[目的]研究干扰雄性小鼠睾丸Cloc k基因后,对小鼠胚胎着床及后期胎鼠发育的影响,并从甲基化的角度探讨引起胎鼠发育异常的原因.[方法]将成年雄性小鼠分为干扰组和对照组,分别于睾丸中注射干扰质粒和阴性质粒,与经过促排处理的雌鼠合笼,研究比较两组胚胎着床情况,观察两组胎鼠的外形及体重等指标的差异;观察胎鼠组织结构,比较两组是否存在差异;分析胎鼠总甲基化水平,同时测定甲基转移酶(DNMTs)水平,比较两组是否存在差异.[结果]:①与对照组比较,干扰组胚胎着床数下降(14.5 vs.20.33),胎儿体重减轻,死胎和异常胎数增多(P<0.05).②干扰组胎鼠的心脏和脊柱发育分节出现异常.③11.5～16.5 dpc阶段胎鼠总甲基化水平,干扰组较对照组显著降低(8.59 vs.18.25);干扰组甲基转移酶DNMT3B-4的相对IOD值低于对照组(0.124 vs.0.141),有统计学意义.[结论]干扰雄性小鼠睾丸Clock基因,可导致胚胎着床数下降,胎鼠发育异常增多,体重减轻.甲基转移酶DNMT3B-4水平下调及总甲基化水平下降,可能是影响胎鼠发育异常的原因.本研究表明Clock基因与胎鼠发育密切相关,初步探讨引起不育的机制,为揭示该类疾病发病机制提供依据.

利用分泌表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的毕赤酵母发酵液,通过层析条件的优化,建立了重组人Ⅲ型胶原蛋白一步层析纯化工艺.发酵液以硫酸铵(30％饱和度)沉淀胶原蛋白,沉淀用超纯水复溶后超滤转换介质至20 mmol/L磷酸缓冲液(phosphate buffer,PB)(pH 6.0),然后用SP Sepharose HP阳离子交换柱进行纯化,以20 mmol/L PB(pH 6.0)-150 mmol/L NaCl洗涤杂蛋白,以20 mmol/L PB(pH 6.0)-250 mmol/L NaCl洗脱重组人Ⅲ型胶原蛋白.采用该工艺对60 L发酵液进行重组人Ⅲ型胶原蛋白的纯化,产品纯度97.7％,总回收率68.8％,纯化的重组人Ⅲ型胶原蛋白纯度高,热原含量低,可用于医药领域.该研究建立了一步层析法从毕赤酵母发酵液中高效制备重组人Ⅲ型胶原蛋白的纯化工艺,工艺简便、稳定可靠,离子交换层析放大容易,为重组人Ⅲ型胶原蛋白的工业化生产奠定了基础.

目的:探讨不同浓度甲醇对毕赤酵母发酵表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的影响,以寻找最佳甲醇浓度,从而提高毕赤酵母分泌表达人Ⅲ型胶原蛋白的产量.方法:在15升发酵罐中研究了毕赤酵母表达重组人Ⅲ型胶原蛋白时的甲醇浓度.在通气量、搅拌转速最大的情况下,通过控制流加甲醇量,利用甲醇传感器在线检测不同甲醇浓度(0.05％、0.1％、0.2％、0.4％)对毕赤酵母高密度发酵表达重组人Ⅲ型胶原蛋白的影响.结果:经优化后甲醇浓度维持在0.2％时,胶原蛋白表达量达从3 g?L-1提高到8 g?L-1.结论:控制甲醇恒定的浓度可明显提高胶原蛋白的表达量.