The results of the innovative pilot project for kit development for hepatitis E serum-diagnostic assays of the Interstate Program for Innovative Cooperation of the CIS member states for the period up to 2020 are presented. The project was carried out by I.I. Mechnikov Federal State Medical Research Institute for Vaccines and Sera in association with the National Institute of Public Health of the Ministry of Health of the Kyrgyz Republic and Belarusian medical and veterinary research institutions. As a result of research recombinant antigens of the prevalent in the CIS countries HEV genotypes 1 and 3 were developed, and a set of diagnostic assays was made, namely: test for quantification of IgG antibodies to HEV, test for determination the avidity of IgG antibodies to HEV, test for measuring the total antibodies to HEV, test for detection IgM antibodies to HEV, test for detection HEV antigen, confirmation test for detection antibodies to HEV by linear immune assay, immune-chromatographic rapid test for detection the antibodies to HEV and a high-precision test for detection HEV RNA in sera and plasma by PCR. The results of serum epidemiological and molecular epidemiological studies performed in the regions of Russia, Kyrgyzstan and Belarus indicated a consistent increase proportion of hepatitis E in the structure of acute hepatitis cases in these countries with the avoidance of a large number of the cases from diagnosis and registration. Представлены результаты выполнения инновационного пилотного проекта по созданию тест-систем для серодиагностики гепатита Е Межгосударственной программы инновационного сотрудничества государств – участников СНГ на период до 2020 года. Проект выполнялся совместно ФГБНУ НИИВС им. И.И. Мечникова, Национальным институтом общественного здоровья Министерства Здравоохранения Кыргызской Республики и научно-исследовательскими учреждениями медицинского и ветеринарного профилей Республики Беларусь. В результате проведенных исследований были разработаны рекомбинантные антигены доминирующих на территории стран СНГ 1 и 3 генотипов ВГЕ и на их основе создан комплекс иммуноферментных тест-систем: для количественного определения IgG-антител к ВГЕ, для определения авидности IgG-антител к ВГЕ, для определения суммарных антител к ВГЕ, для определения IgM-антител к ВГЕ, для детекции антигена ВГЕ, а также подтверждающая тест-система для определения антител к ВГЕ методом линейного иммуноанализа, иммунохроматографический экспресс-тест для выявления антител к ВГЕ и высокоточная тест-система для выявления РНК ВГЕ в сыворотке и плазме крови методом ПЦР. Результаты серо-эпидемиологических и молекулярно-эпидемиологических исследований, проведенных в регионах России, Кыргызстана и Беларуси, свидетельствовали о последовательном увеличении доли ГЕ в структуре заболеваемости острыми гепатитами на территории всех трех стран с ускользанием большого числа случаев заражения от диагностики и регистрации. КМШга мүчө-мамлекеттердин 2020-жылга чейинки мезгилге Инновациялык кызматташтыктын мамлекеттер аралык программасынын Е гепатитин серодиагностикалоо үчүн тесттик системаларды түзүү бою нча инновациялык пилоттук долбоорду ишке ашыруунун жыйынтыктары сунушталды. Долбоор И.И. Мечников атындагы Федералдык мамлекеттик бюджеттик мекемеси жана Кыргыз Республикасынын Саламаттык сактоо Министрлигинин коомдук саламаттыкты сактоо улуттук институту, Беларусь Республикасынын медициналык жана ветери нария илим-изилдөө профилиндеги илимий-изилдөө мекемелери менен ишке ашырылып жатат. Изилдөөнүн жыйынтыгында КМШ өлкөлөрүндө басымдуулук кылган 1 жана 3 ВГЕ генотиптеринин, ВГЕге IgG антителолорун санын, ВГ Еге IgG антителолорунун активдүүлүгүн, ВГЕге суммардык антителосун, ВГЕге IgM антителолорун, ВГЕнин антигенине детекциясын аныкташ үчүн рекомбинанттуу антигендери иштелип чыккан жана ошондой эле сызыктуу иммундук анализди колдонуу менен ВГЕге антителолорду аныктоо үчүн ырастоочу тест системасы, ВГЕге антителолорду аныктоо үчүн иммунохроматографиялык экспресс-тест жана ПТРдин жардамы менен кан сары суусунда жана кан плазмасында ВГЕге РНКсын аныктоо үчүн жогорку тактыктагы тест системасы иштелип чыкты. Россия, Кыргызстан жана Беларусия өлкөлөрүндө жүргүзүлгөн сероэпидемиологиялык жана молекулярдык эпидемиологиялык изилдө өлөрдүн натыйжалары үч өлкөдө тең курч гепатит менен ооругандардын структурасында тастыктоодон жана каттоодон качкан гепатиттин үлүшүнүн ырааттуу көбөйгөнүн көрсөттү.

