目的 应用制备纯化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)非结构蛋白1(NS1),制备其单克隆抗体(mAb)并鉴定抗体的特异性.方法 将纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,聚乙二醇(PEG)处理小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,经ELISA筛选和亚克隆得2株NS1单克隆抗体细胞株,命名为NS1B、NS1E.利用ELISA测定NS1 mAb效价,Western blot法和间接免疫荧光法(IFA)鉴定NS1 mAb特异性,试剂盒测定NS1 mAb亚类.最后,用NS1 mAb对感染DTMUV后6、12、24、36 h的BHK-21细胞进行IFA检测,观察NS1蛋白的表达.结果 NS1 mAb的亚型为IgG1,效价达到1∶1.28×104;表明制备的NS1 mAb能识别天然NS1蛋白;DTMUV感染BHK-21细胞12 h后NS1蛋白开始表达.结论 获得2株具有反应性、特异性且效价高的NS1mAb,可用于DTMUV感染检测.

本研究克隆了羊口疮病毒安徽分离株的F1L基因,融合Fe蛋白编码基因后,插入载体pET-32a中,构建了重组质粒pET-F1L-Fe.将pET-F1L-Fe转化BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达重组蛋白F1L-Fe.SDS-PAGE分析结果显示,羊口疮病毒F1L-Fe基因在BL21(DE3)获得了正确表达.将大量表达的F1L-Fe蛋白进行纯化,然后免疫BALB/c鼠,制备了抗F1L蛋白的多克隆抗体.最后,以制备的多克隆抗体对F1L-Fe融合蛋白进行Western-blot检测和分析,结果表明F1L-Fe蛋白能与制备的多克隆抗体发生特异性反应,具有良好的反应原性.本研究结果为进一步研发羊口疮病毒亚单位疫苗提供了物质基础.