Objective To quickly observe the tonic effects of Cervi Colla on enriching blood,strengthening bones and anti-aging in zebrafish model.Methods Glyphosate(Gly)was used to construct the erythrocyte injury model in adult zebrafish,and methotrexate(MTX)was used to construct the hematopoietic function injury model of juvenile zebrafish.Prednisolone(Pred)was used to establish the inhibition model of bone formation in zebrafish larvae.The ocular cell apoptosis model of zebrafish larvae was established by dibutyl phthalate(DBP).Results Cervi Colla could improve the Gly-induced abnormal erythrocyte nucleus in adult zebrafish and promote the expression of hematopoietic factors SCL and GATA1.Cervi Colla improved Pred-induced inhibition of bone formation in juvenile zebrafish,and promoted the expression of osteoblast-related gene ALP and Runx2a.The number of ocular cell apoptosis induced by DBP was decreased,and the expression of anti-apoptotic factor Bcl-2 was promoted.Conclusion Cervi Colla has significant effects on protecting erythrocyte,protecting hematopoiesis,protecting bone formation and anti-apoptosis.These effects may be related to replenish blood,anti-osteoporosis,and anti-aging.This study provides a scientific basis for the clinical application of Cervi Colla,and lays a foundation for further development and application.

目的 探讨归芍方对斑马鱼眼部细胞凋亡模型的影响及其不同提取方法与药理作用间关系,进一步研究归芍方抗眼部细胞凋亡作用相关机制.方法 将受精后30 h斑马鱼分为正常对照组、归芍方药材水提取物(ME)组、水提醇沉提取物(MEA)组和提取物配方(PS)组,于给药后24和48 h观察斑马鱼存活率.吖啶橙染色观察药物对斑马鱼眼部细胞凋亡的影响.将受精后30 h斑马鱼分为正常对照组、模型对照组、人参皂苷Rgl组和低中高浓度ME、MEA、PS组.模型对照组给予10 μmol·L-1邻苯二甲酸二丁酯(DBP),人参皂苷Rg1组及归芍方各给药组于造模同时分别给予1 μmol·L-1人参皂苷Rg1和10,50,100 μg·mL-1ME、MEA及PS,培养18 h后观察眼部细胞凋亡数目.免疫印迹(Western blotting)法检测凋亡相关蛋白Bcl-2表达,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测线粒体mtDNA拷贝数变化.结果 归芍方各提取物100 μg·mL-1及其以下浓度对斑马鱼存活率无显著影响;1 μmol·L-1人参皂苷Rg1可显著降低模型斑马鱼眼部细胞凋亡数目;高浓度(100 μg·mL-1)ME、MEA和PS以及低、中浓度(10,50 μg·mL-1)MEA和PS可显著减少眼部细胞凋亡(P＜0.05),低、中浓度ME对斑马鱼眼部细胞凋亡数目无显著影响.归芍方显著升高模型斑马鱼Bcl-2蛋白表达,显著升高模型斑马鱼线粒体mtDNA拷贝数(P＜0.01).结论 归芍方对模型斑马鱼眼部细胞凋亡具有保护作用,并且MEA与PS药效相当,均优于ME,其抗凋亡作用可能与升高模型斑马鱼Bcl-2蛋白表达及保护线粒体有关.

目的 观察藁本内酯(LIG)对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7向破骨细胞分化的影响,并探讨该作用与G蛋白偶联雌激素受体(GPER)的相关机制.方法 体外培养RAW264.7细胞,RANKL诱导破骨细胞分化,并用LIG进行干预.通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性检测和TRAP染色法评价破骨细胞形成和分化能力;qPCR法检测GPER及破骨细胞相关基因mRNA水平;Western blot法检测GPER蛋白表达;采用GPER特异性拮抗剂G36进行干预,观察LIG干预破骨细胞分化的作用变化.结果 LIG浓度为10μmol/L时,TRAP活性检测结果显示,TRAP活性显著降低(P<0.01);TRAP染色结果显示,与RANKL组相比,LIG组TRAP阳性细胞形成减少(P<0.001);qPCR检测结果显示,与RANKL组相比,LIG组树突状细胞-特异性跨膜蛋白(DC-STAMP)、活化T细胞核因子(NFATc1)、组织蛋白酶K(CTSK)和核因子κB受体(RANK)的mRNA水平显著降低(P<0.05,P<0.001),而GPER mRNA表达明显升高(P<0.001);West-ern blot结果显示,与RANKL组相比,LIG组GPER蛋白表达升高(P<0.001).与LIG组比较,LIG+G36组TRAP阳性细胞数升高(P<0.01),TRAP活性增强(P<0.05),DC-STAMP、NFATc1、CTSK、RANK mRNA的表达升高(P<0.05).结论 LIG能够抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化,其机制可能是促进GPER表达,减少RANK和下游转录因子NFATc1的表达,抑制破骨细胞分化和骨吸收功能.

