Introdução: O sistema de Antígenos de Neutrófilos Humanos-3 (HNA-3) está localizado na proteína Transportadora de Colinta-2 (CTL2), e é codificado pelo gene SLC44A2 e possui duas variantes: HNA-3a (SLC44A2*01) e HNA-3b (SLC44A2*02). Os antígenos HNA-3 e são expressos em neutrófilos, células endoteliais microvasculares dos pulmões, células tubulares renais e diversos tecidos humanos. Os anticorpos direcionados contra esses antígenos podem ser formados após a gestação ou transfusão sanguínea e têm sido associados à complicações como neutropenias aloimunes neonatais e reações transfusionais graves. A formação desses anticorpos após o transplante renal e sua relação com a rejeição e perda do enxerto são pouco compreendidas. Relato de caso: paciente do sexo masculino, 22 anos, DRC de etiologia indeterminada, sem histórico de transfusão sanguínea e com histórico de perda do transplante renal por rejeição aguda celular tardia. As amostras testadas foram coletadas antes da realização do segundo transplante renal e, a pesquisa de anticorpos anti-HNA-3 foi realizada através das seguintes técnicas: Teste de Aglutinação de Granulócitos (GAT), teste de Imunofluorescência de Granulócitos (Flow-GIFT) e técnica baseada em microesferas (kit LABSCreen Multi, One Lambda). A genotipagem HNA-3 dos receptores e dos doadores do transplante renal foi realizada pela técnica de polimorfismo de fragmentos de restrição utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR–RFLP). Testes laboratoriais realizados após a perda do primeiro transplante revelaram a presença de anticorpos anti-HLA específicos contra o doador (DSA) de especificidade DPB1*13 e *17, além de revelarem a presença de anticorpos anit-HNA-3b. A análise molecular demonstrou que o doador do transplante apresentava a genotipagem SLC44A2*01/SLC44A2*02 (HNA-3ab), enquanto o paciente apresentava genotipagem SLC44A2*01/SLC44A2*01 (HNA-3aa), corroborando a possível aloimunização induzida pelo transplante renal. Conclusão: Esse caso clínico sugere que a formação de anticorpos anti-HNA-3 pode ser induzida pelo transplante renal. A presença desse anticorpo em sinergia com anticorpos anti-HLA, pode ter contribuído ou exacerbado a rejeição do transplante. A compreensão dos mecanismos subjacentes a formação desse anticorpo e a sua determinação sistemática podem auxiliar na estratificação de risco de perda do enxerto renal.

Introdução: O sistema de antígenos de Neutrófilos Humanos-3 (HNA-3) é codificado pelo gene SLC44A2 e possui duas variantes: HNA-3a e HNA-3b. São expressos em neutrófilos, células endoteliais microvasculares dos pulmões, células tubulares renais e outros tecidos humanos. Os aloanticorpos direcionados contra esses antígenos são formados a partir da exposição alogênica e estão associados principalmente à casos graves de Lesão pulmonar Aguda relacionada à Transfusão (TRALI) e Neutropenia Aloimune Neonatal (NAN). Devido a presença do HNA-3 no tecido renal, existe a suspeita de que a aloimunização neutrofílica também possa estar envolvida no desenvolvimento da rejeição aguda após o transplante renal. Objetivo: Determinar a influência dos anticorpos anti-HNA-3 pré-formados no contexto da rejeição aguda do transplante renal. Materiais e métodos: Trata-se de um estudo retrospectivo onde foram analisados 66 pacientes que apresentaram rejeição após o transplante renal, divididos igualmente entre pacientes que possuem anticorpos anti-HNA-3 (n = 33) e pacientes sem anticorpos (grupo controle; n = 33). As amostras testadas foram coletadas antes da realização do transplante renal e, a pesquisa de anticorpos anti-HNA-3 foi realizada através das seguintes técnicas: Teste de Aglutinação de Granulócitos (GAT), teste de Imunofluorescência de Granulócitos (Flow-GIFT) e técnica baseada em microesferas (kit LABSCreen Multi, One Lambda). A genotipagem HNA-3 dos receptores e dos doadores do transplante renal foi realizada pela técnica de polimorfismo de fragmentos de restrição utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR–RFLP). A influência dos anticorpos anti-HNA-3 no contexto do transplante renal foi avaliada durante 12 meses após o evento da primeira rejeição e foi analisada de acordo com o