Background. The incidence rates of hepatitis E in Belarus do not correspond to the prevalence of anamnestic antibodies in residents of the republic. Objective. To develop a set of preventive measures aimed at preventing the spread of the hepatitis E virus. Material and methods. 5745 blood sera samples were studied for the presence of anti-HEV IgG and IgM from healthy individuals (n=2784), foreign citizens (n=1457), blood donors (n=378), domestic pigs (n=1126). 130 blood sera samples were examined for the presence of HEV RNA. Results. The seroprevalence of anti-HEV IgG amounts to 7.3% (95 CI 5.8–9.0) in the general population, it is 11.2% (95% CI 9.6–12.9) in the group of patients with liver damage, 5.22% (95% CI 4.11–6.53) among foreign citizens, 33.75% (95% CI 30.44–37.32) among domestic pigs. The prevalence of anti-HEV IgM in the general population is 1.35% (95% CI 0.75–2.22), in ALT positive patients – 4.25% (95% CI 3.32–5.37), in foreign citizens – 1.03% (95% CI 0.58–1.7), in ALT positive donors – 2.89% (95% CI 1.25–5.69). Conclusions. There have been provided the epidemiological characteristics of HEV in Belarus. There has been developed a set of preventive measures.

Введение. Показатели заболеваемости гепатитом Е (ВГЕ) в Беларуси не соответствуют частоте встречаемости анамнестических антител у жителей республики. Цель исследования – изучение эпидемического процесса ВГЕ в Беларуси. Материал и методы. Изучено 5745 сывороток крови на наличие анти-ВГЕ IgG и IgM: у жителей Брест-ской и Минской областей (n=2784), иностранных граждан (n=1457), у доноров крови (n=378), у домашних свиней (n=1126). Исследовано 130 сывороток крови на наличие РНК ВГЕ. Секвенировано 9 фрагментов генома ВГЕ. Проведено генотипирование 37 последовательностей ВГЕ. Результаты. Серопревалентность анти-ВГЕ IgG в общей популяции жителей Беларуси составляет 7,3% (95 ДИ 5,8-9,0), в группе пациентов с поражением печени – 11,2% (95% ДИ 9,6-12,9), у иностранных граждан – 5,22% (95% ДИ 4,11-6,53), у домашних свиней – 33,75% (95% ДИ 30,44-37,32). Встречаемость анти-ВГЕ IgM у людей общей популяции составляет 1,35% (95% ДИ 0,75-2,22), у АлАт положительных пациентов – 4,25% (95% ДИ 3,32-5,37), у иностранных граждан – 1,03% (95% ДИ 0,58-1,7), у АлАт положительных доноров – 2,89% (95% ДИ 1,25-5,69). Все последовательности РНК ВГЕ, выделенные в Беларуси, вызваны 3 генотипом. Выводы. Дана эпидемиологическая характеристика ВГЕ в Беларуси. Изучена иммуноструктура анти-ВГЕ разных когорт населения. Установлены случаи завоза ВГЕ на территорию республики, выявлены аутохтонные случаи ГЕ.

Background. The incidence of hepatitis E (HEV) in Belarus differs from the frequency of occurrence of anamnestic antibodies in the population. Objective. To study the epidemic trends of HEV in Belarus. Material and methods. The study included 5745 samples of blood serum obtained from: residents of Belarus (Brest and Brest region, Minsk and Minsk region) – 2784; foreign citizens - 1457; +ALT and -ALT blood donors – 378; domestic pigs - 1126. All samples were tested for anti-HEV IgG and IgM and 130 samples - for HEV RNA, 9 samples were genotyped by Sanger sequencing. Results. Seroprevalence of anti-HEV IgG in the population amounts to 7.3% (95 CI 5.8-9.0), and in patients with liver damage – to 11.2% (95% CI 9.6-12.9). For foreign citizens it equals 5.22% (95% CI 4.11-6.53), for domestic pigs – 33.75% (95% CI 30.44-37.32). The incidence of anti-HEI IgM in the population amounts to 1.35% (95% CI 0.75-2.22), and in patients with liver damage – to 4.25% (95% CI 3.32-5.37). For foreign citizens it equals 1.03% (95% CI 0.58–1.7), for +AlAT donors – 2.89% (95% CI 1.25–5.69). All HEV RNA sequences isolated in Belarus are caused by genotype 3. Conclusions. Epidemiological characteristics of HEV in Belarus are presented. The anti-HEV immunostructure of various population cohorts was studied. There have been established cases of imported HEV. Autochthonous cases of HEV have been identified as well.

