目的:探讨二甲双胍对异丙肾上腺素(ISO)诱导的H9C2心肌细胞肥大的作用,并阐明其可能的分子机制.方法:培养H9C2细胞,采用50 μmol·L-1 ISO干预H9C2细胞建立心肌细胞肥大模型作为ISO组;不予处理的细胞作为对照组.Western blotting法检测2组H9C2心肌细胞中脑钠肽(BNP)蛋白表达水平.将H9C2心肌细胞分为对照组、ISO组、ISO+二甲双胍组和二甲双胍组.采用CCK-8法检测各组H9C2细胞活力,选取二甲双胍的最佳药物干预浓度和时间,采用结晶紫染色观察各组H9C2心肌细胞形态表现和横截面积,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中心房钠尿肽(ANP)mRNA表达水平,线粒体荧光探针观察各组细胞中线粒体形态表现,Western blotting法检测各组细胞中线粒体融合标志性蛋白神经萎缩蛋白 1(OPA1)和线粒体融合蛋白(MFN)2蛋白表达水平.结果:与对照组比较,ISO 组H9C2心肌细胞横截面积增加(P<0.05),细胞中BNP蛋白表达水平升高(P<0.05),提 示 心 肌 细 胞 肥 大 模 型 造 模 成 功.CCK-8 法 检测,2 mmol·L-1 二甲双胍作用 8 h时细胞活力恢复效果最佳.RT-qPCR法检测,与对照组比较,ISO组细胞中ANP mRNA表达水平升高(P<0.05);与ISO组比较,二甲双胍+ISO组和二甲双胍组细胞中ANP mRNA表达水平降低(P<0.05).线粒体荧光探针观察,对照组细胞中线粒体呈绿色荧光,多为短棒状,少数线粒体丝线状相连;与对照组比较,ISO组H9C2细胞中点状线粒体明显增加,ISO+二甲双胍组和二甲双胍组细胞中点状线粒体明显减少.Western blotting法检测,与对照组比较,ISO组细胞中OPA1和MFN2蛋白表达水平降低(P<0.05);与ISO组比较,ISO+二甲双胍组和二甲双胍组细胞中OPA1和MFN2蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:二甲双胍可改善ISO诱导的H9C2心肌细胞肥大,其机制可能与其上调OPA1和MFN2蛋白表达及促进线粒体融合有关.
目的:探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1(CDKL1)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和转移的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:选择乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,采用小干扰RNA技术(siRNA)沉默CDKL1基因表达.采用 1 μmol·L-1 磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)抑制剂BpV或10 μmol·L-1 蛋白激酶B(Akt)激动剂SC79进行干预.取对数生长期MCF-7细胞,分为空白对照组(MCF-7细胞不作任何处理)、转染对照(siRNA-NC)组(MCF-7细胞转染siRNA-NC质粒)、siRNA-CDKL1 组(MCF-7 细胞转染 siRNA-CDKL1 质粒)、siRNA-CDKL1+ PTEN抑制剂BpV(siRNA-CDKL1+BpV)组(转染 siRNA-CDKL1 的 MCF-7 细 胞,再 采 用1 μmol·L-1 PTEN抑制剂 BpV处理 2 h)和 siRNA-CDKL1+Akt激动剂 SC79(siRNA-CDKL1+ SC79)组(转染siRNA CDKL1的MCF-7细胞,再采用10 μmol·L-1 Akt激动剂SC79处理2 h).采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性,EdU法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中EdU阳性细胞率,细胞划痕愈合实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、PTEN、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平.结果:与siRNA-NC组比较,siRNA-CDKL1组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.01),EdU阳性细胞率降低(P<0.01),乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭细胞数降低(P<0.01),细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.01),PTEN蛋白表达水平升高(P<0.01).与siRNA-CDKL1组比较,siRNA-CDKL1+BpV组和siRNA-CDKL1+SC79组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性升高(P<0.01),EdU阳性细胞率升高(P<0.01),迁移和侵袭细胞数增加(P<0.01),细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平升高(P<0.01),PTEN蛋白表达水平降低(P<0.01).结论:CDKL1基因的沉默可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和转移能力,其作用机制可能与调控PTEN/Akt/mTOR信号通路有关.
