目的:观察大黄?虫丸对博来霉素致肺纤维化大鼠Rho/ROCK信号通路表达情况的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制.方法:将80只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组(Control组)、模型组(Model组)、吡非尼酮组(PFD组)、大黄?虫丸大剂量组(DHZC-H组)、大黄?虫丸中剂量组(DHZC-M组)、大黄?虫丸小剂量组(DHZC-L组).采用一次性气管内滴入博来霉素(5 mg/kg)复制肺纤维化大鼠模型;给药28 d后处死大鼠,行ELISA法检测TGF-β 1、TNF-α含量;RT-PCR法检测ROCK1、α-SMAmRNA表达;Western blot法检测p-RhoA、ROCK1、p-MLC蛋白表达.结果:与Model组比较,各治疗组TGF-β 1浓度和DHZC-L组TNF-α浓度显著降低(P＜0.01,P＜0.05);DHZC-L组TGF-β 1浓度显著低于PFD组(P＜0.05).与Model组和PFD组比较,DHZC-M组和DHZC-L组ROCK1、α-SMA mRNA相对表达量均显著降低(P＜0.01,P＜0.05).与Model组比较,大黄?虫丸各剂量组p-RhoA蛋白相对表达量以及各治疗组ROCK1、p-MLC蛋白相对表达量显著降低(P＜0.05,P＜0.01);且DHZC-L组p-RhoA、ROCK1、p-MLC蛋白相对表达量显著低于PFD组(P＜0.01).结论:大黄?虫丸可通过下调TGF-β 1介导的RhoA/ROCK1信号通路及减少α-SMA mRNA及TNF-α表达,起到抗炎抗纤维化作用.

目的:观察大黄?虫丸含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导后A549细胞RhoA/ROCK信号通路表达情况的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制.方法:正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β1对其诱导48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮作为阳性对照药,RT-PCR法检测TGF-β1、ROCK1、Collagen Ⅲ mRNA 的表达;Western Blot 法检测p-RhoA、ROCK1、α-SMA 蛋白的表达.结果:成功获取发生上皮细胞-间充质转化(EMT)的A549细胞;与模型组比较,各给药组Collagen Ⅲ mRNA表达均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,除大黄?虫丸大剂量组ROCK1 mRNA下调不明显外,其他各实验组TGF-β1 mRNA、p-RhoA蛋白、ROCK1 mRNA及其蛋白的表达均出现不同程度下调(P＜0.01).结论:大黄?虫丸可通过不同程度下调TGF-β1介导RhoA/ROCK1信号通路相关的EMT程度,起到抗纤维化作用,且与其剂量密切相关.

目的 基于"特发性肺纤维化患者存在肺络干血"假说,观察大黄麈虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞EMT及Smad2,Collagen Ⅰ表达的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制.方法 正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β1对其干预48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮作为阳性对照药,RT-PCR法检测EMT相关基因及Smad2 mRNA的表达;Western blot法检测Smad2、p-smad2、Collagen Ⅰ蛋白表达.结果 成功获取发生EMT的A549细胞;以Fibronectin mRNA表达情况判断EMT程度由高到低依次为:模型组(M),大黄(廑)虫丸含药血清大剂量组(D),大黄(廑)虫丸含药血清中剂量组(Z),西药组(P),大黄(廑)虫丸含药血清小剂量组(X),空白对照组(K);作为细胞外基质(EMC)重要成分,与M相比,Z与X中Collagen Ⅰ表达显著降低(P＜0.01),亦较接近K中表达(P＞0.05);与M相比,X中Smad2表达显著降低(P＜0.01),P与Z中Smad2表达降低(P＜0.05),且表达值均接近K(P＞0.05);与M相比,D、Z、X中Smad2 mRNA及p-smad2表达均显著降低(P＜0.01),但与K中表达值亦有显著差异(P＜0.01).结论 大黄(廑)虫丸对TGF-β1干预后A549细胞发生EMT程度及Smad2,Collagen Ⅰ的表达有影响,推测大黄(廑)虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1/Smad2介导的EMT有关.

目的 基于"特发性肺纤维化(IPF)患者存在肺络干血"假说,观察大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响,探讨其防治特发性肺纤维化的作用机制.方法 正常培养并取对数生长期A549细胞,5ng/mL的TGF-β1对其干预后,Masson染色观察上皮-间充质转化(EMT)过程;选择吡非尼酮作为阳性对照药,采用血清药理学和cck-8法观察不同浓度大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖的影响.结果 成功获取发生EMT的A549细胞;24 h,OD值从高到低依次为:空白对照组(K组)、大黄?虫丸含药血清中剂量组(Z组)、大黄?虫丸含药血清小剂量组(X组)、模型组(M组)、大黄?虫丸含药血清大剂量组(D组)、西药组(P组);48 h,OD值从高到低依次为:K组、M组、Z组、X组、P组、D组;72 h,OD值从高到低依次为:K组、M组、D组、Z组、P组、X组.结论 大黄?虫丸含药血清对TGF-β1干预后A549细胞增殖率有影响,推测大黄?虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1诱导的EMT有关.

目的 基于“肺络干血”假说,探究大黄(磨)虫丸对博来霉素致肺纤维化大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响.方法 将60只健康雄性SD大鼠随机分为空白组(A)、模型组(B)、吡非尼酮组(C)、大黄(磨)虫丸大剂量组(D)、大黄鹰虫丸中剂量组(E)、大黄(磨)虫丸小剂量组(F),每组10只.除A组外各组采用气管内滴入博来霉素(5 mg/kg)复制大鼠肺纤维化模型.连续给药28天后处死大鼠,取肺组织行Masson染色观察病理变化,实时PCR检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)及Smad3蛋白的mRNA表达;Western blot法检测Smad3、p-smad3的蛋白表达水平.结果 病理:B组纤维化改变明显,F组纤维化程度为各用药组中最轻.PCR:较A组相比,B～E组大鼠TGF-β1、Smad3及Collagen Ⅰ的基因表达均显著升高(P＜0.01),F组Smad3、Collagen Ⅰ的基因表达显著升高(P＜0.01),TGF-β1的基因表达明显升高(P＜0.05);较B组相比,F组TGF-β1、Smad3的基因表达显著降低(P＜0.01),Collagen Ⅰ的基因表达明显降低(P＜0.05);较C组相比,F组TGF-β1的基因表达显著降低(P＜0.01),Smad3、Collagen Ⅰ的基因表达明显降低(P＜0.05).Western blot:与A组相比,B组Smad3蛋白表达明显升高(P＜0.05)、B～D组p-smad3蛋白表达均显著升高(P＜0.01),E组p-smad3蛋白表达明显升高(P＜0.05);与B组相比,E组Smad3、D组p-smad3蛋白表达明显降低(P＜0.05),E、F组p-smad3蛋白表达均显著降低(P＜0.01);与C组相比,F组p-smad3蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论 大黄(磨)虫丸有抗纤维化的作用,可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减少细胞外基质沉积有关,小剂量使用效果最佳.