目的:基于Janus酪氨酸蛋白激酶1/信号转导和转录激活因子1(JAK1/STAT1)信号通路研究流感"肺脑传变"的分子机制,并进一步探讨麻杏石甘汤(MXSGT)的干预作用.方法:SPF级BALB/c小鼠100只,随机分为正常组、模型组、奥司他韦组、抗病毒颗粒组和MXSGT组,每组20只.除正常组常规饲养外,其余4组以A型流感病毒(IAV)滴鼻感染构建小鼠IAV肺炎模型,造模24h后,各药物治疗组分别予以奥司他韦(21.63mg·kg-1·d-1)、抗病毒颗粒(3.9g·kg-1·d-1)、MXSGT(6.05g·kg-1·d-1)灌胃,正常组和模型组以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续给药3、7d.苏木素-伊红(HE)染色观察肺、脑组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺、脑组织中IAV核蛋白(NP)及JAK1、STAT1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺、脑组织中JAK1、STAT1蛋白表达水平;免疫组化法检测肺、脑组织中磷酸化(p)-STAT1表达水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)的水平.结果:与正常组比较,模型组小鼠肺组织及大脑皮质出现明显病理变化;肺部IAVNP mRNA相对表达量显著增加(P＜0.01);肺组织和脑组织中JAK1、STAT1 mRNA和蛋白表达水平明显增加(P＜0.05,P＜0.01);肺组织和大脑皮质中p-STAT1表达水平明显增加(P＜0.05,P＜0.01);血清中IL-1β表达量明显增加(P＜0.05).与模型组比较,MXSGT组小鼠肺组织及大脑皮质病理损伤减轻;肺组织IAVNP mRNA相对表达量显著降低(P＜0.01);肺组织和脑组织中JAK1、STAT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01);血清中IL-10水平显著增加(P＜0.01).结论:JAK1/STAT1信号通路异常活化可能是流感"肺脑传变"的分子机制之一,MXSGT作为有效的抗流感病毒中药复方,可通过调控该通路介导的细胞因子水平的变化缓解IAV肺部感染小鼠的脑组织病理损伤.

目的:通过研究甲型流感病毒刺激后小鼠肺上皮细胞源性外泌体的微小RNA(miRNA)差异表达谱,探讨流感病毒诱导肺上皮细胞损伤的机制.方法:采用甲型流感病毒(MOI=0.2)诱导小鼠肺上皮MLE-12细胞,同时设空白对照组,通过CCK-8法检测不同诱导时间下的细胞活力,明确甲型流感病毒诱导细胞损伤的最佳条件.通过流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-qPCR和Western blot检测炎症反应相关因子的表达水平.采用超速离心法提取甲型流感病毒诱导的MLE-12细胞上清液中的外泌体,并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot及高通量单细胞测序检测外泌体形态、粒径、浓度、膜标志蛋白表达及其miRNA差异表达谱.结果:CCK-8实验结果显示,MOI=0.2的甲型流感病毒干预8 h的MLE-12细胞活力抑制率最为符合本研究需要.以该条件干预细胞,凋亡率(24.11％±0.17％)显著升高;甲型流感病毒核蛋白(NP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的mRNA和蛋白表达水平均显著升高.透射电镜观察到提取的外泌体为圆形的囊泡状;纳米颗粒跟踪分析检测到甲型流感病毒感染的细胞上清液中外泌体的粒径分布发生明显改变;Western blot检测到外泌体膜标志蛋白(CD63、CD81和TSG101)的表达.细胞测序结果共检测出154个差异表达的miRNAs,其中82个呈上调趋势,72个呈下调趋势;挑选出10个进行RT-qPCR验证,有6个与测序结果一致.结论:流感病毒诱导小鼠肺上皮细胞损伤的机制可能与外泌体特异性miRNA有关.

