Einleitung und HintergrundDas Kawasaki-Syndrom (KS) ist eine akute febrile Vaskulitis der kleinen und mittelgroßen Arterien.Gefürchtet ist der Befall der Koronararterien (1), der lebensbedrohlich verlaufen kann.Die genaue Ätiopathologie des KS ist bis heute ungeklärt.Es scheint aber eine Immundysregulation in prädisponierten Personen ursächlich zu sein (2).Die Diagnose des KS wird anhand klinischer Kriterien gestellt (3) (▶ Kasten).Einen spezifischen diagnostischen Test gibt es nicht.Allerdings können bestimmte Laboruntersuchungen und die Echokardiografie bei Patienten mit Verdacht auf ein inkomplettes KS hilfreich sein (1).Typisch für die akute Phase des KS sind eine Leukozytose, eine erhöhte Blutsenkungsgeschwindigkeit (BSG), ein erhöhtes Creaktives Protein (CRP) sowie ein milder bis moderater Anstieg der Gamma-Glutamin-Transferase (γGT) und der Alanin-Aminotransferase (ALT) (4).Zusätzlich zeigt sich in der akuten Phase des KS häufig eine normozytäre, normochrome Anämie und in der subakuten Krankheitsphase eine Thrombozytose (4).Mittels Echokardiografie kann die

Antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) of natural killer (NK) cells largely contributes to the success of monoclonal antibody (mAb) treatment in cancer. As no antibodies are clinically available for immunotherapy of myeloid leukemias (MLs), we aimed to develop an Fc-optimized CD133 mAb for induction of NK ADCC against MLs. When comparing different available CD133 mAbs, no difference was observed with regard to binding to primary chronic myeloid leukemia cells. However, clone 293C3 recognized acute myeloid leukemia (AML) cells in a substantially higher percentage of patient cases and was thus chosen to generate chimeric mAbs with either wild-type Fc part (293C3-WT) or a variant containing amino-acid exchanges (S239D/I332E) to enhance affinity to CD16 on NK cells (293C3-SDIE). In vitro, treatment with 293C3-SDIE significantly enhanced activation, degranulation and lysis of primary CD133-positive AML cells by allogeneic and autologous NK cells as compared with its wild-type counterpart. In line with the observed lower expression levels of CD133 on healthy cells compared with malignant hematopoietic cells, 293C3-SDIE caused no relevant toxicity towards committed hematopoietic progenitor cells. In a NOD.Cg-PrkdcscidIL2rgtmWjl/Sz xenotransplantation model, 293C3-SDIE facilitated elimination of patient AML cells by human NK cells. Thus, 293C3-SDIE constitutes an attractive immunotherapeutic compound, in particular for elimination of minimal residual disease in the context of allogeneic stem cell transplantation in AML.

The transcriptional regulator ecotropic viral integration site-1 ( EVI-1 ) has mainly been studied for its role in myeloid malignancies, in which high EVI-1 levels are associated with particularly aggressive disease. The role of EVI-1 in lymphoid cells, however, is largely unknown. Here we show that EVI-1 is indeed expressed in lymphoid malignancies such as acute lymphoblastic leukemia (ALL) and a subset of chronic lymphocytic leukemia. Expression data from pediatric ALL further suggest that high EVI-1 levels are associated with poor prognosis. Suppression of EVI-1 expression by RNA interference reduces cell growth and enhances apoptosis sensitivity in response to various stimuli in lymphoblastic leukemia cells. At the molecular level, EVI-1 modulates expression of several apoptosis-related genes (such as BCL2 , BCL-x , XIAP , NOXA , PUMA , TRAIL-R1 ). Furthermore, EVI-1 knockdown strongly impairs in vivo engraftment of lymphoblastic leukemia cells upon transplantation in immune-permissive NOD/SCID/IL2Rγ null mice, conferring a survival benefit when compared with mice transplanted with control cells. Thus, our data show that EVI-1 is expressed not only in myeloid but also in lymphoid leukemias, and contributes to the leukemogenic potential and apoptosis resistance of ALL cells.

Hintergrund: Im Rahmen eines Post-Inflammationssyndroms zeigt ein Teil der septisch erkrankten Patienten Zeichen einer temporären Immunparalyse, welche mit einer vermehrten Konzentration an anti-inflammatorischen Zytokinen wie IL-10, einer vermehrten inhibitorischen Aktivität von CD8+ T Zellen und Funktionseinschränkungen von CD14+ Monozyten einhergeht. Eine Subgruppe von Patienten mit eingeschränkter monozytärer Funktion zeigt hierbei eine besonders hohe Letalität.

