三七、人参和西洋参是人参属名贵中药材,但均存在不同程度的重金属超标问题.为了解 3 种人参属中药材重金属超标情况及种间差异,以《中华人民共和国药典》2020 年版对重金属的限量值为评判标准,分析了三七、人参和西洋参研究文献报道中的铜、铅、砷、镉、汞 5 种重金属的数据.结果表明,三七中铜、铅、砷、镉、汞的超标率分别为 1.04%、1.65%、9.98%、1.58%、1.03%;人参中汞、砷超标率分别为 7.4%、0.23%;西洋参中汞超标率为 1.86%.目前,3 种药材的研究多聚焦于重金属的含量检测,重金属的消减措施研究较少,今后应加强重金属残留的安全风险评估研究,根据药材的植物学特征和区域土壤重金属特征制定更加科学的限量标准,以增强含重金属中药材的安全.
动物类中药资源是中药产业发展不可或缺的重要支撑,但和植物类中药相比,其存在资源量不足、药效物质基础不清、缺乏专属质量评价体系等问题.对动物类中药的应用及质量研究现状进行归纳整理,对现存问题进行阐述,针对相关问题提出相应的解决方法.
目的:利用DNA条形码线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因鉴别蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其混伪品共 32 种蛇类.方法:收集蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其混伪品,对样品DNA进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,扩增产物电泳后进行双向测序.应用CodonCodeAligner 11.0.1 软件对峰图质量进行比对、拼接,利用MEGA 11.0 软件对各物种碱基进行分析,构建邻接(NJ)系统聚类树并计算遗传距离.结果:NJ系统聚类树显示,蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其混伪品共 32种均独立聚为一支,眼镜蛇科与蝰科聚为一支,并与游蛇科并列聚类.游蛇科黄环林蛇、颈棱蛇与眼镜蛇科聚为一支,游蛇科赤链华游蛇、环纹华游蛇、草腹链蛇与蝰科聚为一支,锦蛇属玉斑锦蛇、黑眉锦蛇、百花锦蛇未聚为一支.结论:利用DNA条形码COⅠ基因能够准确鉴定蕲蛇、乌梢蛇、金钱白花蛇及其混伪品共 32种蛇类,赤链华游蛇、环纹华游蛇、草腹链蛇、黄环林蛇、颈棱蛇、玉斑锦蛇、百花锦蛇、黑眉锦蛇、宽吻水蛇、铅色水蛇、中国沼蛇、渔游蛇的种属归类有待进一步研究.
目的:建立"一测多药"薄层鉴别方法,同时鉴别蠲痹汤基准样品中的当归、川芎、羌活和独活 4 个药味.方法:通过考察供试品溶液制备方法、展开剂、点样量、点样方式、加热时间等因素,建立最优的薄层鉴别方法,并进行专属性和耐用性考察.结果:建立了"一测多药"薄层鉴别方法,即吸取供试品溶液 3～5 μL、对照品溶液和对照药材溶液各 2 μL,分别点于同一硅胶GF254 薄层板上,以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(5.0∶1.0∶2.0∶0.2)为展开剂,置紫外光灯(254 nm)下检视,供试品在与藁本内酯对照品色谱相应的位置上显相同深蓝色斑点,再喷以 10%硫酸乙醇溶液,在 105℃加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365 nm)下检视,供试品在与羌活醇对照品和独活对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点.结论:所建立的薄层鉴别方法专属性强、耐用性好,提高检测效率的同时降低了检测成本.
目的:探索人工培殖冬虫夏草Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.外观品质形成的分子基础.方法:以重庆和康定人工培殖冬虫夏草僵虫为材料,利用Illumina Hiseq 2500 高通量测序技术进行转录组测序分析,基于差异倍数(FC)和错误发现率(FDR)筛选差异表达基因,具体筛选条件为|log2FC|>1、FDR<0.05.结果:共获得 21 942个转录本,利用DEGSeq筛选获得 1575 个差异表达基因,其中上调表达基因 626 个、下调表达基因 949 个;基因本体(GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析结果显示,这些差异表达基因主要集中于氨基酸代谢、折叠-分选-降解、糖代谢、转运和分解代谢、辅酶因子和微生物代谢等途径;筛选到 66 个颜色变化差异表达基因,包含 46个氧化还原酶活性相关基因、12个过氧化物酶体相关基因、3个单加氧酶活性调节相关基因、3个黑化反应相关基因、2个活性氧代谢相关基因,其中tyr1、TYR基因可能是冬虫夏草僵虫颜色变化的关键功能基因.结论:利用高通量测序技术和生物信息分析获得了人工培殖冬虫夏草僵虫转录组信息特征,为阐明人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化的调控机制研究提供参考.