目的 基于 Janus 激酶 2/信号转导和转录激活因子 3(Janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)通路介导的细胞因子表达研究流感相关脑病的发病机制,并进一步探讨麻杏石甘汤的干预作用.方法 以A型流感病毒(influenza A virus,IAV)滴鼻感染BALB/c小鼠为研究对象,设置对照组、模型组、奥司他韦组、抗病毒颗粒组和麻杏石甘汤组.给予相应药物治疗3、7d后,计算小鼠脑指数;苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织、脑组织病理变化;qRT-PCR 法检测脑组织中 JAK2、STAT3、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-10 和IL-4 mRNA 表达;Western blotting法检测脑组织中JAK2、STAT3蛋白表达;免疫组化法检测脑组织中磷酸化STAT3(phosphorylatedSTAT3,p-STAT3)蛋白表达;ELISA法检测脑组织中IL-1β、IL-10和IL-4水平.结果IAV肺部感染的小鼠脑指数增加(P＜0.05、0.01),肺组织及大脑皮质出现明显病理变化;脑组织中JAK2、STAT3、IL-1β基因和蛋白表达水平升高(P＜0.05、0.01),p-STAT3表达水平升高(P＜0.01),IL-10、IL-4基因表达水平降低(P＜0.01),IL-1β、IL-10和IL-4分泌水平失调(P＜0.05、0.01).麻杏石甘汤能改善脑组织水肿及肺、脑组织病理变化,下调脑组织中JAK2、STAT3、IL-1β基因和蛋白表达水平(P＜0.05、0.01),下调p-STAT3表达水平(P＜0.01),上调IL-10、IL-4基因和蛋白的表达水平(P＜0.01).结论 JAK2/STAT3通路介导的细胞因子失衡可能是流感相关脑病的分子机制之一,麻杏石甘汤作为有效的抗流感病毒中药复方,可通过调控JAK2/STAT3通路减轻IAV肺部感染小鼠的脑组织病理损伤.

目的 结合网络药理学探索JAK2/STAT3信号通路在A型流感病毒感染所致肺组织损伤中的影响,并探讨麻杏甘石汤对该通路的干预作用.方法 通过网络药理学方法筛选麻杏甘石汤作用于流感病毒的潜在靶点所富集的信号通路;以BLAB/c小鼠为研究对象,用A型流感病毒进行滴鼻感染,设置正常对照组、模型对照组、奥司他韦组、抗病毒颗粒组和麻杏甘石汤组,给予相应药物3、7d后,处理动物.常规法检测小鼠体质量并计算肺指数,观察肺组织病理变化,RT-PCR法检测肺组织中JAK2、STAT3、IL-1β、IL-4 mR-NA表达水平,Western blot法或ELISA法检测肺组织中JAK2、STAT3、IL-1β和IL-4的蛋白的表达水平;利用AutoDock Vina软件对STAT3与靶点化合物进行分子对接.结果 麻杏甘石汤主要活性成分与流感病毒有110个交集靶点,富集于170条信号通路;麻杏甘石汤治疗组小鼠体质量增加,肺组织病理损伤减轻,肺指数下调,肺组织中JAK2、STAT3、IL-1βmRNA和蛋白的表达水平下调,IL-4 mRNA和蛋白的表达水平上调;STAT3与麻杏甘石汤中活性化合物甘草查尔酮A有较好的结合活性.结论 麻杏甘石汤能有效地减轻肺部病理变化、调节免疫平衡,其可能的作用机制是通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活而缓解A型流感病毒感染所致的肺损伤.

目的:探讨黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,ASIV)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)定植相关因子的影响及其作用机制.方法:分别用大、中、小3个浓度ASⅣ在体外与H.pylori共同培养,以PBS处理作对照组.培养48 h后,尿素酶活性比色法定量检测ASⅣ对H.pylori尿素酶活性的影响;半固体布氏琼脂平板法检测不同浓度ASⅣ对幽门螺杆菌鞭毛运动的影响;实时荧光定量PCR测定H.pylori鞭毛蛋白基因(flaA、flaB)、尿素酶基因(ureA、ureB)及黏附素基因(babA、sabA、alpA、alpB)的表达.结果:与对照组相比,ASⅣ中、大剂量组H.pylori的尿素酶活性显著降低(P＜0.05);H.pylori菌膜晕圈直径减小,但差异无统计学意义(P＞0.05);ASⅣ大剂量组能显著下调ureA、ureB的mRNA表达水平(P＜0.05),对flaA、flaB、babA、sabA、alpA、alpB的mRNA表达无明显影响.结论:ASⅣ可以通过抑制H.pylori尿素酶活性及相关基因(ureA4、ureB)表达削弱H.pylori定植能力.