目的:探讨外源性CXC趋化因子配体 10(CXCL10)对肝细胞癌(HCC)SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响,并阐明其作用机制.方法:按照CXCL10作用浓度,将人HCC SMMC-7721细胞分为0 mg·L-1 CXCL10组、10 mg·L-1 CXCL10组和30 mg·L-1 CXCL10组.上述部分细胞给予细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059(80 μmol·L-1)后,将SMMC-7721细胞分为 0 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组、10 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组 和 30 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组.CCK-8法检测各组SMMC-7721细胞增殖率,EdU法检测各组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率,Transwell小室实验检测各组SMMC-7721细胞迁移率,Western blotting法检测各组SMMC-7721细胞中ERK、磷酸化ERK(p-ERK)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达水平.结果:CCK-8法检测,培养 24 h后,与 0 mg·L-1 CXCL10 组比较,10 mg·L-1 CXCL10 和 30 mg·L-1 CXCL10 组SMMC-7721细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01).EdU法检测,与 0 mg·L-1 CXCL10组比较,10 mg·L-1 CXCL10 和 30 mg·L-1 CXCL10 组 SMMC-7721 细胞中 EdU 阳性表达率升高(P<0.01);Transwell小室实验检测,培养 48 h后,与 0 mg·L-1 CXCL10组比较,10 mg·L-1 CXCL10和30 mg·L-1 CXCL10组SMMC-7721细胞迁移率升高(P<0.01).Western blotting法检测,细胞培养24 h后,采用CXCL10 溶液处理 24 h,与 0 mg·L-1 CXCL10 组比较,10 mg·L-1 CXCL10组和30 mg·L-1 CXCL10组SMMC-7721细胞中ERK、p-ERK及Cyclin D1蛋白表达水平升高(P<0.01).CCK-8法检测,加入ERK抑制剂PD98059后,与 0 mg·L-1 CXCL10组比较,10 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组和30 mg·L-1 CXCL10+PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低(P<0.05);与 10 mg·L-1 CXCL10组比较,10 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组 SMMC-7721 细胞增殖率降低(P<0.05);与30 mg·L-1 CXCL10 组比较,30 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组SMMC-7721 细胞增殖率降低(P<0.05).结论:CXCL10 能够促进 HCC SMMC-7721 细胞增殖和迁移,其作用机制与上调 ERK/p-ERK/Cyclin D1通路蛋白表达有关.
目的:比较经尿道等离子前列腺剜除术(PKEP)和经尿道等离子前列腺切除术(PKRP)2种术式治疗良性前列腺增生(BPH)的临床疗效,为 BPH 的治疗方式选择提供依据.方法:收集60例因下尿路症状(LUTS)就诊且门诊初诊为BPH的患者的临床资料,在患者知情同意的情况下将患者随机分为PKEP组(采用PKEP进行治疗)和PKRP组(采用PKRP进行治疗),每组各30例.观察2组患者术前年龄、体质量、体质量指数(BMI)、总前列腺特异抗原(tPSA)水平、红细胞比容(HCT)、血红蛋白(Hb)水平、术前和术后钠离子水平、前列腺体积、中叶突入程度、并发症(高血压、糖尿病和呼吸系统疾病)发生率和口服5α还原酶抑制剂百分率,手术时间、术中出血量、切除组织体积、切除速率、切除效率,术后总住院时间、留置尿管时间、膀胱冲洗时间、术前和术后生活质量(QOL)评分及国际前列腺症状评分(IPSS),并比较2组患者术后不良反应发生情况.结果:2组患者术前年龄、体质量、BMI、tPSA水平、术前HCT、术前Hb水平、术前钠离子水平、前列腺体积和中叶突入程度比较差异无统计学意义(P>0.05);2组患者并发症(高血压、糖尿病和呼吸系统疾病)发生率和口服 5α还原酶抑制剂百分率比较差异无统计学意义(P>0.05);PKRP组患者术中出血量、切除组织体积、切除速率和切除效率高于PKRP组(P<0.05);2组患者总住院时间、术后留置尿管时间和术后膀胱冲洗时间比较差异无统计学意义(P>0.05);2组患者术前和术后钠离子水平、QOL评分和IPSS评分比较差异无统计学意义(P>0.05);2组患者术前和术后各自组内QOL评分及IPSS评分比较差异有统计学意义(P<0.05);PKEP组患者出现尿失禁1例,PKRP组患者出现尿失禁2例,未出现其他手术相关并发症.结论:2种术式疗效和安全性相似,均可获得满意的手术效果;PKEP术中患者出血量较少,腺体切除量、切除效率和切除速率较高,是治疗BPH的较好方法.
