目的:探讨自主研发的离体肝脏双泵双氧合机械灌注设备DEVOCEAN-LIVER 2000在离体猪肝脏常温机械灌注上的安全性与可操作性.方法:从45～50 kg雌性巴马小型猪获取供肝,使用DEVOCEAN-LIVER 2000,采用恒压模式对动脉和门静脉进行常温机械灌注6 h,使用雅培iSTAT-300G血气分析仪对每小时的灌注液进行分析,同时利用微纳芯Pointcare V2对灌注液进行生化检测.实时记录并比较灌注过程中动脉和门静脉流量、动脉血液pH值、胆汁生成量、转氨酶、血糖、乳酸、总胆红素的变化.灌注前后,切取肝脏组织制作病理切片,观察肝脏组织形态的变化.采用SPSS 23.0统计学软件进行实验数据分析.结果:灌注过程中,动脉流量及门静脉流量随灌注时间平稳增长;动脉血液pH值一直维持在7.2～7.5;胆汁持续性生成,最高峰可达0.0085 mL/[h·g(肝重)];灌注液中的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)小幅增加;血糖总体呈现平稳下降状态;乳酸水平整体呈下降趋势,灌注前与灌注6 h的乳酸水平相比差异有统计学意义(P<0.05);灌注前后胆红素变化不明显(P>0.05).灌注结束后,肝脏外观无明显瘀斑,显微镜下肝小叶结构完整.结论:DEVOCEAN-LIVER 2000能为肝脏提供6 h稳定的体外常温机械灌注,使肝脏在体外仍然保持活性,并且有效改善肝脏微循环,具有良好的安全性与可操作性.

目的:初步探索离体肝脏双泵双氧合机械灌注设备在离体猪肝脏低温灌注中的可操作性以及稳定性.方法:从45～50 kg雌性巴马小型猪获取供肝,利用灌注设备同时对肝动脉和门静脉实施低温携氧灌注8 h.肝动脉采用压力恒定模式控制,门静脉采用流量恒定模式控制,观察灌注过程中的流量、压力、血气指标、炎症因子以及病理组织学评分的变化.采用IBM SPSS Statistics 23.0统计学软件进行实验数据分析.结果:灌注过程中,肝动脉压力稳定维持在24.09～24.65 mmHg(1 mmHg=133.32 Pa),流量从初期的0.04 mL/[min·g(肝重)]逐渐升高至0.09 mL/[min·g(肝重)];门静脉的流量稳定维持在0.47～0.50 mL/[min·g(肝重)],压力呈降低趋势,从初期的2.79 mmHg下降至1.84 mmHg.灌注液pH值、葡萄糖(Glu)以及乳酸(Lac)水平维持稳定.肝组织的炎症因子白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)亦维持稳定.在组织病理学评价方面,肝组织的空泡化水平呈下降趋势,而肝组织的坏死、水肿以及肝窦扩张水平则维持稳定.结论:该离体肝脏双泵双氧合机械灌注设备能够无故障地运转8 h,同时维持肝脏的低代谢状态,降低肝内灌注阻力和改善肝细胞缺氧,具有安全性和稳定性.

目的 构建离体肝脏常温机械灌注设备,探讨灌注实验过程对红细胞的影响.方法 获取健康雌性巴马小型猪肝脏和血液,利用常温机械灌注设备对离体肝脏持续灌注8 h,温度设定37℃,动脉压力设定80/60 mmHg,门静脉设定恒流模式(0.5 mL/minrg),记录灌注过程中灌注液温度、肝动脉和门静脉流量等数据,每小时化验红细胞及其他相关指标,包括红细胞压积(Hematocrit,HCT)、血红蛋白(Hemoglobin,HGB)、总胆红素(Total Bilirubin,TBIL)、间接胆红素(Indirect Bilirubin,IBIL)、溶血率、乳酸(Lactate,Lac)以及血糖(Glucose,Glu).结果 灌注过程中灌注液温度稳定维持37℃,肝动脉流量从最初的(54.64±11.94)mL/min,上升到(249.34±93.01)mL/min,门静脉流量平均值稳定在(442.67±79.19)mL/min.灌注开始和结束时HCT和HGB分别为(27.67±2.42)％、(9.40±0.81)g/dL和(28.00±2.45)％、(9.52±0.81)g/dL.分别比较灌注开始和结束时HCT、HGB数值,均无统计学差异.灌注前后TBIL和IBIL水平比较,差异无统计意义.灌注过程中每小时检测溶血率均为0.Lac从灌注开始的(2.52±0.39)mmol/L下降至灌注结束的(0.35±0.07)mmol/L(P＜0.05).Glu在第2小时达到最高值(21.37±5.96)mmol/L,灌注结束时下降至(9.78±2.63)mmol/L(P＜0.05).结论 离体肝脏常温机械灌注设备能够维持HCT和HGB稳定,不会导致溶血;过程中Lac和Glu持续消耗,间接反映了灌注过程红细胞携氧能力可以改善离体肝脏功能.