目的:对马鹿茸多肽A的表面结构进行分析,并探讨其结构对药效的作用.方法:采用原子力显微镜观察马鹿茸多肽A的表面结构.结果:马鹿茸多肽A表面呈三维的曲面、板状结构;其基部为不规则网格状结构,3D结构显示其网格边缘具有粗细不均、长短不等的支链形成椎体状突起,呈栅状或片状.质量浓度为 0.50、0.25、0.10 μg·mL-1 的马鹿茸多肽A的粗糙度分别为 0.667 2、0.700 0 和 0.790 0,表面高度分别为 14.510 5、39.458 8、6.139 7 nm.在相同波长下,一维各向同性功率谱密度越大,则二维各向同性功率谱密度越大,样品对于测定的响应越灵敏.结论:马鹿茸多肽A的曲面板状结构可增加与作用靶点的接触面积,其栅状或片状椎体支链结构则更有利于和作用靶点的相互接触或渗入而易发挥药效作用.随着质量浓度的增大,其粗糙度逐渐变小;而表面高度没有随质量浓度的变化呈现出规律性的变化.
南药具有浓厚的历史传统文化积淀,但跨省品牌的影响力却逐渐减弱,通过组建湘赣粤港澳中医药全产业链协同发展联盟,协同重塑大区域南药品牌值得探索.结合品牌药材形成的相关要素,论述大南药的区划与品牌内涵,基于品牌重塑的基础、可及性和产业价值提出南药品牌重塑的路径与方法.
目的:制备咖啡酸分子烙印聚合物(MIP)并特异性地去除金银花提取物中的咖啡酸,考察咖啡酸去除前后金银花提取物抑制前列腺素E2(PGE2)释放的变化,从整体上评价其抗炎活性.方法:采用溶胶-凝胶法,以粒径为 62～105 μm的二氧化硅微珠为载体、咖啡酸为模板分子、(3-氨丙基)三乙氧基硅烷为功能单体、四乙氧基硅烷为交联剂、四氢呋喃为溶剂,合成了咖啡酸MIP.以此MIP作为液相色谱固定相,以甲醇-乙酸(500∶1和 9∶1)为流动相,特异性去除了金银花提取物中的咖啡酸.通过脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7 释放PGE2 实验评价去除咖啡酸前后金银花提取物的抗炎作用.结果:溶胶-凝胶法制备的咖啡酸MIP能够从复杂体系中特异性地分离和富集微量的咖啡酸,对咖啡酸的容量因子和烙印效率分别为 15.8 和 9.7,最终从金银花提取物 2.6 g中分离了咖啡酸146 μg,纯度为 92%,回收率为 89%.金银花提取物和去除咖啡酸的提取物在质量浓度为 100、200、400 μg·mL-1时对脂多糖诱导的RAW264.7 细胞释放PGE2 的抑制率分别为 5.8%、35.6%、62.5%和 5.4%、13.3%、57.5%,去除微量咖啡酸以后的提取物在 3 个质量浓度时的抑制率较金银花提取物均有所降低.结论:咖啡酸是金银花提取物抗炎活性的一个重要成分,咖啡酸分子烙印聚合物可以实现金银花提取物中微量咖啡酸的特异性分离,分子烙印技术能够在保证中药完整性的前提下评价中药的药理活性.
目的:利用显微特征参数,分析比较鹿角与鹿角脱盘显微结构差异,为鹿角粉与鹿角脱盘粉鉴别,以及两者质地差异性提供显微结构基础.方法:采用光学显微镜观察鹿角脱盘、鹿角及鹿骨粉末显微特征,并测定和比较三者的骨陷窝长/短径比值和骨陷窝面积占比显微特征数.结果:鹿角脱盘骨陷窝长/短径比值为 2.04～2.38、骨陷窝面积比为 35.04%～45.82%;鹿角的骨陷窝长/短径比值为 1.69～2、骨陷窝面积比为 40.60%～61.77%;鹿骨骨陷窝长/短径比值为 1.54、骨陷窝面积比为 71.8%.结论:鹿角、鹿角脱盘及鹿骨中三者显微鉴定参数均具有明显的差异性;表明骨陷窝长/短径比与骨陷窝面积比,不仅可作为鹿角与鹿角脱盘显微鉴定参数;也阐释了鹿角脱盘角质地比鹿角更为坚硬的组织结构基础,即随着骨陷窝形态由圆变长、骨陷窝面积比降低,其骨化程度增加、质地更加坚硬.