目的:观察度普利尤单抗治疗难治性特应性皮炎(AD)的疗效,为该类患者的治疗提供参考.方法:收集2例难治性重度AD患者应用度普利尤单抗治疗的临床资料和随访结果,结合相关文献复习,分析度普利尤单抗治疗难治性AD的疗效及安全性.结果:患者1,女性,30岁,双手背见密集充实丘疹,似皮肤淀粉样变改变,四肢及躯干散在红斑、丘疹伴瘙痒 25 年,并发过敏性鼻炎5年,诊断为成人重度AD,应用度普利尤单抗治疗16周后停药,皮损完全消退,随访至今未复发,过敏性鼻炎症状明显缓解,无须应用口服药.患者2,女性,59岁,全身暗红斑、丘疹和结节伴瘙痒10余年,曾多次住院治疗,既往应用环孢素、沙利度胺和激素治疗,效果不佳,诊断为成人重度AD,应用度普利尤至今,皮损基本消退.结论:度普利尤单抗对难治性AD有良好疗效且安全,患者生活质量改善,AD并发其他2型炎症驱动的过敏性疾病症状得到控制.
目的:探讨Y染色体无精子症因子(AZF)区域的15个标签位点(STS)序列片段微缺失位点与男性不育(MI)的关系,为干预遗传性MI提供依据.方法:选择2586例疑似MI患者作为研究对象,按照年龄分为≤20岁组(14例)、21～30 岁组(988 例)、31～40 岁组(1318 例)和≥41岁组(266例).采用聚合酶链式反应(PCR)法对Y染色体AZF区域的15个STS序列片段进行检测并筛选异常结果,比较各组MI患者Y染色体微缺失情况.结果:在2586例参检人群样本中发现207例Y染色体异常,占总体样本的8.00%;其中≤20岁组、21～30岁组、31～40岁组和≥41岁组检出Y染色体异常率分别为7.14%(1/14)、8.10%(80/988)、8.04%(106/1318)和7.52%(20/266);各组患者基础位点合并扩展位点的缺失率比较差异有统计学意义(χ2=10.836,P=0.013),21～30岁组患者基础位点合并扩展位点的缺失率明显高于 31～40岁组(P<0.05);在总体受检样本中,发生基础位点片段缺失者 52例,异常率为 2.01%,各组患者异常率比较差异有统计学意义(χ2= 9.658,P=0.022);AZFc片段缺失者占所有受检人数1.39%,21～30岁组和31～40岁组患者AZFc缺失率明显高于≥41岁组(P<0.05),21～30岁组和31～40岁组患者总体缺失率比较差异有统计学意义(χ2=3.612,P=0.040);各组患者 sY127、sY134 合并 sY105、sY121、sY1192、sY153 和sY160位点缺失率比较差异无统计学意义(P>0.05),各组患者sY254、sY255合并sY105、sY121、sY1192、sY153和sY160位点缺失率比较差异无统计学意义(P>0.05)结论:广西壮族自治区东北部地区主要生育年龄段男性Y染色体异常的主要原因是sY1192和sY153位点微缺失,其中以sY1192位点微缺失为主,且随着年龄增长,该位点突变检出率越高.
目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者外周血淋巴细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶5调节亚基相关蛋白 1 类似物 1(CDKAL1)基因及其剪接异构体的表达水平,并探讨其临床意义.方法:收集 65 例糖尿病患者,其中T2DM患者 20 例(T2DM组)、糖尿病肾病(DN)患者 23 例(DN组)和糖尿病视网膜病变(DR)患者22例(DR组),并选择同期健康体检者28名(健康对照组).采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组研究对象外周血淋巴细胞中CDKAL1基因及其2种剪接异构体CDKAL1-X1和CDKAL1-X2表达水平,分析其表达与T2DM及其糖尿病微血管并发症的关系.结果:与健康对照组比较,T2DM组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因表达水平升高(Z=4.705,P<0.01),CDKAL1-X1 表达水平升高(Z=2.698,P=0.007).与健康对照组比较,DR组和DN组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因和CDKAL1-X1表达水平升高(P<0.05);DR组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因表达水平高于DN组(P<0.05).结论:T2DM患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因和CDKAL1-X1表达水平升高可能参与糖尿病及其并发症的发生发展.