目的 基于整合文献挖掘和网络药理学探究黄葵胶囊治疗糖尿病肾病(DN)的作用机制.方法 通过中国学术期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库和Web of Science文献检索平台获取黄蜀葵花化学成分,并借助PubChem数据库与ChemBioDraw软件下载化合物结构;借助Swiss Target Prediction和Stitch数据库预测化学成分相应靶点,并于CTD、DrugBank、GeneCards和TTD数据库中获得的DN靶点取交集,得到"成分-疾病"直接共有靶点;利用GeneMANIA获取间接靶点并借助Cytoscape软件构建蛋白质互作网络图;通过基因本体论和京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)对潜在相关靶点进行基因功能富集分析和通路富集分析,并构建黄蜀葵花治疗DN的"成分-直接靶点-间接靶点-通路"网络图.结果 经文献检索得到黄葵胶囊化学成分50个,数据库预测其治疗糖尿病肾病相关靶点182个,KEGG通路富集分析得到187个相关通路,其中6个关键通路可以通过参与调节多个生物过程改善DN疾病的发展.结论 通过文献挖掘与网络药理学初步揭示了黄葵胶囊参与调节机体糖脂代谢、氧化应激、炎症反应、血流动力学紊乱和自噬等生物过程改善DN疾病的发展.

目的 观察阿魏酸(FA)对成骨细胞凋亡的影响及其机制,探讨FA对骨质疏松的潜在治疗作用.方法 选择前成骨细胞系MC3T3-E1,M T T法观察FA对细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2的表达;流式细胞术及DCFH-DA荧光染色观察活性氧(ROS)水平;免疫荧光法观察叉头框蛋白(Fox)家族FoxO3a的核定位;采用G蛋白偶联受体GPR30特异性拮抗剂G15进行干预,观察FA效应的变化.结果 FA在25～400μmol/L范围内对正常细胞无显著影响,但对过氧化氢(H2 O2)损伤后的细胞活力有促进作用;流式结果表明,FA可以减少过氧化损伤后的细胞凋亡率和降低ROS水平;免疫荧光结果表明,FA能阻碍氧化应激条件下细胞凋亡和氧化应激相关蛋白FoxO3a的核内含量.G15处理后,FA引起的抗细胞凋亡、降低ROS水平及FoxO3a核内含量减少作用均被显著阻断.结论 FA具有抗成骨细胞凋亡、降低细胞内ROS水平、阻止过氧化损伤条件下FoxO3a核易位的作用,其机制可能与膜雌激素受体GPR30有关.

远志作为中国传统中药材,药用历史悠久、疗效确切,历代本草均有记载.本文首先综述远志的化学成分和药理作用研究进展,其次,根据中药质量标志物的定义及确定原则,基于文献中相关数据,对远志的潜在质量标志物进行预测性分析,为完善远志药材的质量控制标准提供参考依据.

商陆是中国传统的中药材,近年来,对商陆的研究逐渐深入,其有效成分及药理作用倍受关注,在治疗多种疾病方面具有广泛的应用前景.商陆主要含有的化学成分包括三萜皂苷、多糖、黄酮和酚酸等,现代药理学研究发现其具有利尿、调节免疫、祛痰等作用.在此研究基础上,根据中药质量标志物的定义,本文从传统功效、传统药性、临床新用途、可测成分、炮制前后成分变化及入血成分等几个方面对商陆的质量标志物进行预测分析,为商陆质量评价研究提供科学依据.

研究1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-pentyl-O-galloyl-beta-D-glucose,PGG)骨保护作用及其抗成骨细胞凋亡相关机制.建立泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型,钙黄绿素染色观察PGG对斑马鱼骨骼面积的影响.体外培养骨髓间充质干细胞,茜素红染色观察钙化结节数目,qRT-PCR法检测成骨细胞分化相关指标Runt相关转录因子2 (Runt-related transcription factor2,Runx 2)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)的mRNA水平;体外培养前成骨细胞系MC3T3-E1,过氧化氢(400 μmol·L-1)建立氧化应激模型,观察在该模型下PGG对成骨细胞的作用.采用MTT法检测PGG对成骨细胞活力的影响;Hoechst 33342染色观察PGG对细胞凋亡的作用;Western blot检测PGG对抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor2,Nrf2)及下游蛋白血红素氧合酶-1 (heme oxygenase-1,HO-1)的表达;DCFH-DA荧光染色检测细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;JC-1荧光染色检测线粒体膜电位水平.结果 显示,与模型组相比,PGG可以显著提高斑马鱼模型椎骨面积;成骨细胞分化第14天时,与空白组相比,PGG组钙化结节数目显著增多,Runx2、OCN的mRNA 水平显著提高;此外,在氧化应激环境下,PGG可以提高成骨细胞活力,显著减少凋亡细胞数,提高Bcl-2/Bax的比率;荧光染色结果显示,PGG降低细胞内ROS荧光密度,提高线粒体膜电位.Western blot实验数据显示,PGG可以促进核内Nrf2蛋白表达,并增强下游蛋白HO-1的表达.综上,PGG可改善斑马鱼骨质疏松,且该作用可能与调控Nrf2/HO-1信号通路改善线粒体功能障碍,抗氧化应激环境下成骨细胞凋亡从而促进骨形成有关.本研究为抗骨质疏松治疗药物的发现提供新的思路与线索.