Hintergrund: Viele infektiologische und immunologische Fragestellungen werden in Mausmodellen untersucht, allerdings ist eine Vielzahl der Befunde nicht ohne weiteres von der Maus auf den Menschen übertragbar. NOD/SCID/IL2Rγnull Mäuse besitzen keine eigenen T, B und NK Zellen und können daher menschliche Stammzelltransplantate nicht abstossen. Wir haben erstmalig beschrieben, dass die Transplantation menschlicher Stammzellen (SC) in diesem Mausstamm zu einem raschen Anwachsen der SC und der Ausbildung eines menschlichen Immunsystems mit vielfältigen hämatopoetischen Zelllinien führt (Shultz et al., J Immunol, 2005). Allerdings war bislang unklar, ob sich dieses Modell als Langzeit-Transplantationsmodell eignet und welche Funktionalität dieses Immunsystem-Surrogat langfristig aufweist. Da dieses Mausmodell bereits eingesetzt wird, um infektiologische Fragestellungen zu HIV-, CMV- oder parasitären Erkrankungen beantworten zu können, ist es unabdingbar, die Funktionalität dieses Mausmodells im Langzeit-Verlauf zu beschreiben. Fragestellung: Eignet sich das von uns etablierte human-murine NOD/SCID/IL2Rγnull Mausmodell in seiner jetzigen Form dazu, als Langzeit-Transplantationsmodell phänotypisch und funktionell kompetente Lymphozyten zu generieren und zu erhalten? Methoden: 6–8 Wochen alte NOD/SCID/IL2Rγnull Mäuse wurden sublethal bestrahlt und mit 1×106 CD34+ menschlichen Stammzellen transplantiert. Zur Unterstützung des Engraftments wurde wöchentlich ein Fc-IL7 Konstrukt intravenös gespritzt. Phänotypische und funktionelle Analysen der T und NK Zellpopulationen wurden zwischen Woche 16 und 30 nach Transplantation durchgeführt und mit menschlichen Kontrollproben verglichen. Ergebnisse und Diskussion: Die Generierung von humanen T, B und NK Zellen war mittels dieses Modells möglich. Während sich in frühen Phasen nach der Transplantation (<16 Wochen) die Differenzierung von CD4+ und CD8+ T-Zellen zeigte, verschwanden die CD8+ T Zellen in späteren Transplantationsphasen. Die CD4+ T Zellen waren funktionell aktiv und sezernierten IFN-γ nach Kontakt mit allogenen dendritischen Zellen. Im Gegensatz hierzu zeigten die NK Zellen einen unreifen Phänotyp und waren funktionell anerg. Wir vermuten, dass das Fehlen von CD8+ T Zellen und der funktionelle Reifungsstopp der NK Zellen einerseits auf ein inadäquates Zytokinmilieu (z.B. Fehlen von IL15) und andererseits auf die unzureichende Gewebeexpression von menschlichen MHC Molekülen zurückzuführen ist.

Immunodeficient NOD/SCID/IL2Rg (yc)null mice can be efficiently used to establish human lymphohematopoiesis or lymphohematological neoplasia in a murine environment. Thus, upon engraftment of human CD34+ hematopoietic stem cells (HSC) or acute leukemia cells and allogeneic donor lymphocyte infusions these mice might become a powerful tool to provide an allogeneic HSCT model for investigating human graft-vs-host (GvH)- and graft-vs-leukemia (GvL)-immunity in vivo. In the current study, we engrafted NOD/SCID/ycnull mice with human CD34+ HSC to provide a model for analyzing the role of patient-derived antigen presenting cells for the induction of GvH- and GvL-reactivity and to evaluate reactivity to human alloantigens of ex vivo engineered T cell allografts for improved immunotherapy. Following reconstitution of busulfan conditioned neonatal or (300 cGy) irradiated adult NOD/SCID/ycnull recipients with 1 × 105 to 1 × 106 purified CD34+ adult HSC and weekly i.v. injections of Fc-IL7, human CD45+ PBMNC were detected as early as early as 30 or 60 days (d) post reconstitution of newborn and adult mice, respectively. After 120d, T-, B-, and NK-cells, as well as monocytes and dendritic cells (DCs) were found in spleen (SPL) and bone marrow of both newborn and adult recipients by flow cytometry and immunhistological studies in e.g. SPL and skin. However, as reconstitution of newborns resulted in thymopoiesis of human CD3+ cells and better lympho- and myelopoiesis as compared to adult mice, further studies were performed in HSC engrafted newborn recipients. Functional analyses of lymphocytes grown in humanized NOD/SCID/ycnull mice revealed that human CD3+ T cells isolated from SPL and challenged ex vivo with i) murine NOD/SCID/ycnull derived DCs, ii) HLA-mismatched DCs or iii) HSC donor derived (autologous) DCs elicited alloresponses to human but not murine alloantigens(s). These results and further studies on ex vivo examined allo- and xenoimmunity of naïve HLA-matched and HLA-mismatched CD8+ T cells transferred into HSC engrafted NOD/SCID/ycnull recipients will be presented to demonstrate T cell alloimmune responses in humanized mice and to show that our model can be used to evaluate residual GvH reactivity of CD8+ donor T cells in HLA- matched or haploidentical settings. Finally, these studies should help to elucidate the impact of xenoreactivity on the induction of GvH immunity by human T cells in humanized mice.