目的:探讨过表达叉头转录因子1(FOXO1)的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对哮喘小鼠肺嗜酸性粒细胞浸润和气道重构的抑制作用,并阐明其可能的作用机制.方法:分离小鼠的BMSCs,采用油红O染色和茜素红染色鉴定BMSCs,流式细胞术鉴定BMSCs的表型.取对数生长期的BMSCs,分为对照组(不进行处理),FOXO1-BMSCs组(感染携带FOXO1基因的重组慢病毒)和NC-BMSCs组(感染阴性对照重组慢病毒).采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组BMSCs中FOXO1 mRNA表达水平,Western blotting 法检测各组BMSCs中FOXO1蛋白表达水平.将40只小鼠随机分为对照组(给予生理盐水)、模型组(给予生理盐水)、NC-BMSCs组(给予NC-BMSCs悬液)和FOXO1-BMSCs组(给予FOXO1-BMSCs悬液),每组 10 只.除对照组外,其他3组小鼠采用卵清蛋白(OVA)和雾化激发的方法制备哮喘动物模型.检测各组小鼠BALF中细胞分类计数,HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现,免疫荧光法检测各组小鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和增殖细胞核蛋白(PCNA)表达情况,Image-Pro Plus软件测量各组小鼠支气管管腔内周长(Pi)、管壁面积(W)、支气管平滑肌面积(S)和支气管平滑肌细胞核数目(N),并计算S/Pi、W/Pi和N/Pi,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶12(MMP-12)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)蛋白表达水平.结果:分离培养的BMSCs呈纺锤形,油红O染色和茜素红染色后可见明显红色脂滴形成和橘红色沉淀,BMSCs表面CD29、CD44和CD71表达量升高,CD34、CD45 和 HLA-DR表达量降低.与对照组和NC-BMSCs组比较,FOXO1-BMSCs组BMSCs中FOXO1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05).与模型组和NC-BMSCs组比较,FOXO1-BMSCs组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数减少(P<0.05),气道及肺泡中炎性细胞浸润程度减轻,S/Pi、W/Pi和N/Pi降低(P<0.05),肺组织中α-SMA和PCNA表达量降低,MMP-9、MMP-12和TIMP-1蛋白表达水平降低(P<0.05).结论:过表达FOXO1的BMSCs能够减轻哮喘小鼠肺部炎性细胞浸润,尤其以嗜酸性粒细胞为主,并抑制气道重构,从而缓解哮喘的症状.
目的:寻找胃癌(GC)患者的预后标志物,实现GC的早诊早治,为提高GC患者的生存率提供依据.方法:从癌症基因图谱(TCGA)数据库和GSE84437数据集下载407和433例GC患者的临床数据和转录组数据并合并,根据细胞焦亡相关基因的表达水平和ConsensusClusterPlus数据包对GC组织样本进行聚类分型,分为A分型(342例)和B分型(465例),将GC患者按照载脂蛋白D(APOD)水平分为低表达组和高表达组.采用survminer数据包比较不同分型患者预后的差异,采用ssGSEA算法比较不同分型患者免疫浸润的差异,采用Lasso回归和Cox回归构建GC患者预后风险模型,对模型基因进行临床性状过滤,采用公共数据库分析APOD在癌旁正常组织和GC组织中表达水平的差异,采用基因富集分析(GSEA)分析APOD的京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集情况,采用CIBERSORT 算法评估免疫细胞含量并分析其与APOD表达的相关性,采用在线网站分析APOD的药物敏感性.结果:2种细胞焦亡分型患者预后比较差异有统计学意义(P= 0.002);A分型患者中22种免疫细胞含量均高于B分型(P<0.01);不同年龄(P<0.01)、N分期(P=0.04)患者2种细胞焦亡分型百分率差异有统计学意义.公共数据库分析,在GC患者肿瘤组织中APOD表达水平低于癌旁正常组织;生存分析,高表达组GC患者预后较低表达组差;临床相关性分析,不同T分期患者APOD表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);GSEA分析,高表达组在细胞黏附通路、白细胞内皮迁移通路和缝隙连接通路富集;免疫浸润分析,高表达组中滤泡辅助T淋巴细胞、CD4+记忆激活T淋巴细胞、静息自然杀伤(NK)细胞和中性粒细胞含量少于低表达组;APOD与CXC趋化因子配体 12(CXCL12)(r=0.500,P<0.01)、转化生长因子 B1(TGFB1)(r=0.313,P<0.01)、CC趋化因子配体 19(CCL19)(r=0.518,P<0.01)和CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)(r=0.444,P<0.01)呈正相关关系;药物敏感性分析,APOD与AZD-7762、KW-2449和TG-101348呈正相关关系(0