Periplocae Cortex is a traditional Chinese medicine in China, which is mainly produced in northeast China, north China, northwest China, southwest China. In recent years, the increasing in-depth research resulted in the discovery of anti-tumor and cardiac pharmacological activities of Periplocae Cortex, which has broad application prospects. On the basis of summarizing chemical components and pharmacological effects, combined with the theoretical system of Q-marker, the quality control components of Periplocae Cortex were predicted from the aspects of the correlation between chemical composition and traditional medicinal properties, traditional efficacy, and new clinical use, plasma composition, measurable composition, storage time by analyzing literature. Among the components, periplocoside, periplocin, periplogenin, 4-methoxy salicylaldehyde showed significant activity, which provides a scientific basis for quality evaluation of Periplocae Cortex.

目的 基于网络药理学探讨枣仁安神颗粒治疗失眠的作用机制.方法 通过查阅相关文献,挖掘枣仁安神颗粒的入血成分,并采用反向分子对接,预测入血成分的相关靶点,与失眠靶点进行交集映射,获得其治疗失眠的作用靶点.利用蛋白互作筛选核心靶点,并进行分子对接验证.基于共有靶点,采用功能注释生物信息学芯片进行分析,得到枣仁安神颗粒治疗失眠的关键通路.结果 方中3味中药酸枣仁、丹参、北五味子共得到29个入血成分和184个潜在靶点,其中19个成分、60个靶点和36条通路与失眠极为密切,主要涉及神经活性配体-受体相互作用、色氨酸代谢、5-羟色胺能突触、GABA能突触等相关分子环节.结论 方中3味中药以作用靶点为媒介,连接入血成分及相关通路,从而发挥抗失眠的生物学效应,体现了中药多成分、多靶点,多途径协同起效的作用特点.

目的 研究芍药苷(PF)对前成骨细胞凋亡的影响及相关机制,通过斑马鱼骨质疏松模型验证其整体效应.方法 体外培养前成骨细胞系MC3T3-E1细胞,采用地塞米松(DEX,1μmol/L)诱导细胞凋亡,观察PF的干预效应.采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测抗凋亡蛋白Bcl-2和凋亡蛋白Bax的表达,免疫荧光检测FoxO3a的核易位情况.建立泼尼松龙(Pred,25μmol/L)诱导的斑马鱼骨质疏松模型,钙黄绿素染色观察PF对Pred干扰的斑马鱼骨骼面积的影响,qPCR检测破骨标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(CTSK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及成骨细胞标志基因碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2a(Runx2a)、锌指转录因子7(Sp7)的mRNA变化.结果 PF可缓解DEX对MC3T3-E1的细胞活力的抑制作用,并显著降低细胞凋亡率;对凋亡相关蛋白的检测发现,PF显著促进Bcl-2的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比率;进一步研究发现PF可显著抑制FoxO3a的入核.与Pred组相比,PF增加了斑马鱼第一椎骨的骨骼面积,抑制了TRAP、CTSK和MMP-9的基因表达,促进了ALP、Runx2a和Sp7的基因表达.结论 PF能够抑制前成骨细胞凋亡,改善斑马鱼骨质疏松,该作用可能与升高 Bcl-2/Bax 比率及抑制 FoxO3a 的核易位有关.

<span id="ChDivSummary" name="ChDivSummary" class="abstract-text">目的建立邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导的斑马鱼眼部细胞凋亡模型,并用于抗眼部细胞凋亡药物的活性评价。方法斑马鱼受精后30 h（hpf）,加入DBP(0.1、10、50、100μmol·L^-1)18 h和42 h,观察斑马鱼的存活率;将30或54 hpf的斑马鱼在直射光或非直射光条件下,加入DBP(0.1、1、5、10、50μmol·L^-1)造模18 h,吖啶橙染色（AO）,采用体视荧光显微镜观察斑马鱼眼部细胞凋亡情况;造模同时,给予不同浓度N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）或人参皂苷Rg1,观察药物对斑马鱼眼部细胞凋亡的影响。结果 DBP造模18、42 h, 10μmol·L^-1及以下浓度对鱼卵存活率无明显影响,50μmol·L^-1及以上浓度会致使斑马鱼存活率明显降低（P&lt;0.01）;30 hpf的斑马鱼在10μmol·L^-1 DBP造模18 h后显示明显的眼部细胞凋亡（P&lt;0.01）。斑马鱼在72 h可见眼部细胞自发性凋亡,且与光照条件无关。在该造模条件下,NAC或人参皂苷Rg1均能抑制斑马鱼眼部细胞凋亡（P&lt;0.05）。结论利用DBP可快速高效地建立斑马鱼眼部细胞凋亡模型,该模型可用于药物活性的快速评价。</span>