiquitination and a contributor to tumorigenesis. We previously showed that TRIM37 is overexpressed in and promotes the proliferation and invasion of pancreatic cancer (PC). Methods Sphere formation, flow cytometric, qRT-PCR, western blot, colony formation, EdU incorporation, mouse xenograft model, TUNEL and IHC assays were performed to detect the role of TRIM37 in stemness and chemoresistance of PC in vitro and in vivo. Bioinformatics analysis and dual-luciferase reporter assays were used to determine which intracellular pathways might mediate the effects of TRIM37 in PC cells. Immunofluorescent(IF) staining, co-immunoprecipitation(CO-IP), protein stability and ubiquitination assays were performed to investigate the relationship between TRIM37 and PTEN. Results TRIM37 modulates the ubiquitination and degradation of the tumor suppressor phosphatase and tensin homolog (PTEN), which negatively regulates the AKT–GSK-3β–β-catenin signaling pathway, thereby sustaining aberrant activation of PC cells. High expression of TRIM37 combined with low expression of PTEN correlates with poor survival of PC patients. Conclusions Collectively, our results suggest that inhibition of the TRIM37–AKT–GSK-3β–β-catenin axis may be a promising strategy for treatment of PC.

目的:探讨基质金属蛋白酶28（MMP28）在胰腺癌（PC）中磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B（PI3KAkt）信号通路中的作用及机制。方法:利用c Bio Portal网站在线分析TCGA数据库,选取TCGA数据库中与MMP28相关基因中相关系数较大（Person系数＞ 0. 5）的基因进行GO和KEGG生物信息学分析;选取人PC细胞株PANC-1细胞培养后分为MMP28对照组（NC组）、MMP28下调组（si-MMP28组）和MMP28上调组（UMMP28组）,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）实验检测B淋巴细胞瘤-2 （BCL2）、叉头框转录因子1（FOXO1）及细胞程序性细胞死亡因子4（PDCD4） mRNA表达,采用Western blot实验检测各组PANC-1细胞中Akt和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的蛋白表达情况。结果:生物信息学分析结果表明MMP28和PI3K-Akt信号通路相关,且MMP28与BCL2、FOXO1及PDCD4 mRNA表达呈负相关;与NC组比较,si-MMP28组PANC-1细胞的p-Akt蛋白表达水平上调,U-MMP28组p-Akt蛋白表达水平下降（P ＜0. 05）。结论:MMP28可能通过抑制BCL2、FOXO1及PDCD4表达来调控PI3K-Akt信号通路,从而促进PC的发生发展。

目的:构建乐伐替尼诱导的原发性肝细胞癌(HCC)SMMC-7721耐药细胞株,并探讨其生物学特性.方法:选取HCC细胞株SMMC-7721进行培养传代,采用药物逐步递增法建立体外乐伐替尼诱导的SMMC-7721耐药细胞株(耐药组),以未经处理的肝癌细胞为对照组;采用CCK-8法检测乐伐替尼、阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂对两组细胞的半数抑制浓度(IC50),并计算乐伐替尼耐药指数(RI);采用Real time-PCR检测两组细胞耐药基因MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ和BCRP的表达,采用Western blot检测两组细胞P-gp、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ和BCRP蛋白的表达.结果:乐伐替尼对对照组和耐药组SMMC-7721细胞IC50分别为(0.15±0.03)μmol/L和(4.34±0.12)μmol/L,RI为28;阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂对耐药组SMMC-7721细胞的IC50较对照组降低(P<0.05);耐药组SMMC-7721细胞中MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP耐药基因的相对表达量均较对照组下降(P<0.05或P<0.01),耐药组SMMC-7721细胞中P-gp、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP蛋白表达均较对照组降低(P<0.05).结论:实验成功诱导获得耐乐伐替尼的体外肝癌SMMC-7721细胞株,该细胞株对阿霉素、氟尿嘧啶和顺铂的敏感性增高,其体制可能与耐药基因MDR1、LRP、MRP2、GST-pi、TopoⅡɑ及BCRP表达降低有关.

目的:分析基质金属蛋白酶28(MMP28)对PANC-1细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法:通过GEPIA网站分析MMP28在PC组织和对照组织中的表达及其对PC患者无病生存期和总生存期的影响,实时荧光定量聚合酶链反应实验(qPCR)检测MMP28分别在人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)及其他PC细胞中的表达情况;PANC-1细胞培养后转染分为MMP28对照组(NC组)、MMP28下调组(D-MMP28组)和MMP28上调组(U-MMP28组),通过qPCR和Western blot实验验证,细胞增殖实验(CCK8)和平板克隆实验检测MMP28对PANC-1细胞增殖能力的影响,细胞划痕及Transwell实验检测MMP28对PANC-1细胞侵袭及迁移能力的影响.结果:MMP28在PC组织中的表达高于对照组织且对胰腺癌患者的无病生存期和总生存期有影响,在PC细胞株中的表达高于人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE),差异有统计学意义(P<0.05);与NC组PANC-1细胞比较,D-MMP28组PANC-1细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,而U-MMP28组升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:MMP28在PC中高表达并对预后有影响,且促进PANC-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力.

