目的 构建结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA候选疫苗株并鉴定,初步评价其免疫原性.方法 从GenBank中获取M.tuberculosis H37Rv的Ag85B、ESAT6和Hsp65基因序列优化后合成,经PCR、酶切、连接与真核表达载体PVAX1重组,构建重组质粒PVAX1-Hsp65-Ag85B和PVAX1-Hsp65-ESAT6.重组质粒体外转染验证其表达后,免疫C57BI/6小鼠,检测特异性细胞免疫应答反应.结果 Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株在体内外均能表达,Western blot结果显示,DNA疫苗株体外转染293T细胞,24 h可检测到特异性蛋白条带,48 h蛋白表达量达最高.小鼠体内实验表明,Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均可激发较强的免疫反应,可诱导机体产生分泌高水平TNF-α的Th型免疫应答,且Hsp65-Ag85B优于Hsp65-ESAT6.结论 Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均具有较强的免疫原性,呈Th型细胞介导的免疫应答,推测Hsp65-Ag85B DNA疫苗的保护效力优于Hsp65-ESAT6,为新型结核DNA疫苗研制提供了实验依据.

71型肠道病毒(enterovirus 71,EV71)是引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要病原体,在亚太地区流行,至今尚无特效药物.手足清栓作为治疗手足口病的中药方剂因可接受性强、无可见副作用而受到青睐,但治疗效果和作用机理至今尚未见有报道.为阐明手足清栓对手足口病模型的治疗效果和作用机理,本研究测定手足清栓对健康Vero细胞的毒性和对EV71-BJ株感染Vero细胞模型的治疗效果,测定药物作用与否的Vero细胞感染模型的病毒载量;测定手足清栓经灌肠途径对健康小鼠的毒性和对EV71-BJ株感染小鼠模型的治疗效果,重点观察手足清栓药物对EV71-BJ株重症感染小鼠模型死亡率、体质量、临床症状的改善情况,测定手足清栓经灌肠途径给药对EV71-BJ株重症感染小鼠模型靶组织产生的病变程度、病毒载量、炎性分子的变化特征,从而探索手足清栓治疗EV71感染的机制.体外结果显示,在EV71-BJ株感染Veto细胞模型上,于对细胞无肉眼可见毒性质量浓度下(生药60mg/L),手足清栓通过降低感染细胞的病毒载量显著抑制EV71感染引起的Vero细胞病变;体内结果显示,在无毒质量浓度条件下(生药11.05 g/kg),手足清栓通过降低病毒载量、改善组织病理变化、降低炎性分子浓度机制降低EV71感染小鼠模型的死亡率,改善发病小鼠的临床症状.结果 表明,手足清栓可通过抗病毒明显提高小鼠的存活率,能够减轻EV71感染引起的HFMD的临床症状.

长链非编码RNA (lncRNA)是真核细胞中存在着一些非编码RNA,lncRNA通过参与转录调控、RNA的剪切和修饰、mRNA的稳定和翻译调控、蛋白质的稳定和转运、染色体的形成和结构等细胞重要功能来调控胚胎发育、组织分化、器官形成等基本的生命活动,lncRNA有可能成为癌症及神经系统等疾病中新的生物标志物和药物治疗的靶点.本文从lncRNA的概况、lncRNA在神经系统及神经系统疾病中的作用等方面对近年来lncRNA在神经系统中的研究进展进行总结归纳,以期为进一步的研究提供参考.

表观遗传(epigenetics)的调控机制主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA调控.其中DNA甲基化(DNA methylation)在胚胎发育、遗传印记、X染色体失活等过程中具有重要意义.DNA甲基化是在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)作用下的一种相对稳定的表观遗传调控机制,可随DNA的复制遗传给下一代,在人类正常的生长发育过程中起关键作用.DNA甲基化主要发生在生殖细胞发育期和植入前胚胎期,在此期间若发生去甲基化不充分或过早的重新甲基化都可能引起胚胎的死亡及各种先天性疾病的发生发展[1].TET(ten-eleven translocation)蛋白家族是一类依赖于酮戊二酸和Fe2+起催化作用的双加氧酶,可将5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5hmC).研究表明TET蛋白通过影响DNA甲基化和DNA去甲基化的动态平衡过程在各种生物的生长、发育和衰老过程中起重要作用,可作为神经精神疾病治疗的新靶点[2,3].因此,本文从TET蛋白家族对DNA去甲基化、DNA羟甲基化的调控,以及TET蛋白家族在神经系统中的作用等方面对TET蛋白家族近几年来在中枢神经系统方面的作用进行综述,以期为未来的进一步研究提供参考.