以奶牛乳腺上皮细胞(Dairy cow mammary epithelial cells,DCMECs)为研究模型,探讨microRNA-148b对DCMECs增殖和β-酪蛋白合成的影响.应用脂质体转染技术将miR-148b转染DCMECs,qRT-PCR观测其表达量,采用双荧光素酶实验验证miR-148b与转化生长因子B2(TGFB2)基因的靶向关系,分别应用EdU实验、酶联免疫吸附实验检测DCMECs的增殖以及β-酪蛋白含量.双荧光素酶实验结果证明TGFB2为miR-148b的靶基因,EdU实验结果显示,miR-148b可以促进DCMECs的增殖,ELISA结果表明过表达miR-148b可以促进β-酪蛋白合成.

为探究miR-142-3p在MCF-7细胞中作用机理,采用RNA免疫共沉淀技术和双荧光素酶报告基因技术筛选及验证miR-142-3p作用靶基因;蛋白质免疫印迹技术验证靶基因及其介导的PI3K-AKT-mTOR信号通路蛋白表达量及通路活性;应用实时荧光定量PCR验证靶基因PTEN对miR-142-3p调节关系.结果表明,miR-142-3p靶向调节AKT和PTEN表达;miR-142-3p过表达组中PI3K-AKT-mTOR通路活性显著降低;miR-142-3p抑制组中PI3K-AKT-mTOR通路活性显著上升;抑制PTEN表达显著提高miR-142-3p表达量.因此miR-142-3p靶向调节AKT和PTEN表达继而抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路活性,PTEN与miR-142-3p存在调节关系.