目的:探究淋巴增强因子1反义RNA1(LEF1-AS1)对胰腺癌(PC)细胞的影响及机制.方法:使用Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)网站分析来源于癌症基因组图谱(TCGA)数据库中PC组织和正常胰腺组织LEF1-AS1的表达;取对数生长期的正常人胰管上皮细胞株HPDE和PC细胞株Panc-1、Bxpc-3、AsPC-1、Capan-1、CFPAC-1及MIA PaCa-2,采用qPCR检测LEF1-AS1在各细胞中的表达;选取qPCR检测后LEF1-AS1表达较高的PC细胞株Panc-1和MIA PaCa-2,用siLEF1-AS1与siControl分别转染后分为下调组和对照组,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、划痕实验和Transwell实验检测敲低LEF1-AS1对各组PC细胞增殖、细胞侵袭及迁移能力的影响,采用Western blot实验检测敲低LEF1-AS1对各组PC细胞中B细胞白血病淋巴瘤2(Bcl-2)、B细胞白血病淋巴瘤相关蛋白(Bax)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达的影响.结果:PC组织中LEF1-AS1的表达高于正常组织(P<0.05),Panc-1、Bxpc-3、AsPC-1、Capan-1、CF-PAC-1及MIA PaCa-2细胞中LEF1-AS1表达水平较HPDE细胞上调(P<0.05);下调组Panc-1和MIA PaCa-2细胞24 h、48 h和72 h时OD值均较对照组下降,下调组细胞集落形成数较对照组降低(P<0.05);下调组Panc-1和MIA PaCa-2细胞迁移和侵袭能力较对照组细胞降低(P<0.05);敲低LEF1-AS1表达后,下调组Panc-1和MIA PaCa-2细胞Bcl-2和Vimentin蛋白的表达量均较与对照组下降,Bax和E-cadherin蛋白的表达量均较与对照组升高(P<0.05).结论:敲低LEF1-AS1表达后抑制PC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与促进PC细胞的凋亡和抑制上皮细胞-间充质转化进程有关.

目的:探讨长链非编码RNA (LncRNA)整合素β2 (ITGβ2)-AS1在体外对人胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及其机制.方法:采用癌症基因组图谱(TCGA)公共数据库分析ITGβ2-AS1在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达,通过qPCR实验检测ITGβ2-AS1分别在人正常胰腺导管上皮细胞及人PC细胞株AsPC-1、CFPAC-1、PANC-1、MIA PaCa-2、Capan-2、BxPC-3、Hs766T及SW1990细胞中的表达,利用慢病毒载体稳定转染ITGβ2-AS1最高的表达细胞,采用CCK-8和平板克隆实验检测ITGβ2-AS1对PANC-1细胞增殖能力的影响;通过细胞划痕及Transwell实验检测ITGβ2-AS1对PANC-1细胞侵袭及迁移能力的影响,qPCR及Western blot实验检测干扰ITGβ2-AS1后PANC-1细胞中ITGβ2的基因表达情况.结果:ITGβ2-AS1在胰腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且在各胰腺癌细胞株中的表达显著高于人正常胰腺导管上皮细胞,PANC-1中表达最高,差异有统计学意义(P＜0.05);干扰ITGβ2-AS1后,PANC-1细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著降低,ITGβ2的表达水平显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:LncRNA ITGβ2-AS1在胰腺癌中高表达,干扰其表达可抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力和抑制ITGβ2的转录及翻译过程.

目的:探讨长链非编码RNA整合素β2(ITGβ2)-AS1在胰腺癌(PC)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的作用及机制.方法:选择癌症基因组图谱(TCGA)中胰腺导管腺癌数据库PAAD的mRNA表达谱类型,根据TCGA数据库分析结果,选取与ITGβ2-AS1相关的基因中相关系数较大(Person系数＞0.6)的基因进行GO富集分析,筛选出与ITGβ2-AS1的表达显著相关的基因及信号通路;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot验证人PC细胞株PANC-1中相关mRNA及蛋白的表达.结果:GO分析显示,ITGβ2-AS1与PC的增殖及相关肿瘤信号通路转导密切相关;qRT-PCR及Western blot结果显示,与正常PANC-1细胞比较,干扰ITGβ2-AS1后,PANC-1细胞中BCL2、MMP9、MYC及磷酸化的ERKl/2的mRNA及蛋白表达水平下降(P＜0.05).结论:ITGβ2-AS1可能通过正向调控MAPK信号通路上靶基因的表达,促进PC细胞的增殖、侵袭及迁移.