目的 探讨不同半夏炮制品体外抗肺纤维化的作用及筛选出的半夏制品对肺纤维化小鼠的干预作用.方法 用10μg/L转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞系(MRC-5)建立肺纤维化体外模型,经水提生半夏(2.1、4.2、8.4、16.7 g/L)、清半夏(2.1、4.2、8.4、16.7 g/L)、法半夏(2.1、4.2、8.4、16.7 g/L)和姜半夏(2.1、4.2、8.4、16.7 g/L)分别处理48 h后,通过CCK-8法检测细胞活性、天狼星红染色法测定胶原含量进行抗纤维化筛选.用Western blot分析筛选出的生半夏干预MRC-5细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的情况.C57BL/6N小鼠经口腔进行气管滴注博来霉素(2 mg/kg)建立肺纤维化模型,第14天开始灌胃生半夏水提液(2.5、5.0、10.0 g/kg),第28天取肺组织经HE和Masson染色观察,并测定羟脯氨酸(HYP)含量.结果 与对照组比较,TGF-β1诱导后的MRC-5细胞对生半夏(8.4 g/L)的细胞活性抑制作用更敏感(P<0.05),而未经TGF-β1诱导的MRC-5细胞则需要更高浓度的生半夏或清半夏(16.7 g/L)抑制细胞活性(P<0.05).与模型对照组比较,生半夏(8.4、16.7 g/L)能够抑制TGF-β1诱导的胶原合成(P<0.05),清半夏、法半夏、姜半夏各组未见抑制效应.与模型对照组比较,生半夏(2.1、4.2、8.4 g/L)能够抑制TGF-β1诱导的MRC-5细胞中 α-SMA蛋白的表达(P<0.05).生半夏(10 g/kg)能够缓解肺纤维化模型小鼠肺间质中的炎性浸润,恢复肺泡结构,减少胶原沉积,降低肺组织中的HYP含量(P<0.05).结论 生半夏对TGF-β1诱导后的病理性肌成纤维细胞具有活性抑制作用,并能阻止成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,抑制其胶原合成,缓解模型小鼠的肺纤维化进展,为临床应用半夏治疗肺纤维化提供新的思路.

目的 探讨甘草酸对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49 F)中纤维化相关因子表达的影响.方法 体外培养NRK-49 F细胞,不同浓度甘草酸干预细胞48 h后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,确定对细胞活性无显著影响的作用浓度.以10μg/L TGF-β1刺激NRK-49 F细胞构建肾间质纤维化细胞模型,加入不同浓度甘草酸进行干预,免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL1)表达情况.实时荧光定量PCR、Western Blot法检测纤维化相关因子α-SMA、COL1、Ⅲ型胶原(COL3)mRNA及蛋白表达情况,以评价甘草酸对成纤维细胞活化及细胞外基质分泌的影响.结果 CCK-8结果显示甘草酸在100～600μmol/L浓度范围内对NRK-49 F细胞活性无影响.免疫荧光结果表明,加入甘草酸后可抑制 α-SMA表达及COL1分泌,随甘草酸浓度增加,抑制作用增强.Western Blot结果显示,与模型组相比,甘草酸干预可下调α-SMA、COL1、COL3的蛋白表达,其中甘草酸150μmol/L组COL1的蛋白表达水平降低(P<0.01),甘草酸200μmol/L组COL1、COL3表达均降低(P<0.01).RT-PCR结果表明,与模型组相比,甘草酸干预可下调α-SMA、COL1、COL3表达,甘草酸150μmol/L组COL1 mRNA的表达水平降低(P<0.01),甘草酸200μmol/L组COL1、COL3 mRNA表达均降低(P<0.01).结论 甘草酸能够有效抑制TGF-β1诱导的NRK-49 F细胞中α-SMA、COL1、COL3的mRNA及蛋白表达,其作用机制有待进一步探讨.

目的 探讨姜黄素对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F)中小分子RNA-21(miR-21)及纤维化相关因子表达的影响.方法 将NRK49F细胞分为正常组、模型组、姜黄素组.模型组以TGF-β1(10μg/L)诱导NRK49F细胞活化,姜黄素组以高、中、低浓度(20、10、5μmol/L)干预24 h和72 h.免疫荧光方法及高内涵成像分析设备检测并分析NRK49F细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化;RT-PCR方法检测NRK49F细胞中miR-21及纤维化相关因子COL1 A1、COL3 A1、α-SMA、Smad3 mRNA表达的变化.结果 TGF-β1作用于NRK49 F细胞72 h后,能明显上调细胞中α-SMA蛋白的表达(P<0.01);与模型组相比,姜黄素各组的α-SMA蛋白表达明显下调(P<0.01、P<0.01、P<0.05).TGF-β1作用于NRK49F细胞24 h后,能明显上调细胞中miR-21、COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA的表达(P<0.01);与模型组相比,姜黄素高、中浓度组可明显抑制miR-21、COL1 A1、COL3 A1、α-SMA、Smad3 mRNA的表达(P<0.01或P<0.05);姜黄素低浓度组可明显抑制COL1A1、COL3A1、α-SMA mRNA的表达(P<0.01),对miR-21、smad3 mRNA的表达有下调的趋势.结论 姜黄素能够有效抑制TGF-β1诱导的NRK49F细胞中纤维化相关因子的基因及蛋白表达,其作用与下调miR-21的表达相关.

This study was aimed to explore traditional Chinese medicine (TCM) professor Niu Jianzhao's medication rule in prescription with climacteric syndrome.Prescriptions treating climacteric syndrome that built by professor Niu were collected to build a database based on TCM Inheritance Assist System.The method of association rules with apriori algorithm was used to achieve frequency of single medicine,nature,taste and channel tropism of herbs,frequency of drug combination,association rules between herbs and core herb combinations.The data mining results showed 22 types of herbs used with high frequency,28 pairs of herb combination with most frequency,20 groups of herb association rules with the confidence of more than 0.95,52 herb pairs with high association,32 groups of three herbs as the core combinations,and 7 new prescriptions.It was concluded that in professor Niu Jianzhao's treatment of climacteric syndrome,the drugs were commonly used to invigorate the kidney,liver and spleen,and in combination with promoting blood circulation and calming the nerves.The medicinal properties of used herbs were even,warm or slightly cold.The tastes of used herbs were sweet,bitter and spicy.The channel tropisms of used herbs were the liver,kidney and lung meridian.This study highlighted data mining as an important tool for expedited analysis of TCM professor Niu Jianzhao's medication rules in prescriptions with climacteric syndrome.

随着现代科技发展,中医受到西方医学的影响与冲击,“中医西化”现象越发突出,中医的传承面临巨大的考验,急需重视,故选取北京中医药大学高年级临床实习学生200人,了解已实习的高年级学生对于中医西化现象的认识和态度,探讨影响中医西化现象的因素,对中医教学培养模式提出建议.