目的:观察金银花花蕾腺毛的形态发生及生长动态,探讨金银花花蕾腺毛生长发育与药材品质形成的相关性,为提高和稳定金银花药材质量提供新思路.方法:采集不同发育程度花蕾,分别制成石蜡切片和临时装片,观察腺毛的形态发生过程、密度、大小、颜色,并对取得数据进行统计分析.结果:金银花花蕾腺毛起源于幼嫩花蕾表皮细胞,在花蕾长约 1.0 mm时开始出现,经平周与垂周分裂发育成完整腺毛;在花蕾长 1.0～5.0 mm时腺毛"迅速涌现",在花蕾长 7.5 mm时腺毛密度趋于稳定;在花蕾长 5.0～7.5 mm时腺毛"迅速膨大",腺头面积、腺头周长在花蕾长 10.0 mm时仍有明显增长,而腺柄面积、腺柄周长在花蕾长 7.5 mm时基本不再增加;随着腺毛腺头逐渐增大,有色物质积累量增加,花蕾颜色不断加深.结论:腺毛形态发生在花蕾形态建成之后,并晚于非腺毛.腺头合成积累有色物质的趋势与腺毛发育趋势一致,提示腺毛发育与某些次生物质的合成积累密切相关,通过调控腺毛发生和发育可以调控金银花药材质量.研究结果可为金银花花蕾腺毛的深入研究提供参考.
目的:探究镰刀菌对太子参品质的影响和太子参中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)毒素在其煎煮过程中的迁移规律.方法:采用反式培养法,探讨镰刀菌侵染太子参后DON毒素积累变化及对太子参质量的影响,计算水煎煮后汤液DON毒素的迁移率.结果:受镰刀菌侵染后,太子参表面会形成 1 层白色菌丝和黑色沉积物,DON毒素在太子参中随时间推移显著增加;受镰刀菌侵染的太子参中总皂苷和多糖含量分别为对照组的 1.5、2.0倍,而太子参环肽B含量显著降低.镰刀菌侵染太子参 20 d后,DON毒素质量分数达到 45.40 μg·kg-1,DON毒素煎煮后转移率为12.50%～27.90%.结论:研究结果为制定中药材DON毒素限量标准及临床安全用药提供了参考.
目的:克隆中华蟾蜍肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9 基因的全长序列,并分析其序列特征.方法:根据转录组测序所得的TNFRSF11b、TNFRSF9 基因片段设计特异性引物,以中华蟾蜍蟾皮为材料,利用逆转录聚合酶链式反应(PCR)技术获得BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9 基因全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列,并采用生物信息学手段分析其序列特征,通过实时荧光定量 PCR 方法检测BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9 基因在中华蟾蜍 7 种组织/器官中的表达情况.结果:克隆获得蟾蜍BbgTNFRSF11b基因的全长cDNA序列为 1233 bp,编码 410 个氨基酸,理论相对分子质量为 46.97 kDa,等电点为 8.64,不存在跨膜区及信号肽,为亲水性蛋白,具有多个磷酸化位点.BbgTNFRSF9 基因的全长cDNA序列为 829 bp,编码 247 个氨基酸,理论相对分子质量为 67.874 kDa,理论等电点为 5.12,存在信号肽,为疏水性蛋白,具有多个磷酸化位点,进化树分析发现BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9 基因与其他动物TNFRSF11b、TNFRSF9 基因相似度不高,表明该基因虽有特殊结构域但不同物种间差异较大.组织表达分析显示,BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9 基因在耳后腺中表达显著高于其他部位.结论:成功获得蟾蜍BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9 基因序列,掌握其序列特征,为后续深入研究该蛋白的功能提供参考.
