Objective: Smallpox, a severe infectious disease caused by the smallpox virus, causes a death rate as high as 30% within 15-20 days after infection. Therefore, development of anti-Smallpox product as a strategic reserve is urgently needed. Methods: We prepared and tested pepsin-digested F(ab′)2 fragments of serum IgG from horses. Results: Transmission electron microscopy indicated that the purified virus showed morphology consistent with VVTT. The titer was above 1.0 × 107 PFU/mL. The purity of the antigen exceeded 90%, according to HPLC. After purification and cleavage, the yield of the purified product F(ab′)2 was approximately 1.3%, its purity exceeded 90%, and the neutralizing antibody titer exceeded 1:3200. F(ab′)2 fragments had good preventive and therapeutic effects in mice at antibody doses of 5.2 mg/mL and 2.6 mg/mL. The viral loads of the drug-treated mice were suppressed to varying degrees, and the higher dose groups (5.2 and 2.6 mg/mL) showed a 2-3 fold lower viral load than that in the control group. Conclusion: A process for producing equine immunoglobulin F(ab′)2 against VVTT was established. The prepared horse anti-smallpox immunoglobulin product had good neutralizing antibody effects on VVTT. The highly purified preparation may serve as a potential candidate for smallpox treatment.

研制抗蓖麻毒素精制免疫球蛋白,即马抗蓖麻毒素免疫球蛋白F(ab')2制品,为蓖麻毒素中毒的防治提供特效药.利用传统方法,从蓖麻籽中提取、纯化脱毒蓖麻毒素,加入适量弗氏佐剂充分乳化,免疫马匹,测定免疫马匹血清中和抗体效价并采血,分离血清,按照免疫球蛋白F(ab')2生产工艺制备治疗性抗体成品,并对成品进行中和抗体效力检测、安全性检测及免疫防治效果评价.结果 显示,纯化的蓖麻毒素抗原,经HPLC法测定纯度大于90％,腹腔注射对小鼠的半数致死量(LD50)约为6.38 μg/kg;免疫马匹血清中和抗体效价达1:64000以上时,采血并制备F(ab ')2成品,纯度在80％以上,中和抗体效价均超过6000 U/mL;安全性符合现行《中国药典》要求,对蓖麻毒素中毒动物模型有很好的免疫防治效果.本研究建立了蓖麻毒素精制免疫球蛋白制品生产工艺,制备的成品符合现行《中国药典》要求,为蓖麻毒素中毒的防治提供了新的救命药.

采用鸡胚成纤维原代细胞培养痘苗病毒天坛株抗原,甲醛灭活后,利用密度梯度离心法和层析法两步纯化抗原,加入等量ISA206佐剂充分乳化,免疫健康马匹,当中和抗体效价达1∶3 200时,采血,分离血清,按照免疫球蛋白F(ab')2生产工艺制备治疗性抗体成品,并对其进行中和抗体效价、防护效力、安全性检测.结果 显示,鸡胚成纤维原代细胞培养痘苗病毒天坛株滴度均在1.0×107 PFU/mL以上;纯化的抗原纯度在90％以上;纯化的F(ab')2成品,纯度在90％以上,中和抗体效价超过1∶3 200,有很好的免疫防护效力,安全性符合现行《中国药典》要求.结果 表明,建立了马抗天花病毒免疫球蛋白F(ab')2制品生产工艺,制备的成品符合现行《中国药典》要求,为天花治疗提供了新的救命药.

采用昆虫杆状病毒表达系统,分别制备埃博拉病毒(Ebola virus,EV)埃博拉-扎伊尔(Ebola-Zaire,Z-E)、埃博拉-苏丹(Ebola-Sudan,S-E)病毒样颗粒(virus like particles,VLP)抗原,利用区带离心法和层析法两步纯化抗原,2种抗原等量混合并加入等量不完全佐剂充分乳化,免疫马匹;当利用自制的Z-E、S-EEV假病毒测定血清的中和抗体效价均达120/μL时,采血,分离血清,按照免疫球蛋白F(ab')2生产工艺制备治疗性抗体成品,并对其进行中和抗体效力、安全性检测.结果 显示,包装的2种假病毒滴度均在40 000荧光值/μL以上;纯化的2种VLP抗原浓度均在3 mg/L以上,纯度均在95％以上;纯化的F(ab')2成品,纯度在90％以上,中和抗体效价均超过100/μL;安全性符合现行《中国药典》要求.结果 表明,建立了马抗EV免疫球蛋白F(ab')2制品生产工艺,制备的成品符合现行《中国药典》要求,为埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD)治疗提供理论依据.

71型肠道病毒(enterovirus 71,EV71)是引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要病原体,在亚太地区流行,至今尚无特效药物.手足清栓作为治疗手足口病的中药方剂因可接受性强、无可见副作用而受到青睐,但治疗效果和作用机理至今尚未见有报道.为阐明手足清栓对手足口病模型的治疗效果和作用机理,本研究测定手足清栓对健康Vero细胞的毒性和对EV71-BJ株感染Vero细胞模型的治疗效果,测定药物作用与否的Vero细胞感染模型的病毒载量;测定手足清栓经灌肠途径对健康小鼠的毒性和对EV71-BJ株感染小鼠模型的治疗效果,重点观察手足清栓药物对EV71-BJ株重症感染小鼠模型死亡率、体质量、临床症状的改善情况,测定手足清栓经灌肠途径给药对EV71-BJ株重症感染小鼠模型靶组织产生的病变程度、病毒载量、炎性分子的变化特征,从而探索手足清栓治疗EV71感染的机制.体外结果显示,在EV71-BJ株感染Veto细胞模型上,于对细胞无肉眼可见毒性质量浓度下(生药60mg/L),手足清栓通过降低感染细胞的病毒载量显著抑制EV71感染引起的Vero细胞病变;体内结果显示,在无毒质量浓度条件下(生药11.05 g/kg),手足清栓通过降低病毒载量、改善组织病理变化、降低炎性分子浓度机制降低EV71感染小鼠模型的死亡率,改善发病小鼠的临床症状.结果 表明,手足清栓可通过抗病毒明显提高小鼠的存活率,能够减轻EV71感染引起的HFMD的临床症状.

目的:研制金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)精制免疫球蛋白,即马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品,为SEB中毒的救治提供候选药.方法:利用传统的发酵和纯化工艺制备天然SEB纯品,并建立小鼠实验动物模型;利用分子克隆和蛋白质纯化技术,克隆、表达、纯化重组SEB,加入适量弗氏佐剂充分乳化,免疫马匹,测定免疫马匹血清中和抗体效价后采血,分离血清,按照成熟的生产工艺制备治疗性抗体成品;对成品进行安全性检测及免疫救治效果评价.结果:纯化的天然SEB经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度大于90％,对小鼠腹腔注射的半数致死量为0.5μg/kg;纯化的重组SEB表达量超过2 mg/mL,经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度大于90％,对小鼠腹腔注射的半数致死量为50μg/kg;免疫马匹血清中和抗体效价达2000 U/mL以上时,采血并制备F(ab′)2成品,经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度在80％以上,中和抗体效价超过2500 U/mL;安全性符合现行《中国药典》要求;对SEB中毒动物模型有很好的免疫救治效果.结论:建立了SEB精制免疫球蛋白制品生产工艺,制备的成品符合现行《中国药典》要求,为SEB中毒的救治提供了候选药.