目的 探索麻杏石甘汤(Maxing Shigan Decoction)通过影响小鼠肠道菌群组成及趋化因子产生而防治流感病毒感染的潜在机制.方法 通过鼻腔接种法建立A型流感病毒感染小鼠模型,经ig给药3d和7d后,观察小鼠体质量等一般情况;HE染色检测结肠组织病理变化;免疫组化检测结肠组织趋化因子CCL5、CXCL10的表达;酶联免疫法检测结肠组织中CCL5、CXCL10含量,并取小鼠肠内容物进行16S rRNA基因V3?V4可变区测序、物种注释及聚类,进行Alpha多样性和Beta多样性分析,线性判别式分析[linear discriminant analysis(LDA)effect size,LEfSe]筛选组间差异物种,冗余分析及Spearman等级相关系数分析肠道菌群与CCL5、CXCL10的关联性.结果 给药3d后,模型组小鼠体质量下降(P＜0.01),肠黏膜固有层中炎性细胞明显浸润且高表达CCL5和CXCL10(P＜0.01),结肠组织匀浆中CCL5和CXCL10含量增加(P＜0.01);与模型组比较,各药物组小鼠体质量明显增加,炎性细胞浸润减少,CCL5、CXCL10阳性表达细胞减少,肠组织匀浆中CCL5、CXCL10含量降低,以奥司他韦组和麻杏石甘汤组差异显著(P＜0.05、0.01).菌群多样性分析和物种差异分析结果显示,给药3d后,模型组小鼠肠道菌群组成与对照组及各药物组存在明显差异.模型组小鼠变形菌门、埃希菌属相对丰度较对照组明显增加(P＜0.05),厚壁菌门、乳杆菌属、粪球菌属相对丰度明显降低(P＜0.05、0.01);与模型组比较,各药物组变形菌门、埃希菌属相对丰度降低(P＜0.05),奥司他韦组和麻杏石甘汤组厚壁菌门相对丰度显著增加(P＜0.01),抗病毒颗粒组颤螺旋菌属相对丰度增加(P＜0.05),麻杏石甘汤组乳杆菌属、粪球菌属相对丰度增加(P＜0.05、0.01).给药7d后,模型组小鼠结肠组织病变减轻,趋化因子表达下降,变形菌门、埃希菌属相对丰度较给药3d后明显降低(P＜0.01);与模型组比较,各药物组疣微菌门相对丰度明显降低(P＜0.05、0.01),拟杆菌门相对丰度明显升高(P＜0.05).关联性分析显示,小鼠结肠组织中CCL5、CXCL10含量与埃希菌属、克雷伯菌属、梭菌属、粪球菌属等相对丰度显著相关(P＜0.05、0.01).结论 A型流感病毒感染可引起小鼠肠道菌群结构紊乱及免疫功能失衡,麻杏石甘汤通过调节肠道菌群结构并影响趋化因子的产生,对流感病毒引起的肠道免疫损伤有一定的保护作用.

梳理《伤寒论》中与胃肠型流感相关的条文,从太阳兼证的角度总结胃肠型流感在三阳病时期的辨证特点及治疗.对于胃肠型流感,病在太阳之经时,可用麻黄汤、桂枝汤,太阳夹饮则分别施以小青龙汤、五苓散;病在太阳兼少阳时,依证予柴胡桂枝汤、小柴胡汤、黄芩汤、大柴胡汤等;病在太阳兼阳明时,则可据病情侧重点的不同分别从太阳论治或从阳明论治,从太阳论治可予麻黄汤、桂枝汤,从阳明论治可分别以调胃承气汤、大承气汤、葛根汤、葛根芩连汤等.对于包含胃肠型流感应综合疾病本身传变特点及患者自身体质因素辨证施治.

目的:探讨龟甲胶对胃溃疡模型小鼠的治疗作用及其机制.方法:以食用醋酸灌胃构建小鼠胃溃疡模型,实验设正常对照组、模型对照组、三九胃泰组、龟甲胶组,经灌胃给药或0.9％氯化钠溶液1周后,常规法检测体质量、脾/胸腺指数、乳糖酶活性、胃残留率、胃溃疡指数及胃溃疡抑制率,滴定法检测胃液酸度,HE染色法检测胃、小肠、结肠的病理变化,ELISA法检测血清白介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和胃泌素的含量水平.结果:与正常对照组比较,模型对照组体质量、脾指数、胸腺指数显著下降(P＜0.01),胃液酸度、胃溃疡指数、胃残留率、胃和小肠中乳糖酶活力、血清IL-1β、IL-8和胃泌素含量水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01),胃组织黏膜充血水肿、黏膜上皮细胞丢失、炎症细胞浸润,小肠和结肠上皮结构紊乱,大量炎性细胞浸润.与模型对照组比较,龟甲胶组体质量、脾指数、胸腺指数显著升高(P＜0.01),胃液酸度、胃溃疡指数、胃残留率、胃和小肠乳糖酶活力、血清IL-1β、IL-8和胃泌素含量水平显著降低(P＜0.01,P＜0.05),胃组织黏膜充血水肿减轻、炎性细胞浸润减少,小肠和结肠组织上皮结构完整,排列有序.结论:龟甲胶可通过降低胃液酸度,减少IL-1β、IL-8和胃泌素的分泌,降低溃疡指数,从而发挥对胃溃疡的治疗作用.