The article provides the results of a comparative analysis of the relationship of swine hepatitis E virus infection with vari-ous liver lesions in animals on industrial pig breeding complexes. A wide territorial spread of infection of pigs with hepatitis E virus has been established, which proceeds in the form of a latent infection without pronounced clinical signs. When comparing the results of serological studies for the presence of antibodies to the hepatitis E virus in pigs and the results of post-murder de-tection of hepatitis, the incidence of pathology is almost the same, 13.6 % and 14.8 %, respectively. In the case, toxic liver dystro-phy, as the leading cause of death, accounts for 7.7−10.2 % of cases.

Целью исследования явилось изучение эпидемического процесса вируса гепатита Е в Беларуси. Исследовано 2784 сыворотки крови практически здоровых людей, проживающих в Беларуси, 1457 сывороток иностранных граждан, временно пребывающих на территории республики, 1126 образцов сыворотки крови свиней. В сыворотке крови определяли активность АлАТ кинетическим методом и анти-ВГЕ IgG и IgM методом иммуноферментного анализа. Выявление РНК ВГЕ осуществляли с помощью ПЦР-анализа. Нуклеотидную последовательность фрагмента генома ВГЕ определяли в ходе прямого секвенирования ампликонов на автоматическом секвенаторе 3500 Genetic Analyzer. Анализ нуклеотидных последовательностей ВГЕ, их генотипирование выполняли с помощью программного обеспечения MEGA X. Изучены особенности эпидемического процесса вируса гепатита Е в Республике Беларусь. Частота встречаемости анти-ВГЕ IgG в общей популяции жителей Беларуси составляет 81/1114 - 7,3% (95% ДИ 5,8-9,0). В группе пациентов с поражением печени этот показатель достоверно выше и составляет 187/1669 - 11,2% (95% ДИ 9,6-12,9). В сыворотке крови 76 иностранных граждан из 1457, временно пребывающих на территории Беларуси, были обнаружены анти-ВГЕ IgG, что составляет 5,22% (95% ДИ 4,11-6,53). У 15 были выявлены также анти-ВГЕ IgM, что составляет 1,03% (95% ДИ 0,58-1,7). В 380 из 1126 исследованных образцов сывороток крови домашних свиней были обнаружены анти-ВГЕ IgG, что составляет 33,7% (95% ДИ 30,44-37,32). Все случаи гепатита Е, выявленные в Беларуси, вызваны 3-м генотипом и часто являются автохтонными. На территории Беларуси происходит интенсивная циркуляция ВГЕ. Эпидемический процесс ВГЕ в Беларуси носит скрытый характер. Реальное распространение ВГЕ среди населения РБ многократно превосходит частоту диагностированных случаев, что указывает на отсутствие настороженности медицинского персонала относительно ГЕ и субклиническое течение заболевания у большинства пациентов. The purpose of this work was to study the epidemic process of the hepatitis E virus in Belarus. Investigated 2784 blood serum of practically healthy people living in Belarus, 1457 foreign citizens temporarily staying on the territory of the republic, 1126 samples of pig blood serum. In the blood serum, the activity of alanine aminotransferase was determined by the kinetic method and anti-HEV IgG and IgM by the ELISA method. HEV RNA was detected by PCR. The nucleotide sequence of the HEV genome fragment was determined by direct sequencing of amplicons on an automatic sequencer 3500 GeneticAnalyzer. Analysis of the nucleotide sequences of HEV and their genotyping was performed using the MEGA X software. The features of the epidemic process of the hepatitis E virus in the Republic of Belarus have been studied. The frequency of occurrence of anti-HEV IgG in the general population of Belarusians is 81/1114 - 7.3% (95% CI 5.8-9.0). In the group of patients with liver damage, this indicator is significantly higher and amounts to 187/1669 - 11.2% (95% CI 9.6-12.9). Anti-HEV IgG was found in the blood serum of 76 foreign citizens out of 1457 temporarily staying in Belarus, which is 5.22% (95% CI 4.11-6.53). Anti-HEV IgM was also detected in 15, which is 1.03% (95% CI 0.58 - 1.7). Anti-HEV IgG was detected in 380 out of 1126 blood serum samples from domestic pigs, which is 33.7% (95% CI 30.44%-37.32%). All cases of hepatitis E detected in Belarus are caused by genotype 3 and in many cases are autochthonous. Intensive circulation of HEV takes place on the territory of Belarus. The epidemic process of HEV in Belarus is latent. The actual prevalence of HEV among the population of the Republic of Belarus is many times higher than the frequency of diagnosed cases, which indicates the lack of alertness of medical personnel about HEV and the subclinical course of the disease in most patients.

