目的 探索环状RNA(circRNA)circ_POLA2靶向miR-516a-5p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制.方法 应用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织、结直肠上皮细胞FHC和结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116中circ_POLA2与miR-516a-5p表达.将SW480结直肠癌细胞分为NC组(空白对照)、si-NC组(转染si-NC)、si-circ_POLA2组(转染si-circ_POLA2)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-516a-5p组(转染miR-516a-5p mimic)、si-circ_POLA2+an-ti-miR-NC组(共转染si-circ_POLA2和anti-miR-NC)、si-circ_POLA2+anti-miR-516a-5p组(共转染si-circ_POLA2和anti-miR-516a-5p).Western blot、噻唑基蓝四唑溴化物(MTT)分析和Transwell法分别确定细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白的表达、细胞增殖、迁移侵袭能力.双荧光素酶活性实验检测circ_POLA2是否靶向miR-516a-5p.结果 与癌旁组织或FHC比较,结直肠癌组织、细胞系SW480、SW620、HCT116中circ_POLA2上调,miR-516a-5p下调,差异均具有统计学意义(P<0.05).选择差异最显著的SW480细胞展开后续研究.SW480结直肠癌细胞中Cy-clinD1、MMP2、MMP9蛋白表达、circ_POLA2表达、细胞增殖、细胞迁移和侵袭数量在NC组与si-NC组中差异无统计学意义(P>0.05).si-circ_POLA2组SW480结直肠癌细胞的CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平、细胞增殖、细胞迁移和侵袭数量比si-NC组低,差异均具有统计学意义(P<0.05).miR-516a-5p组SW480结直肠癌细胞的CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平、细胞增殖、细胞迁移和侵袭数量比miR-NC组低,差异均具有统计学意义(P<0.05).circ_POLA2靶向调控miR-516a-5p的表达.si-circ_POLA2+anti-miR-516a-5p组SW480结直肠癌细胞的CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平、细胞增殖、细胞迁移和侵袭数量高于si-circ_POLA2+anti-miR-NC组,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 circ_POLA2在结直肠癌组织和细胞系中上调,敲减其表达通过靶向miR-516a-5p抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭.
目的 探讨下调长链非编码RNA (lncRNA) HOXA-AS3靶向促进微小RNA-29b (miR-29b)对结肠癌细胞LOVO凋亡和奥沙利铂敏感性的影响.方法 实时聚合酶链反应测定结肠癌细胞LOVO、SW1116、HCT116、SW620和正常结肠上皮细胞NCM460中HOXA-AS3表达变化.结肠癌细胞LOVO分成control组、si-NC组、si-HOXA-AS3组、L-OHP+ si-NC组、L-OHP+ si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+ Anti-miR-NC组、si-HOXA-AS3+ Anti-miR-29b组、L-OHP+ si-HOXA-AS3+ Anti-miR-NC组和L-OHP+ si-HOXA-AS3+ Anti-miR-29b组.采用MTT实验、流式细胞术和Western blot分别分析细胞增殖、凋亡以及细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达情况.生物学信息学软件预测HOXA-AS3的靶miRNA,荧光素酶活性测定试剂盒验证HOXA-AS3和miR-29b的靶向关系.结果 与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞LOVO、SW1116、HCT116、SW620中HOXA-AS3表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05).结肠癌细胞LOVO中HOXA-AS3表达水平均高于结肠癌细胞SW1116、HCT116、SW620,差异有统计学意义(P<0.05).与control组、si-NC组比较,si-HOXA-AS3组结肠癌细胞LOVO增殖活性降低,凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05).与si-HOXA-AS3组、L-OHP+ si-NC组比较,L-OHP+ si-HOXA-AS3组结肠癌细胞LOVO增殖活性降低,凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05).与si-HOXA-AS3+ Anti-miR-NC组比较,si-HOXA-AS3+ Anti-miR-29b组结肠癌细胞LOVO增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05).与L-OHP+ si-HOXA-AS3+Anti-miR-NC组比较,L-OHP+ si-HOXA-AS3+ Anti-miR-29b组结肠癌细胞LOVO增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05).下调HOXA-AS3靶向促进miR-29b表达.结论 下调HOXA-AS3可通过靶向促进miR-29b诱导结肠癌细胞LOVO凋亡并提高奥沙利铂敏感性.
[目的]探讨LncRNA FAM230B对结直肠癌细胞增殖及转移的影响及其可能作用机制.[方法]体外培养正常人结肠上皮细胞FHC和人结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116,qRT-PCR法与Western blotting法分别检测LncRNA FAM230B、IL6R mRNA及蛋白表达量;以SW480细胞为研究对象,根据转染物不同分为以下几组:NC组、si-NC组、si-LncRNA FAM230B组、pcDNA组、pcDNA-LncRNA FAM230B组、pcDNA+ si-LncRNA FAM230B组、pcDNA-IL6R+ si-LncRNA FAM230B组;MTT、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭;Western blotting法检测原癌基因(C-myc)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases9,MMP9)蛋白表达量.[结果]与FHC细胞比较,SW480、SW620、HCT116细胞中LncRNA FAM230B和IL6R的表达量升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LncRNA FAM230B组细胞活力降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),C-myc、MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.05),IL6R的表达量降低(P<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-LncRNA FAM230B组细胞活力升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),C-myc、MMP2、MMP9蛋白水平升高(P<0.05),IL6R的表达量升高(P<0.05);与pcDNA+si-LncRNA FAM230B组比较,pcDNA-IL6R+si-LncRNA FAM230B组细胞活力升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),C-myc、MMP2、MMP9蛋白水平升高(P<0.05).[结论]干扰LncRNA FAM230B表达可通过抑制IL6R的表达而减弱结直肠癌细胞增殖及转移能力.