目的:探讨改良针内针穿刺技术在老年患者单侧全髋关节置换术中的应用,阐明其在超声定位引导下单次等比重脊椎麻醉中的麻醉效果和可行性.方法:选择行单侧全髋关节置换术且实施单次等比重脊椎麻醉的60例老年患者为研究对象,患者均采用患侧在上的侧卧手术体位进行穿刺.60例患者随机分为传统组和改良组,每组各30例.所有患者经超声定位棘突间隙后,行正中入路的单次蛛网膜下腔穿刺,以穿刺针见脑脊液流出或抽出判定为穿刺成功.传统组患者采用传统的针内针技术(破皮后16 G硬膜外穿刺针穿刺引导、套用25 G笔尖式侧孔脊麻穿刺针);改良组患者采用改良的针内针技术(20 G注射针直接破皮引导、套用25 G笔尖式侧孔脊麻穿刺针).观察2组患者1次穿刺成功率、2次穿刺成功率、1次皮肤穿刺成功率、2次皮肤穿刺成功率、穿刺时间、患者满意率、麻醉起效时间、满足所需麻醉平面率、麻醉平面固定时间、术者对肌松满意度、手术时间、PACU停留时间和麻醉操作即刻不良反应及术后48 h内不良反应.结果:所有患者穿刺成功.与传统组比较,改良组患者 1 次穿刺成功率、2 次穿刺成功率、1 次皮肤穿刺成功率和 2 次皮肤穿刺成功率高(P<0.01),穿刺时间短(P<0.01),患者满意率高(P<0.01),麻醉起效时间缩短(P<0.01),麻醉平面固定时间延迟(P<0.01),术者对肌松满意率高(P<0.01),麻醉10 min和术后10 min患者平均动脉压(MAP)及心率(HR)升高(P<0.05).与传统组比较,改良组患者麻醉穿刺操作过程即刻不良反应和术后 48 h内不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05).结论:行单侧全髋关节置换术的老年患者,穿刺前先超声定位,采用改良针内针穿刺技术行非可视条件下单次等比重脊椎麻醉,可明显减少穿刺次数和穿刺时间,提高穿刺成功率.
目的:观察二氧化硫(SO2)对大鼠急性心肌缺血损伤后心肌纤维化(MF)的影响,并探讨其作用机制.方法:24只雄性SD大鼠随机分为对照组(不处理)、异丙肾上腺素(ISO)组(给予ISO)、ISO+SO2 组(给予ISO+SO2)和SO2 组(给予SO2),每组6只.ISO组和ISO+SO2 组大鼠连续2 d腹腔注射大剂量ISO(50 mg·kg-1·d-1)构建急性心肌缺血损伤模型.造模成功后,ISO+SO2组和SO2 组大鼠给予Na2SO3 溶液(0.54 mmol·kg-1·d-1)和NaHSO3溶液(0.18 mmol·kg-1·d-1),连续4周,对照组和ISO组大鼠给予等量生理盐水.检测4组大鼠血浆肌钙蛋白水平和心电图,超声心动图检测4组大鼠左室短轴缩短率(LVFS)和左室射血分数(LVEF),Masson染色检测4组大鼠心肌组织中胶原沉积情况并计算胶原体积分数(CVF),Tunel染色检测 4组大鼠心肌细胞凋亡率,Western blotting法检测4组大鼠心肌组织中自噬相关蛋白3(Atg3)、自噬相关蛋白5(Atg5)、自噬相关蛋白16L1(Atg16L1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、基质金属蛋白酶8(MMP-8)和金属蛋白酶组织抑制物2(TIMP-2)蛋白表达水平.结果:与对照组比较,ISO组和ISO+SO2组大鼠心电图ST段明显抬高,肌钙蛋白水平升高(P<0.05),提示急性心肌缺血损伤大鼠造模成功;与对照组比较,ISO组大鼠LVFS和LVEF降低(P<0.05),心肌组织中CVF升高(P<0.05),心肌细胞凋亡率升高(P<0.05),心肌组织中Atg3、Atg5、Atg16L1、Caspase-3、Caspase-9和MMP-8蛋白表达水平升高(P<0.05),TIMP-2蛋白表达水平降低(P<0.05);与ISO组比较,ISO+SO2 组大鼠LVFS和LVEF升高(P<0.05),心肌组织中 CVF降低(P<0.05),心肌细胞凋亡率降低(P<0.05),心肌组织中 Atg3、Atg5、Atg16L1、Caspase-3、Caspase-9和MMP-8蛋白表达水平降低(P<0.05),TIMP-2蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:SO2可以改善大鼠急性心肌缺血损伤后MF,其机制可能与抑制心肌细胞过度自噬并减少心肌细胞凋亡有关.