The methods of obtaining of transovarial immunoglobulins for the development of veterinary biological preparation of a new generation are shown in the article. In the process of the research, the most effective method of isolat-ing of transovarial immunoglobulins was determined - the method using organic solvents, and also the most optimal way to purify them by precipitation using PEG-6000, which allows to obtain the maximum result at relatively low cost. The results of the study of structural and functional features of the obtained yolk immunoglobulins of laying hens IgY in a comparative aspect are presented.

Production tests of the vaccine for the prevention of pasteurellosis, bordetelliosis and myxomatosis of rabbits «Respimix» in terms of immunogenic activity were carried out. It has been established that the «Respimix» vaccine is a harmless and immunogenic preparation, superior in its preventive efficacy to the «Rabbiwak-V» preparation taken by us as a control one. The administration of the Respimix vaccine to rabbits promotes the production of antibodies to all antigens included in the vaccine, namely to Pasteurella multocida and Bordetella bronchiseptica bacteria and to rabbit myxoma virus. The veterinary drug «Vaccine for the prevention of pasteurellosis, bordetelliosis and myxomatosis of rabbits “Respimix”» can be recommended for use in veterinary practice.

Цель. Разработка новой тест-системы для выявления РНК вируса гепатита Е в различных типах биологического материала. Материалы и методы. В исследовании использовались образцы биологического материала, включающие цельную кровь, плазму и сыворотку крови, мочу, желчь и фекалии, от 97 пациентов, 79 свиней, 28 диких кабанов, 40 оленей, 359 кроликов, из панели положительных и отрицательных образцов, подготовленной в течение 2017-2021 гг. Выбор потенциальных репликонов и анализ нуклеотидных последовательностей ВГЕ (3-й тип), полученных из GenBank, выполняли с помощью программного обеспечения MEGA X. Дизайн и анализ пригодности олигонуклеотидных праймеров для проведения ПЦР-РВ осуществляли с помощью on-line сервисов Primer3 и OligoAnalyzer3.1. Результаты. В результате дизайна олигонуклеотидных праймеров и модификации определенных сайтов вырождениями был получен комплект кандидатов, включающий прямой/обратный праймеры и зонд, которые обладали существенно более высокой специфичностью в отношении изучаемых последовательностей ВГЕ. Расчетная специфичность для детекции выбранных для изучения полногеномных последовательностей составила 490/525 (93,3±0,42%, p<0,001). При использовании разработанного нами набора реагентов для ОТ-ПЦР-РВ РНК ВГЕ была выявлена в 66,7%, в то время как применение коммерческого набора RealStar®_HEV_RTPCR_Kit_2.0 позволило обнаружить РНК ВГЕ в 50% образцов, а гнездовой ПЦР - 40%. Из всех положительных образцов, полученных с помощью гнездовой ПЦР, коммерческим набором было подтверждено 75%, тогда как 83% подтверждений было получено с помощью разработанного ОТ-ПЦР-РВ. Заключение. Внесенные изменения в последовательности праймеров и зонда увеличили аналитическую специфичность разработанной нами тест-системы. Purpose. To develop a new test system for the detection of hepatitis E virus (HEV) RNA in various types of biological samples. Materials and methods. In the study, there were used the whole blood, plasma and serum, urine, bile and feces from 97 patients, 79 domestic pigs, 28 wild boars, 40 deer, 359 rabbits from the panel of positive and negative samples prepared during the period 2017-2021. The selection of potential replicons and analysis of the nucleotide sequences of HEV (genotype 3) obtained from GenBank were performed using the MEGA X software. The design and analysis of the suitability of oligonucleotide primers for RT-PCR were performed using the online services Primer3 and OligoAnalyzer3.1. Results. As a result of the design of oligonucleotide primers and the modification of certain sites by degeneracy, a set of candidates was obtained, including forward / reverse primers and a probe, which had a significantly higher specificity for the studied HEV sequences. The calculated specificity for detection of the whole genome sequences selected for the study was 490/525 (93.3% ± 0.42 p <0.001). When using the test system developed by us, HEV was detected in 66.7%, while the use of the commercial kit "RealStar®_HEV_RT-PCR_Kit_2.0" let to detect HEV RNA in 50% of the samples and nested PCR - in 40%. Of all positive samples obtained by the nested PCR, 75% were confirmed by the commercial kit, and 83% of the confirmations were obtained using the developed test system. Conclusion. Thus, our changes in the sequence of primers and probe increased the analytical specificity of the test system we developed.