目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立僵蚕配方颗粒的鉴定方法.方法:采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分离不同加工方式的僵蚕样品蛋白,对提取方法、缓冲液pH、料液比、反应温度、反应时间、专属性、适应性进行考察.同时利用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析寻找稳定且丰度较高的蛋白作为鉴定僵蚕配方颗粒的蛋白标志物.结果:SDS-PAGE最佳提取条件为取僵蚕样品适量,按料液比 1∶10 加入 0.1 mol·L-1 NaAc缓冲液(pH=5),30℃振荡提取 1.5 h.可分离出特征性条带约 40～50 kDa,该条带主要为僵蚕基原动物家蚕Bombyx mori Linnaeus的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白、抗糜蛋白和抗胰蛋白等,可作为僵蚕鉴别的蛋白标记.根据SDS-PAGE分析条带的相对分子质量大小、蛋白在僵蚕药材和提取物中的特异性和稳定性,确定Serpin类丝氨酸蛋白酶抑制剂为鉴定僵蚕配方颗粒的特异性蛋白.结论:基于差异蛋白建立了可用于僵蚕配方颗粒生成过程的质量控制、僵蚕配方颗粒的SDS-PAGE蛋白鉴定的指纹图谱方法.
目的:分析地黄在中药类保健食品中生熟异用下的配方规律.方法:收集国家市场监督管理总局(SAMR)特殊食品信息查询平台公布的生、熟地黄保健食品数据,对其保健功能及中药组方等进行统计,运用Apriori算法和Kulc、不平衡比参数对地黄生熟异用的保健食品配方规律进行分析.结果:保健食品中,生地黄主要用于辅助降血糖,熟地黄主要用于增强免疫力、缓解体力疲劳、改善营养性贫血.在辅助降血糖类生地黄保健食品中,生地黄主要与补气药、补阴药、解表药、解热药配伍,代表性组合为生地黄-黄芪-苦瓜;在增强免疫力类熟地黄保健食品中,熟地黄主要与补气药、补血药、补阴药配伍,代表性组合为熟地黄-党参-阿胶;在缓解体力疲劳类熟地黄保健食品中,熟地黄主要与补气药、补阳药、补阴药配伍,代表性组合为熟地黄-人参-淫羊藿、熟地黄-人参-枸杞子;在改善营养性贫血类熟地黄保健食品中,熟地黄主要与补气药、补血药配伍,代表性组合为熟地黄-黄芪-阿胶、熟地黄-黄芪-当归.结论:地黄在保健食品中的使用遵循生熟异用的规律,在不同保健功能中,组方配伍基本符合中医理论和现代医学理论,可为生、熟地黄保健食品研发提供借鉴和依据.
目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立烫水蛭(蚂蟥)及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法.方法:根据烫水蛭(蚂蟥)细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出烫水蛭(蚂蟥)的稳定引物区间;在区间内筛选获得烫水蛭(蚂蟥)的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,并设计烫水蛭(蚂蟥)特异性鉴别引物TSZ-F、TSZ-R;分别收集烫水蛭(蚂蟥)及其阴性样品,建立烫水蛭(蚂蟥)配方颗粒特异性PCR鉴别方法,并对PCR体系进行优化,对该方法的耐受性和适用性进行考察.结果:当退火温度为 54℃、循环数为 34 次,烫水蛭(蚂蟥)及其配方颗粒经PCR和凝胶电泳后,可在约 133 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品无条带.结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别烫水蛭(蚂蟥)饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒,也为可其中药配方颗粒的质量标准研究提供参考.
目的:研究昆仑雪菊干预小胶质细胞功能的作用机制.方法:采用CCK-8 法检测昆仑雪菊总黄酮对BV2 细胞的增殖抑制活性,Griess法和ELISA检测细胞炎症因子一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)的分泌.借助自建昆仑雪菊成分-靶点数据集对昆仑雪菊中 9 个主要黄酮成分和相关作用靶点进行筛选.通过GeneCards、GENE、STRING数据库及R语言收集并筛选小胶质细胞功能靶点,筛选昆仑雪菊改善小胶质细胞功能的靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并用Cytoscape软件的NetworkAnalyzer功能筛选核心靶点.利用基因集富集分析(GSEA)软件对分子特征数据库MSigDB中的相关靶点进行Hallmark基因分析.使用Bioconductor数据库进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果:昆仑雪菊黄酮类提取物在 4 μg·mL-1 时可以显著抑制小胶质细胞激活分泌NO和IL-6.昆仑雪菊黄酮类成分可能作用于蛋白激酶B(Akt)、肿瘤坏死因子(TNF)、IL-6、TP53、酪氨酸激酶C(SRC)、表皮生长因子受体(EGFR)、JUN、信号转导和转录激活因子 3(STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶 3(MAPK3)、CTNNB1 等靶点干预小胶质细胞的功能.涉及的通路包括磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)-Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、信号转导子和转录激活子(JAK)-STAT信号通路等.结论:昆仑雪菊黄酮类成分可能通过参与调控PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、JAK-STAT信号通路等的相关靶点,实现调节胶质细胞活化的作用.