número de episódios de rejeição, perda e/ou óbito do paciente durante esse período. Resultados: O segundo episódio de rejeição do transplante renal esteve presente em 11/33 (33,3%) pacientes com anticorpos anti-HNA-3 vs. 3/33 (9,1%) pacientes do grupo controle (p = 0,033). O método de Kaplan-Meier foi empregado para analisar a evolução do enxerto renal nos dois grupos estudados, a análise demonstrou que, pacientes com anticorpos anti-HNA-3 apresentaram rejeição significativamente mais precoce em comparação com o grupo controle durante o segundo episódio de rejeição do enxerto renal (teste log-rank, p = 0,014). Durante o período analisado, não foi observada a influência do anticorpo anti-HNA-3 na frequência aumentada de óbito e/ou perda no enxerto nos grupos estudados. Conclusão: Este estudo sugere que a presença de anticorpos anti-HNA-3 pré-formados é mais um fator de risco para o desenvolvimento de rejeições recorrentes do enxerto renal, além disso, pacientes com anticorpos anti-HNA-3 apresentaram o segundo episódio de rejeição significativamente mais precoce em comparação com o grupo controle.

Introduction: Human neutrophil antigens 3 (HNA-3a and HNA-3b) are located on choline transporter protein 2 (CTL2) and expressed on neutrophils, lungs, kidneys and other human tissues. Alloantibodies directed against these antigens are formed from allogeneic exposure and are mainly associated with transfusion-related acute lung injury (TRALI) and immune neutropenias, however due to the presence of this antigen in renal tissue and the doubt that HNA-3 alloimmunization may also be involved in cases of kidney transplant rejection, the study of the frequency of anti-HNA-3 antibodies in this context becomes a focus of great clinical relevance. Objective: Investigate the presence of anti-HNA-3 antibodies in the serum of patients who had kidney transplant rejection. Materials and Methods: A total of 604 patients with kidney transplant rejection were included in the study. The Granulocyte Agglutination Test (GAT) was performed as a screening test in all individuals included in the present study with a panel of granulocytes from at least three individuals previously genotyped for all HNA systems. Positive samples in GAT were tested using the microsphere-based technique (LABSCreen Multi kit, One Lambda); we analyzed the normalized background values ≥ 10 and immunofluorescence ≥ 1000 as a positive result for HNA-3 antibodies. HNA-3 genotyping by PCR-RFLP was performed only in individuals who had a positive result in serological techniques. Results: We detected 85/604 (14.1%) positive samples in GAT and 11/85 positive samples in both GAT and LSM multi for anti-HNA antibodies. Regarding the specificity of these 11 samples, 6 (54.5%) individuals presented an anti-HNA-3b antibody confirmed by genotyping (HNA- 3a/HNA-3a). In addition to the anti-HNA-3b antibodies, other specificities of anti-HNA antibodies were also identified: 1/11 (9.1%) anti-HNA-1a, 2/11 (18.2%) anti-HNA-1b, 1/11 (9.1%) anti-HNA-FCγRIIIb and 1/11 (9.1%) anti-HNA-2. Furthermore, 14/85 (16.5%) individuals had anti-HLA antibodies detected by LSM multi: 8/14 (57.1%) class I, 3/14 (21.4%) class II and 3/14 (21.4) class I and II. No patient presented simultaneously anti-HNA and HLA antibodies. Conclusion: Our data show that HNA-3b alloimmunization has a greater tendency in patients who rejected kidney transplantation compared to healthy blood donors (1.0% vs. 0.2% respectively, p=0.05). These findings indicate that the detection of anti-HNA-3b antibodies may allow a better understanding of patients’ immune response against renal allograft when no HLA antibody is identified supporting evidence of immunological risk. The authors would like to thank the recipients who participated in the study and the researchers at the Granulocyte Immunohaematology Research Laboratory for donating blood to perform the GAT and f low-WIFT. We would also like to thank the Coordination for the Improvement of Higher Education Staff [Personnel Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior; CAPES] for granting the scholarship and financial aid that made this study possible and Biometrix for the technical support.