为了掌握浙江地区猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)流行病学特点和遗传变异情况,应用PCR检测方法,对2018年浙江地区猪场采集的临床疑似病料进行PCV2检测,并对部分阳性病料进行全基因扩增、克隆、序列测定和ORF2遗传进化树分析.结果显示:329份临床疑似样品中,PCV2阳性率27.4％(90/329),其中宁波地区阳性率最高,为52％;保育猪和肥育猪阳性率最高,分别为38.8％(64/165)和68.8％(11/16).选取7份病料进行全基因组扩增,每个毒株随机挑选3个或4个阳性克隆进行序列测定,共得到22个毒株进行遗传变异分析.22株病株同源性为93.3％ ～99.8％,与16个参考毒株同源性为93.5％ ～99.8％.根据遗传进化树分析,22个毒株分别处于3个分支,其中6株PCV2a,6株PCV2b,10株PCV2d,说明目前浙江地区PCV2d是优势毒株.ORF2遗传进化树分析显示,ORF2核苷酸同源性较全基因组核苷酸同源性低,3个分支分别处于PCV2b、PCV2d和PCV2e,预示浙江地区流行毒株可能在向PCV2e转变.本研究掌握了PCV2在浙江地区的流行动态,为浙江省PCV2疫苗株的选择和疫苗研发提供了理论依据.

鸭传染性浆膜炎是一种感染多种禽类的接触性传染病,可引起免疫器官的损伤.本试验通过人工感染鸭疫里默氏杆菌,旨在探究病鸭免疫器官中Toll样受体2(toll-like receptors 2,TLR2)、Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)的分布与表达特征,借以评价鸭疫里默氏杆菌的致病作用.结果显示,攻毒后雏鸭脾脏红髓充血、 出血,白髓萎缩、 淋巴细胞稀散,脾小体淋巴细胞变性、 坏死;法氏囊黏膜上皮脱落,腔上囊小结空泡化.攻毒后,TLR4表达量显著上升.脾脏红髓淋巴细胞胞质中TLR4呈阳性表达,白髓中央动脉周围分布大量阳性反应.法氏囊淋巴小结中分布大量Toll样受体4.与对照组相比,攻毒组TNF-α、IL-2、IL-6显著性上升,而IL-10基本不变.以上结果提示,鸭疫里默氏杆菌感染可提高免疫器官中Toll样受体4的表达、 引起机体细胞因子表达发生变化,从而引起免疫器官的损伤.

对2014—2018年浙江省内送检的临床疑似病猪进行猪肺炎支原体、 猪鼻支原体、 猪滑液支原体的流行病学调查,旨在了解浙江省3种支原体的流行状况,为制定有效的防治措施提供科学依据.

试验通过PCR分别获得PCV2a和PCV2b的Cap基因,顺次克隆入pFastBac-Dual载体质粒,获得携带2a和2b型Cap基因的重组质粒Cap-pFastBacDual,转化E.coliDH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒Cap-Bacmid,以脂质体法将重组杆粒转染Sf9细胞,获得表达Cap蛋白的重组杆状病毒.PCR能从重组杆状病毒中扩增出相应大小的Cap基因片段,蛋白电泳和ELISA法鉴定表明,Cap蛋白成功表达.采用重组杆状病毒肌内注射免疫小鼠(每只相当于8 μg Cap蛋白),免疫后14 d血清中产生PCV2抗体,免疫后28 d用PCV2a和PCV2b强毒株攻击,荧光定量PCR法检测结果显示,免疫组小鼠脾脏中PCV2基因组拷贝数极显著低于未免疫对照组.结果表明,PCV2a和PCV2b双亚型重组Cap蛋白能开发成猪圆环病毒防控的新型疫苗.

为评价鸡新城疫和禽流感（ H9亚型）二联灭活疫苗不同佐剂的免疫效果，选用Marcol 52、T1和SNB白油及S71油佐剂与鸡新城疫病毒和禽流感病毒混合制成灭活疫苗，免疫适龄SPF鸡，比较不同佐剂对鸡的安全性及新城疫和禽流感的血凝抑制（ HI）抗体水平。结果表明，4种佐剂疫苗的安全性、稳定性良好；应用T1白油佐剂的灭活疫苗，免疫SPF鸡产生的新城疫和禽流感HI抗体水平优于其他佐剂，免疫后2周检测新城疫和禽流感的抗体水平均合格，确定为最佳白油佐剂。

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌引起家鸭、火鸡和其它鸟类的一种接触性传染病,可给养鸭业造成很大经济损失.疫苗是防控该病的重要手段.本文主要针对鸭疫里默氏杆菌二价灭活疫苗的效果进行评价:疫苗免疫后21 d,针对SG4株的抗体效价在7.7-8.5 log2之间,显著高于针对ZZY7株抗体效价(3.0-3.4 log2),3个批次疫苗之间的抗体效价基本稳定.效力检验结果表明,该苗能够产生100％的攻毒保护;且免疫后对鸭的生长性能无明显影响;无菌检验、剂型和黏度等均符合2010年版《中华人民共和国兽药典》三部标准.

The VP2 gene of vvIBDV was inserted into the Pichia pastoris expression vector of pPICZαA. Then the recombinant plasmid of pPICZαA VP2 was transformed into X-33 by electroporation. The multi-copy insertion transformants X-33-pPICZαA-VP2 were screened by PCR 、phenotype and Zeocin-resistance. The expressed VP2 accumulated up to about 0.459mg/mL. SDS-PAGE 、Western blot and animal experiment demonstrated that VP2 product has the similar bioactivity and antigenicity as the natural one.