目的 探讨自主研发的常温机械灌注(Normothermic Machine Perfusion,NMP)设备对不同热缺血时间下供肝的保护作用.方法 选取雌性巴马猪作为血液和肝脏供体,分为DCD30min组和DCD60min组,利用NMP设备灌注12 h,观察灌注过程中两组的灌注参数、血气生化指标以及胆汁相关指标的水平.结果 两组供肝不同时间点的肝动脉流量比较,差异无统计学意义(P＞0.05);DCD 30 min组的门静脉压力低于DCD 60 min组,差异有统计学意义(P＜0.05);两组的酸碱平衡、乳酸、血糖、ALP、γGGT和TBIL的水平比较,均无统计学意义(P＞0.05);DCD 60 min组的尿素氮水平更高,DCD 30 min组的转氨酶水平更低,均具有统计学差异(P＜0.05);两组肝脏均能持续合成胆汁,胆汁的pH、碳酸氢根及葡萄糖水平均无统计学差异(P＞0.05);而胆汁胆红素和胆汁酸浓度具有统计学差异(P＜0.05).结论 NMP12h,两组不同热缺血时间的供肝都能进行有氧代谢和持续合成胆汁,提示自主研发的NMP设备可有效保护有热缺血损伤的供肝.

为了推动动物实验教学的发展,提供巴马小型猪胆汁和血液生理生化指标等相关参考数据.选取健康合格的巴马小型猪17只,体重45～50 kg,使用血气分析仪和全自动生化分析仪检测麻醉状态下巴马小型猪术前的胆汁和动脉血气、生化等生理生化指标,并运用血液指标与相关文献和人类正常参考值作比较,使用SPSS23.0统计软件进行统计学分析.结果检测数据均呈正态分布,经比较,更多的血液生理生化指标在人的正常参考范围值内,表明实验数据具有一定的参考意义.

目的 探讨在体常温局部灌注对猪心脏死亡器官捐献(donation after cardiac death,DCD)肝脏的修复作用.方法 45 kg巴马小型猪(n=3)在麻醉后,分别经颈静脉、髂动脉插入导管并与体外膜肺氧合(extracorporeal membrane oxygenation,ECMO)连接.静脉注射氯化钾溶液引发心跳骤停,30 min后置入球囊导管阻断胸主动脉,开始运转设备进行在体常温(37℃)局部灌注4 h,静脉血氧维持在60%～70%,每隔1 h检测其血气、生化指标,灌注前、后取肝脏组织,进行病理观察.结果 4 h灌注过程中,设备运转稳定,乳酸显著下降(P<0.05),肝脏持续有胆汁生成,丙氨酸转氨酶、谷氨酰转肽酶及总胆红素浓度变化无统计学差异(P>0.05),天冬氨酸转氨酶在正常范围内,病理切片提示灌注前、后的病理评分差异极其显著(P<0.01).结论 本研究证明在体常温局部灌注对猪DCD30 min肝脏具有修复作用.