Based on the characteristics of the epidemic situation and the authors’ understanding of the related ancient books and documents, this paper explores the etiology and pathogenesis of Corona Virus Disease 2019 (COVID-19) from 5 aspects: abnormal climate in “warm winter”, unique geographical location, pathogenesis evolution of cold and dampness mixed with insidious dryness, transmission and change of “triple energizer” of toxic pathogens, and game between healthy Qi and toxic pathogens. Combined with the special treatment of traditional Chinese medicine (TCM), the purpose is to make a modest contribution to curbing the epidemic situation with TCM.

目的 从肺组织趋化因子CCL3和CCL25蛋白表达水平探索麻杏石甘汤抗流感病毒的效应机制.方法 经鼻腔接种建立流感病毒肺部感染小鼠模型.实验设正常对照组、模型对照组、奥司他韦组、抗病毒口服液组、麻杏石甘汤组.各治疗组小鼠经灌胃给药3、7 d后以常规法检测体质量、肺指数;以HE染色法观察肺组织的病理变化;以Western blot法检测肺组织CCL3和CCL25的蛋白表达水平.结果(1)与正常对照组比较,模型对照组小鼠体质量显著降低(P<0.01),肺指数显著升高(P<0.01).与模型对照组比较,给药治疗3、7 d后,麻杏石甘汤组及其他药物组小鼠体质量显著升高(P<0.01),肺指数显著降低(P<0.05或P<0.01).(2)与正常对照组比较,模型对照组小鼠肺组织充血水肿,大量淋巴细胞及巨噬细胞浸润.与模型对照组比较,给药治疗3、7d后,麻杏石甘汤组及其他药物组小鼠肺组织病理损伤得到明显改善.(3)与正常对照组比较,模型对照组小鼠肺组织CCL3和CCL25蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,给药治疗3 d后,麻杏石甘汤组及其他药物组小鼠肺组织CCL3和CCL25蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01).结论 麻杏石甘汤作为有效的抗流感病毒中药复方,能有效减轻肺部炎症,其可能是通过下调趋化因子CCL3和CCL25的表达水平而缓解流感病毒感染小鼠的肺部损伤.

目的 探索麻杏石甘汤(Maxing Shigan Decoction,MSD)通过影响小鼠肺部菌群及趋化因子CCL5和CXCL10表达而防治流感病毒感染的潜在机制.方法 通过鼻腔接种法建立A型流感病毒感染小鼠模型,经ig给药或生理盐水3、7d后,计算肺指数和肺指数抑制率,HE染色检测肺组织病理变化,应用免疫组化、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测肺组织中CCL5和CXCL10蛋白和mRNA表达变化,并取小鼠肺组织进行16S rRNA基因V3?V4可变区测序、物种注释及聚类,分析Alpha多样性和Beta多样性及组间差异物种,分析CCL5、CXCL10表达与肺部菌群变化的关系.结果 给药3d后,模型组肺指数明显高于对照组(P<0.01)和药物组(P<0.05、0.01),肺部炎性细胞浸润明显.麻杏石甘汤组肺部炎性细胞浸润明显减轻,肺指数抑制率与奥司他韦组相似,肺损伤的组织学定量评价指标(IQA)值较模型组明显降低(P<0.01).模型组CCL5和CXCL10表达明显高于对照组(P<0.01),奥司他韦组和麻杏石甘汤组CCL5和CXCL10表达明显低于模型组(P<0.05、0.01).16S rRNA基因测序结果显示,模型组拟杆菌属、埃希菌属、变形杆菌属相对丰度增加,粪球菌属相对丰度降低.奥司他韦和麻杏石甘汤能显著降低拟杆菌属、埃希菌属、变形杆菌属相对丰度,增加粪球菌属相对丰度;Alpha多样性分析结果显示各组ACE指数、Chao1指数、Shannon指数比较P＞0.05,组间丰富度和多样性无差异.Beta多样性分析结果显示,给药3d后,组间样品点无交集,组间肺菌群构成有差异.各组间有显著性差异物种.Spearman相关性分析显示,CCL5和CXCL10表达与埃希菌属、变形杆菌属、拟杆菌属丰度呈正相关,与粪球菌属丰度呈负相关.给药7d后,各组间肺部菌群结构组成及CCL5、CXCL10表达无显著差异.结论 麻杏石甘汤可能通过促进肺部有益菌生长改善肺部微生态环境及免疫微环境,对流感病毒引起的肺损伤有一定的保护作用.