目的:分析食管鳞状细胞癌(ESCC)患者的血清代谢物成分,筛选出潜在的差异代谢物,探讨ESCC的发生和能量代谢之间的关系,为ESCC的早期诊断提供有价值的能量代谢物.方法:收集ESCC患者(ESCC组)和健康志愿者(对照组)的血清样本,每组7例.采用超高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术检测2组研究对象血清代谢物.通过偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型鉴定ESCC组和对照组研究对象血清代谢物是否存在差异,并按照血清代谢物的化学分类归属进行分类.基于多反应监测(MRM)模式靶向代谢组学分析血清能量代谢物,确定显著差异能量代谢物及其通路.结果:纳入ESCC组和对照组血清样本进行检测,正和负离子模式合并后共鉴定到 266 种代谢物,2种模式分别鉴定到164和102种代谢物.单变量统计分析,ESCC组和对照组研究对象血清代谢物存在显著差异.在有化学分类归属的代谢物中,脂质和类脂质分子占比最高(18.421%).ESCC组中显著性差异能量代谢物共有3种,其中L-苹果酸和异柠檬酸表达水平上调、环磷腺苷(cAMP)表达水平下调.结论:ESCC患者和健康志愿者血清能量代谢物表达存在差异,ESCC的发生与能量代谢有关.
目的:采用生物信息学方法识别与乙型肝炎病毒相关肝细胞癌(HBV-HCC)的早期诊断和不良预后相关的关键基因,阐明HBV-HCC 发生发展的潜在分子机制.方法:从基因表达综合数据库(GEO)中检索"hepatitis B induced HCC",下载基因数据集GSE121248,通过R软件中的"limma"数据包筛选差异表达基因(DEGs),采用"clusterProfiler"数据包对DEGs进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,采用STRING数据库和Cytoscape软件建立蛋白-蛋白互作(PPI)网络并筛选关键基因.采用基因表达水平值的交互式分析(GEPIA)、Kaplan Meier-Plotter和人类蛋白质图谱(HPA)数据库验证关键基因及其蛋白质表达水平,采用"CIBERSORT"数据包分析免疫细胞的浸润情况.结果:共筛选出574个DEGs,其中上调基因173个,下调基因401个.GO功能富集分析,DEGs主要富集于小分子代谢、信号转导、免疫应答和炎症反应等生物学过程;KEGG通路富集分析,DEGs主要富集于视黄醇代谢、细胞色素P450对外源药物代谢通路和化学致癌作用等.筛选PPI网络中的细胞分裂周期20(CDC20)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白A2(CCNA2)、纺锤体检测点蛋白(BUB1B)、拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)、Discs大同源相关蛋白 5(DLGAP5)、异常纺锤体样小头畸形相关蛋白(ASPM)、中心体蛋白55(CEP55)、驱动蛋白超家族11(KIF11)和驱动蛋白超家族20A(KIF20A)为HBV-HCC的关键基因.GEPIA数据库分析,上述 10 种关键基因在HCC患者中均呈高表达.Kaplan-Meier生存曲线分析,关键基因高表达的HCC患者总生存期短于低表达患者.结论:细胞周期与病毒致癌作用相关基因(CDC20、CDK1、CCNA2和BUB1B)与HBV-HCC患者的发生发展及不良预后有密切关联,可能成为诊断标志物和治疗新靶点.
