无菌动物特别是无菌大鼠、小鼠的成功培育技术成为研究微生物与人类生命现象关系的关键技术.严格的无菌动物是指在动物体宿主内外任何部位及生活环境中均检测不出一切生命体.广义的无菌动物还包括清除肠道中大部分菌群的动物,又称为伪无菌动物.目前制作无菌鼠的方法主要有剖腹取胎无菌饲养法制作无菌鼠模型,抗生素鸡尾酒法制作伪无菌鼠模型.本文对无菌鼠模型的制作方法进行总结并对其优缺点进行评价.

目的:观察凉血通瘀方对急性脑出血模型大鼠的神经保护作用,并探索其作用机制.方法:将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组和造模组.造模组采用自体血注入法制作脑出血模型;假手术组以空针置入右侧尾状核,不注血.造模成功的大鼠随机分为模型组和凉血通瘀方组,每组15只;假手术组和正常组每组亦为15只.各组分别灌胃生理盐水或中药,每日1次,连续3?d.模型组与凉血通瘀方组大鼠分别于造模成功后、灌胃3?d后运用Longa五级评分法评价神经功能缺损程度;灌胃3?d后,免疫组化法检测各组5只大鼠脑组织神经生长因子(NGF)表达,蛋白免疫印迹法(Western?Blot)检测各组5只大鼠脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,生化法检测各组10只大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组10只大鼠脑组织和肠组织八肽胆囊收缩素(CCK-8)含量.结果:模型组与凉血通瘀方组大鼠灌胃3?d后Longa评分均明显低于造模成功后(P<0.01),灌胃3?d后凉血通瘀方组评分显著低于模型组(P<0.05).与正常组比较,模型组大鼠脑组织NGF平均光密度值、BDNF蛋白表达水平、SOD含量均显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,凉血通瘀方组大鼠脑组织NGF平均光密度值、BDNF蛋白表达水平、SOD含量均显著升高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01).与正常组比较,模型组大鼠脑、肠组织CCK-8含量均显著降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,凉血通瘀方组大鼠脑、肠组织CCK-8含量均显著升高(P<0.01).结论:凉血通瘀方对急性脑出血模型大鼠具有一定的神经保护作用,其机制可能与增加脑、肠组织CCK-8的含量有关.

目的:探讨凉血通瘀方对脑出血大鼠脑组织TLR4和NF-κB p65的影响.方法:24只SD健康雄性大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组和凉血通瘀组,每组6只.模型组和凉血通瘀组采用注射泵控制器注血/二次退针法制作脑出血模型.造模成功后,凉血通瘀组给予凉血通瘀方水剂(1.0 mL/100 g)灌胃,每日1次;假手术组、模型组每日给予等剂量蒸馏水灌胃.各组灌胃3d后进行大鼠行为学评分;Western Blot法测定Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB p65)蛋白表达变化;RT-PCR法检测脑组织TLR4 mRNA的表达.结果:与正常组比较,模型组、凉血通瘀组大鼠神经学评分升高(P<0.01);与模型组比较,凉血通瘀组大鼠神经学评分降低(P<0.01).与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达皆明显升高(P<0.01),凉血通瘀组NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,凉血通瘀组大鼠脑组织TLR4蛋白表达明显下降(P<0.01),NF-κB p65蛋白表达下降(P<0.05).模型组大鼠脑组织TLR4 mRNA的表达明显高于正常组、假手术组及凉血通瘀组(P<0.01);凉血通瘀组与正常组、假手术组未见明显差异.结论:凉血通瘀方可改善脑出血大鼠神经功能损伤,抑制脑组织TLR4和NF-κB p65蛋白表达,凉血通瘀方的作用机制可能与调节TLR4/NF-κB p65信号通路,减轻脑炎性损伤有关.