目的:探究两种光合细菌菌剂(沼泽红假单胞菌菌剂及混合光合细菌菌剂)对栽培党参品质的影响.方法:喷施不同浓度沼泽红假单胞菌菌剂及混合光合细菌菌剂,对栽培党参的生长特性(单根干重、单根鲜重、根长、根直径)、有效成分(党参炔苷、党参多糖)、常量元素(氮、磷、钾)及重金属(铅、镉、汞、砷、铜)含量进行测定,并进行两两相关性分析,筛选合适的菌剂使用浓度.结果:经不同浓度沼泽红假单胞菌菌剂及混合光合细菌菌剂喷施后,党参根长、多糖含量、全氮、全磷含量均有所提升,全钾含量有所降低;重金属铅、汞、铜的含量显著降低,镉含量升高;所有光合细菌菌剂处理组的党参炔苷含量、砷含量与对照组之间无显著差异;所有处理组重金属含量均符合国家及行业限量标准;经多因素相关性分析发现,各指标之间存在相关性.结论:光合细菌菌剂能够改善栽培党参的质量,也有利于药材的安全性,以沼泽红假单胞菌200倍稀释菌剂效果较好.

[背景]北桑寄生(Loranthus tanakae)植物中黄酮类化合物成分含量较高,生物活性较好.由于植物资源短缺,导致其生物活性成分的研究受限.[目的]从北桑寄生中分离、筛选和鉴定产黄酮类化合物的内生菌,并评估其体外抗氧化和抑菌活性.[方法]以北桑寄生枝条为研究对象分离内生菌,通过显色反应和薄层色谱法(thin-layer chromatography,TLC)筛选产黄酮类化合物的内生菌,并采用NaNO2-Al(NO3)3比色法测定其总黄酮含量.利用清除自由基和抑菌的体外实验来初步评估产黄酮内生菌的生物活性.[结果]共筛选出4株产黄酮内生菌,其中3株为内生真菌,1株为内生细菌,通过形态学和分子生物学方法将其分别鉴定为Botryosphaeria sp.(ZC020)、Phoma sp.(ZZ105)、Nemania sp.(ZS042)和 Pseudomonas sp.(ZC026).4 株菌中 ZC020和 ZS042 的总黄酮含量较高,分别为(44.58±0.72)mg/L 和(31.98±0.18)mg/L(P＜0.05,n=3),并且ZS042可产生与北桑寄生植物相同类型的黄酮类化合物.ZC026和ZS042表现出优异的抗氧化活性,其 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)和 2,2'-联氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS]自由基清除率分别为 72.85％±0.66％(ZC026)、57.01％±0.89％(ZS042)和 85.36％±0.75％(ZC026)、88.17％±0.15％(ZS042)(P＜0.05,n=3).ZZ105对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑制作用.[结论]从北桑寄生枝条中分离出4株产黄酮类化合物的内生菌,其中有一株为内生细菌.这项工作为北桑寄生黄酮类化合物的生产提供了新的资源,也为其他珍稀药用植物和材料的开发和保护提供了参考.

[背景]前期工作中筛选出一株产α-L-鼠李糖苷酶的细菌,经分子生物学方法鉴定为鸟肠球菌(Enterococcus avium).α-L-鼠李糖苷酶能够从天然类黄酮化合物中特异性切割末端鼠李糖,在食品生产、医药加工和化工等方面具有极大的开发前景和应用价值.[目的]克隆、表达鸟肠球菌中α-L-鼠李糖苷酶基因,进一步对重组蛋白的酶学性质进行研究.[方法]以鸟肠球菌(Enterococcus avium) strain 352基因组中推定的α-L-鼠李糖苷酶基因序列为基础,设计特异性引物扩增其编码区序列.以pET-28a(+)为载体构建重组表达质粒,将重组蛋白在Escherichia coli BL21 (DE3)感受态细胞中进行诱导表达.使用镍亲和层析纯化重组蛋白,以pNPR为底物测定重组蛋白的酶学性质.[结果]重组蛋白EaRha1分子量大小约为130 kDa.以pNPR为底物,EaRha1最适pH是7.0,最适温度为50℃,在pH 5.0-8.0稳定性较好,在40℃以下能保持较高酶活.金属离子对EaRha1有不同程度的促进或抑制作用.甲醇对EaRha1有抑制作用,并且抑制作用随着甲醇浓度的增大而增强.酶动力学常数Km和Vmax分别为0.35 mmol/L和4.2 μmol/(mg·min) (R2=0.999).EaRha1能催化水解新橙皮苷、柚皮苷和芦丁.[结论]通过对重组蛋白EaRha1酶学性质的研究,确定了该蛋白对黄酮类化合物的水解特性,为黄酮类化合物的生物转化奠定了理论基础.