目的:探讨丹皮酚对人骨肉瘤(OS)MG-63 细胞增殖、迁移和趋化因子受体 4(CXCR4)/信号传导与转录激活因子 3(STAT3)通路的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:体外培养MG-63细胞,分为对照组(不给予药物干预)和不同浓度丹皮酚组(给予 10、20、40、80、160和320 mg·L-1丹皮酚).采用CCK-8法检测各组细胞存活率并选择半数抑制浓度(IC50)值作为后续实验药物浓度.将MG-63细胞分为对照组和丹皮酚(215.8 mg·L-1)组,采用Western blotting法检测各组细胞中CXCR4、白细胞介素6(IL-6)、磷酸化STAT3(p-STAT3)和STAT3蛋白表达水平.将MG-63细胞分为对照组(不给予药物干预)、丹皮酚组(给予215.8 mg·L-1丹皮酚)、丹皮酚+空载组(给予215.8 mg·L-1 丹皮酚+空载质粒)和丹皮酚+过表达组(给予215.8 mg·L-1丹皮酚+CXCR4过表达质粒).采用细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成率,Western blotting法检测各组细胞中CXCR4、IL-6、p-STAT3和STAT3蛋白表达水平.结果:与对照组比较,40、80、160和320 mg·L-1丹皮酚组MG-63细胞存活率降低(P<0.05),丹皮酚 IC50 值为 215.8 mg·L-1.与对照组比较,丹皮 酚(215.8 mg·L-1)组 MG-63 细 胞 中CXCR4、IL-6和p-STAT3蛋白表达水平降低(P<0.05).与对照组比较,丹皮酚组和丹皮酚+空载组MG-63细胞划痕愈合率及细胞克隆形成率降低(P<0.05),细胞中CXCR4、IL-6和p-STAT3蛋白表达水平降低(P<0.05);与丹皮酚组比较,丹皮酚+空载组MG-63细胞划痕愈合率、细胞克隆形成率和细胞中CXCR4、IL-6、p-STAT3及STAT3蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与丹皮酚组比较,丹皮酚+过表达组MG-63细胞划痕愈合率和细胞克隆形成率升高(P<0.05),细胞中CXCR4、IL-6和p-STAT3蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:丹皮酚能抑制MG-63细胞的增殖、迁移和克隆形成,其机制可能与调控CXCR4/STAT3信号通路有关.
目的:探讨生姜、青椒、大蒜、蘑菇、柠檬、山药、葡萄、番茄、西兰花和洋葱10种可食用植物来源外泌样纳米颗粒(ELNs)的体外抗氧化能力及其对过氧化氢诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用,为深入研究ELNs提供依据.方法:将PC12细胞分为对照组、外泌体组、过氧化氢组和过氧化氢+ELNs组.高速差速离心法分离提取10种ELNs,采用二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除体系、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二按盐(ABTS)阳离子自由基体系和铁离子总还原能力(FRAP)体系检测 10 种 ELNs的体外抗氧化能力,MTT 法检测各组 PC12 细胞活力.结果:10种ELNs对DPPH自由基的清除能力从高到低依次为蘑菇、洋葱、生姜、柠檬、葡萄、番茄、青椒、西兰花、山药和大蒜.10种ELNs对ABTS阳离子自由基的清除能力从高到低依次为生姜、蘑菇、洋葱、柠檬、山药、葡萄、青椒、大蒜、番茄和西兰花.10种ELNs对FRAP体系的总抗氧化能力从高到低依次为生姜、青椒、洋葱、蘑菇、柠檬、西兰花、葡萄、山药、番茄和大蒜,其中抗氧化能力相对较强的5种ELNs对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基的清除能力以及FRAP随着ELNs浓度升高而增大,半数抑制浓度(IC50)值分别为洋葱 73.15、123.02和 83.00 g·L-1,生姜124.07、91.24 和 91.24 g·L-1,蘑菇 310.44、518.04 和 237.10 g·L-1,青椒 969.06、847.32 和237.10 g·L-1,柠檬 1718.94、544.38 和 962.12 g·L-1;与对照组比较,600 μmol·L-1 过氧化氢组PC12细胞活力下降约30%.与过氧化氢组比较,过氧化氢+ELNs组(青椒、柠檬、山药和西兰花)PC12细胞活力明显提高 21.08%、26.2%、11.72%和 15.15%.结论:生姜、蘑菇、柠檬和洋葱来源ELNs外泌体在DPPH自由基清除体系、ABTS阳离子自由基体系和FRAP体系中均表现出较强的抗氧化能力.青椒、柠檬、山药和西兰花来源ELNs对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤具有保护作用.