目的 利用离体肝脏常温灌注系统初步探索门静脉恒压控制模式与门静脉恒流控制模式对热缺血损伤肝脏的保存效果差异.方法 使用雌性巴马小型猪获取血液和供肝,所有供肝的热缺血时间为60 min,一组采用门静脉恒压控制模式(n=6),一组采用门静脉恒流控制模式(n=6),利用常温机械灌注设备灌注6 h,观察肝脏的灌注参数、血气生化指标以及组织病理学变化.结果 灌注前,两组的冷缺血时间差异无统计学意义(P>0.05).猪肝脏经过6 h的常温机械灌注,恒压组的肝动脉流量为(0.13±0.08)mL/min/g(肝重)比恒流组的(0.25±0.09)mL/min/g(肝重)更低(P<0.05).两组比较,灌注液的pH、乳酸水平、葡萄糖水平差异无统计学意义(P>0.05);尿素氮水平除了在第2小时,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).对于肝细胞酶学和总胆红素水平,两组在灌注结束时亦差异无统计学意义(P>0.05).恒流组的胆汁生成量为(54.47±15.63)mL,较恒压组的(6.98±3.20)mL更多(P<0.05).两组在病理学评分的比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 门静脉恒流模式更有利于肝动脉的供血,从而促进肝细胞进行胆汁合成,提示门静脉流量控制模式可能是更合适的灌注方式.但是这仍需要通过动物肝移植实验以及临床肝移植的数据进一步验证.

目的 探讨便携式在体机械灌注设备(IMPD)运行稳定性和保护无心跳大动物供器官的作用.方法 6只健康清洁巴马小型猪麻醉后开腹,分别经腹主动脉、下腔静脉插管并连接到自主研发的便携式IMPD,静脉注射氯化钾骤停心脏,观察5 min无复跳,启动设备对动物器官进行常温(37℃)机械灌注.调整离心泵转速和灌注流量以控制静脉血氧饱和度维持在60％ ～70％,持续灌注12 h,每2小时为观察时间点,记录设备管路流量、离心泵转速和流量/转速比值,检测肝、肾功能和血液内环境指标,灌注结束后获取胆总管、肝、肾和小肠组织,HE染色后光镜下评估病理改变情况.采用重复测量资料单因素方差分析比较灌注过程中各时间点运行参数、肝肾功能和血液内环境指标,组内两两比较采用LSD法,P<0.05为差异有统计学意义.结果 全部实验均完成12 h灌注,灌注过程中设备运行稳定,无故障或停机意外,管路流量、离心泵转速和流量/转速比值均稳定.ALT、总胆红素(TBIL)和谷氨酰转移酶(GGT)稳定,灌注开始至结束各时间点与术前相比,差异均无统计学意义(P均>0.05).灌注开始后AST缓慢上升,灌注第8、10和12小时AST分别为(73±21)、(90±30)和(114±48)(U/L),与术前相比,差异均有统计学意义(P均<0.05).在实验猪心脏停跳的5 min内,乳酸在灌注开始时便处于峰值,自灌注第8小时起,乳酸数值与峰值相比差异均有统计学意义(P均<0.05).K+浓度水平自灌注第2小时起各时间点与灌注开始时相比,差异均有统计学意义(P均<0.05).ALT、TBIL、GGT、血尿素氮、血清肌酐、血气分析指标、Na+、Ca2+和Cl-浓度水平稳定,灌注开始至结束各时间点数值与灌注开始时相比,差异均无统计学意义(P均>0.05).自灌注开始后持续有胆汁生成、尿量产生.供肝灌注12 h的过程中,肝脏始终保持外观红润、质地柔软、边缘锐利.灌注结束后,胆总管、肝、肾和小肠组织病理结果 示组织结构完整,无淤血和大面积坏死征象.结论 便携式IMPD可以稳定灌注无心跳猪供器官12 h,可以较好维护胆总管、肝、肾和小肠器官.

利用三元杂交猪作为实验模型猪,分析三元杂交猪在麻醉情况下常规生理血气生化指标测定.本实验选用20例30～40 kg健康的雌性三元杂交猪麻醉处理,用血气仪、血液生化仪进行猪血液的血气、生化检验,将三元杂交猪的14项血气指标、9项血液生化指标进行组间比较,分析三元猪在麻醉状态下血气及生化与其他小型猪血液相关数据的差异,结果显示三元杂交猪大部分血液生理血气生化指标均呈正态分布,其中PaO2、AST、GGT、TBIL、DBIL、IBIL为偏态分布,血气生化检测值与巴马猪及其他实验小型猪参考生理值存在较小差异.