九里香(Murrayae Folium et Cacumen)为芸香科植物九里香 Murraya exotica L.和千里香 M.paniculata(L.)Jack的干燥叶和带叶嫩枝,在我国药用历史悠久,国内外学者从九里香中分离鉴定了多种化学成分,包括香豆素类、黄酮类、生物碱类、挥发油等.药理研究表明,九里香黄酮类成分具有抗炎镇痛、抑制肿瘤细胞活性、抗氧化和降血糖的作用,其挥发油具有抗虫抗菌的作用.九里香以野生为主,其野生资源及人工栽培有待研究.对近年来九里香的主要化学成分及药理作用等研究进行系统的整理总结,同时对药材九里香基原植物九里香和千里香进行保育学的相关研究进行综述、以期为九里香的化学成分分析、临床应用、保育学研究和新药研发提供参考.
目的:初步探索家鸡苹果酸脱氢酶 2 编码基因MDH2 的序列特征、组织表达及原核表达情况.方法:采用克隆技术与测序技术获取家鸡MDH2 基因互补脱氧核糖核酸(cDNA)全长,使用多种在线软件对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测该基因在不同组织中的表达情况,利用同源重组技术构建pET32a(+)-MDH2 表达载体,使用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达.结果:从新鲜家鸡砂囊内壁中成功克隆到 MDH2 基因,序列长度 1120 bp,其开放阅读框(ORF)为 1014 bp,编码 337 个氨基酸;MDH2 蛋白相对分子质量为 35.95 kDa,理论等电点 9.17,属于稳定碱性疏水性蛋白.MDH2 蛋白含 25 个磷酸化位点;二级结构主要包括α-螺旋、β-螺旋、无规则卷曲,无信号肽和跨膜结构域.MDH2 基因在心、肝、脾、肺、肾、砂囊内壁中都有表达,其中心、肾、砂囊内壁中表达量较高,pET32a(+)-MDH2 重组蛋白主要是以包涵体的形式存在.结论:MDH2 基因在家鸡体内广泛表达,但其在各组织/器官中表达趋势不同,提示其功能可能具有广泛性与多重性.
目的:建立岭南有毒中草药特征性化学成分的精准识别质谱数据库及快速检测方法.方法:采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS),色谱柱为Poroshell 120 SB-C18(100 mm×2.1 mm,2.7 μm),以 0.1%甲酸水溶液(含 5 mmol·L-1 甲酸铵,A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0～1 min,10%B;1～12 min,10%～70%B;12～22 min,98%B),流速为 0.3 mL·min-1,柱温为 35℃,以三重四极杆串联质谱仪检测,离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子模式,根据毒性成分的离子对信息、保留时间、检出限建立高通量定性定量数据库.结果:采用所建立的岭南有毒中草药精准识别质谱数据库及快速检测方法,开展毒性中草药中毒应急检验,检出钩吻、洋金花、雪上一枝蒿等毒性中草药的特征毒性成分,对粉末、药酒等不同状态、不同剂型的样本均适用.结论:所建立的分析方法快速、灵敏,筛查数据库数据准确,适合中药及中成药中毒性成分的定性定量检测,可为进一步开展中药材风险评估和药物警戒提供支撑.
目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立五倍子药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法.方法:根据五倍子细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出五倍子的稳定引物区间,并在区间内筛选获得五倍子的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计五倍子特异性鉴别引物WBZ-F、WBZ-R,分别收集五倍子及其混伪品,建立五倍子配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR体系,对该方法进行耐受性和适用性考察.结果:退火温度为 53℃,循环 36 次,五倍子及其配方颗粒经PCR及凝胶电泳后,可在约 138 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品倍蛋蚜虫虫瘿无条带.结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别五倍子药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中的五倍子蚜虫源性成分,也可为其他中药配方颗粒的质量标准研究提供参考.