目的 探讨不同剂量沼泽红假单胞菌对健康小鼠生理功能及肠道微生物结构的影响.方法 将48只C57/BL6小鼠随机分为对照组(无菌生理盐水)以及沼泽红假单胞菌低剂量组(5×108 CFU/mL)、中剂量组(5×109 CFU/mL)、高剂量组(5×1010CFU/mL),每组12只;不同剂量灌胃4周后,测定小鼠胃泌素(Gas)、生长抑素(SS)含量,观察肠道形态,并应用Illumina-MiSeq测序平台进行16SrRNA基因V3-V4区测序,分析其肠道微生物群落结构、多样性及组间差异.结果 与对照组相比,低剂量组对促进小鼠Gas分泌差异具有统计学意义(t=6.426,P＜0.01),高剂量组对抑制小鼠SS分泌差异具有统计学意义(t=3.711,P＜0.05);对照组小鼠回肠肠绒毛高度差异无统计学意义(P＞0.05),且无肠道炎症刺激反应.沼泽红假单胞菌干预后细菌丰富度和多样性增加,在门水平上,与对照组相比,实验组小鼠肠道菌群拟杆菌门丰度显著降低,厚壁菌门丰度显著增加(均P＜0.05);在属水平上,与对照组相比,实验组小鼠肠道菌群Lachnospiraceae NK4A136 group、乳杆菌属、拟杆菌属、理研菌属和Prevotellaceae UCG-001相对丰度显著增加(均P＜0.05).结论 沼泽红假单胞菌能够维持胃肠激素稳态和肠道形态结构,且对健康小鼠肠道菌群的丰富度和组成产生一定的影响,维持肠道平衡与稳定.

首次对药用植物北桑寄生叶片中的内生真菌进行分离纯化,从中筛选出具有较高生物活性的菌株,鉴定此菌株并对其次级代谢产物进行初步分离.采用组织块法分离内生真菌,对其进行抗氧化活性和抑菌活性筛选;通过形态学和分子生物学方法鉴定其种属;运用柱色谱、重结晶等方法分离次级代谢产物,波谱学鉴定其结构.从北桑寄生叶片中分离纯化得到29株内生真菌,检测得到一株具有较高抗氧化和抑菌活性的菌株,鉴定为Alternaria alternata,从该菌次级代谢产物中首次分离得到3个单体化合物,分别为alternariol-5-O-methyl ether(1)、alternariol(2)、cis,cis-9,12-octadecadienoic acid (3).化合物1和2具有较弱的抗氧化活性,化合物1和3表现出一定的抑菌活性.

目的 比较蜥蜴Eremias argus Peters及其伪品石龙子Eumeces chinensis (Gray)的鉴别方法.方法 采用薄层色谱法(TLC)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Native-PAGE)对不同来源的10批蜥蜴药材和3批石龙子药材进行对比研究.结果 不同来源蜥蜴药材及其伪品石龙子薄层色谱在相同位置出现相同颜色的斑点,不能对两者进行区分;SDS-PAGE结果显示,不同来源的蜥蜴有3条共有谱带,其中1条是区别于石龙子的特征谱带,且3批石龙子样品在14.6 kDa处的蛋白条带染色程度明显高于蜥蜴;Native-PAGE结果显示,10批蜥蜴样品3条共有谱带中1条是区别于石龙子的特征谱带,3批石龙子样品7条共有谱带中有3条特征谱带,二者特征谱带位置差别很大,进行遗传距离聚类分析,SDS-PAGE法不能将蜥蜴和石龙子完全分开,Native-PAGE法可将2种药材聚为2类.结论 Native-PAGE法可作为中药蜥蜴与其伪品石龙子的快速鉴别方法.

目的:建立珍珠透骨草药材的HPLC指纹图谱,并研究其与抗炎活性之间的谱效关系.方法:采用HPLC法建立珍珠透骨草的指纹图谱;在相似度评价基础上,结合聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),对其中的共有峰进行评价;建立二甲苯致小鼠耳肿胀模型考察珍珠透骨草的抗炎活性,灰色关联度分析(GRA)和偏最小二乘回归分析(PLSR)研究谱效关系.结果:建立了珍珠透骨草的HPLC指纹图谱,确定了其中24个色谱峰为共有峰,相似度除了S2和S5,均在0.907以上,通过对照品比对法指认了其中4个峰.HCA结果表明,全部样品被聚为四类,与PCA结果基本一致,结合偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)发现,5,6和7号峰为造成珍珠透骨草样品组间差异的3个标志性化合物.不同来源的珍珠透骨草药材均有不同程度的抗炎活性,谱效关系表明,1,4,5,6和10号峰是与抗炎活性关联较大的正相关峰.结论:建立了珍珠透骨草药材的HPLC指纹图谱,并确定1,4,5,6和10号峰为5个与抗炎活性密切相关的成分,为药材质量控制提供更全面的参考.