The article provides an analysis of the epizootic situation of rabies in the Republic of Belarus, as well as the sequence of applied developments and technologies in the field of design of rabies vaccines for animals and the results of the effectiveness of the developed blisters vaccine-containing rabies vaccine virus, which in experimental tests has indicators of high efficiency, safety and is promising in practical application.

Целью настоящего исследования явилось изучение генетического полиморфизма штаммов вирусного гепатита Е (ВГЕ), выделенных из организма человека и животных в Республике Беларусь. Образцы биологического материала от 97 пациентов, 79 свиней, 28 диких кабанов, 40 оленей, 359 кроликов использовали для обнаружения РНК ВГЕ при помощи ПЦР-анализа. Выделенные нуклеотидные последовательности (n=9) подвергли процедуре секвенирования и филогенетическому анализу. Построена модель эволюционных отношений для последовательностей, кодирующих фрагмент белка капсида вируса. Изученные последовательности распределились по двум основным кладам субгенотипов 3-го генотипа вируса. В пределах клады«3abchij» кластеризуется 5 из 9 изученных последовательностей, а в кладе «3efg» – 2 изученных изолята. Последовательности, выделенные из организма кроликов, с вероятностью 94% образуют отдельную кладу дендрограммы в пределах 3-го генотипа. Изученные нуклеотидные последовательности ВГЕ, выделенные из организма человека и животных, кластеризуются с референсными последовательностями 3c, 3f, 3i и 3ra субгенотипов. Доказана возможность завоза ВГЕ в Республику Беларусь с территории Западной Европы и Российской Федерации, а также существование аутохтонных случаев заболевания ВГЕ, имеющих зоонозную природу. The objective of this research was to study the genetic diversity of hepatitis E virus (HEV) strains obtained from humans and animals in Belarus. Samples of biological material from 97 patients, 79 pigs, 28 wild boars, 40 deer, 359 rabbits were tested for HEV RNA in RT-PCR. The obtained nucleotide sequences (n=9) were subjected to sequencing and phylogenetic analysis. A model of evolutionary relationships for the sequences encoding a fragment of the viral capsid protein was constructed. The sequences from this study split up between the two main clades of subgenotypes of the viral genotype 3. Within the “3abchij” clade, 5 of the 9 studied sequences were clustered, and within the “3efg” clade 2 studied isolates were the subject to clustering. The sequences from rabbits formed a separate clade on dendrogram within the genotype 3 with a probability of 94%. The studied HEV nucleotide sequences obtained from humans and animals were clustered with subgenotype reference sequences 3c, 3f, 3i, and 3ra. The possibility of HEV import to the Republic of Belarus from Western Europe and the Russian Federation, as well as existence of autochthonous zoonotic cases of HEV infection have been proved.

Институт ветеринарной медицины НААН

Институт ветеринарной медицины НААН

Институт ветеринарной медицины НААН ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ ЖИВОТНЫХ КАК РЕЗЕРВУАРОВ ВИРУСА ГЕПАТИТА Е ЧЕЛОВЕКА Цель настоящего исследованияпроведение исследований по установлению циркуляции вируса гепатита Е у животных в Республике Беларусь.Исследовано 124 образца сывороток крови кроликов и 987 образцов сывороток крови свиней.Авторами предоставлены первые доказательства инфицированности кроликов и свиней вирусом гепатита Е человека в Беларуси.Установлено, что у клинически здоровых животных в крови выявлены противовирусные антитела с

ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ КОРМЛЕНИЯ ДОЙНЫХ КОРОВ НА ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МОЛОКА ПРИ ЕГО ПЕРЕРАБОТКЕ НА СЫР Андреев А.И. 1 -д.с.-х.н., профессор, Менькова А.А. 2 -д.б.н., профессор, Шилов В.Н. 3 -д.с.-х.н., доцент, Костромкина Н.В. 1 -к.с.-х.н., доцент 1 ФГБОУ ВО «Национальный исследовательский Мордовский государственный университет имени Н.П