目的:探讨微小RNA-491-5p(miR-491-5p)过表达对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响,为研究鼻咽癌的发病机制和靶向治疗提供依据.方法:将人鼻咽癌HONE-1细胞分为对照组(转染对照质粒)和miR-491-5p组(转染miR-491-5p质粒).采用荧光显微镜观察2组鼻咽癌HONE-1细胞转染效率,CCK-8法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞增殖活性,Transwell小室实验检测2组鼻咽癌HONE-1细胞的迁移细胞数,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白和上皮钙黏素mRNA表达水平,Western blotting法检测2组鼻咽癌HONE-1细胞中波形蛋白和上皮钙黏素蛋白表达水平.结果:与对照组比较,作用24、48和72 h时miR-491-5p组鼻咽癌HONE-1细胞增殖活性(t=2.832,P=0.0473;t=4.522,P=0.0014;t=9.308,P<0.01)和迁移细胞数(t=9.639,P<0.01)明显降低;与对照组比较,miR-491-5p组鼻咽癌HONE-1 细胞中波形蛋白mRNA(t=7.535,P=0.0017)和蛋白(t=7.219,P=0.0187)表达水平明显降低,上皮钙黏素 mRNA(t=4.88,P=0.0395)和 蛋 白(t=5.754,P=0.0289)表 达 水 平 明 显 升 高.结论:MiR-491-5p过表达可以抑制人鼻咽癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT).
目的:探讨色甘酸二钠(SCG)对缺血性卒中(CIS)大鼠神经功能和认知功能的影响,阐明其作用机制.方法:选取80只雄性SD大鼠,随机选取18只作为假手术组,剩余大鼠采用线栓法构建大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤模型.将造模成功的 45只大鼠随机分为I/R组、I/R+低剂量SCG组和I/R+高剂量SCG组,每组15只.造模后24 h,I/R+低剂量SCG组和I/R+高剂量SCG组大鼠分别腹腔注射20 和60 mg·kg-1 SCG,连续2周.采用改良的神经功能缺损程度评分(mNSS)法评估各组大鼠神经功能评分,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠脑梗死面积,Y型迷宫实验检测各组大鼠记忆能力,电生理检测各组大鼠正确反应率、正确反应时间和兴奋性突触后电位(fEPSP)斜率,高尔基染色检测各组大鼠脑组织中海马齿状回区树突棘密度,免疫荧光法检测各组大鼠脑组织中海马齿状回区 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数和双肾上腺皮质激素(DCX)蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、抗酪氨酸激酶受体B(TrkB)、神经生长因子3(NT-3)和抗酪氨酸激酶受体C(TrkC)蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,I/R组大鼠神经功能评分升高(P<0.05),脑梗死区域面积增大(P<0.05),正确反应率降低(P<0.05),正确反应时间增加(P<0.05),fEPSP斜率和树突棘密度降低(P<0.05),脑组织齿状回区BrdU阳性细胞数和DCX蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),海马组织中NT-3蛋白表达水平升高(P<0.05),而BNDF、TrkB和TrkC蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).与I/R组比较,I/R+高剂量SCG组大鼠神经功能评分降低(P<0.05),脑梗死面积减少(P<0.05),正确反应率升高(P<0.05),正确反应时间减少(P<0.05),fEPSP斜率和树突棘密度升高(P<0.05),脑组织中海马齿状回区BrdU阳性细胞数和DCX蛋白表达水平明显升高(P<0.05),大鼠海马组织中BDNF、TrkB、NT-3 和 TrkC 蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:SCG对I/R损伤模型大鼠神经功能与认知功能具有保护作用,其作用机制可能与SCG提高BDNF/TrkB和NT-3/TrkC信号通路蛋白表达及促进神经元增殖有关.
临床麻醉工作中,术中神经监测技术的应用和神经肌肉疾病患者的麻醉使得肌肉松弛(肌松)药的使用受限,而无肌松麻醉成为临床麻醉方式的新挑战.瑞芬太尼是具有超短效药代动力学和药效学的阿片类镇痛药物,其呼吸抑制的不良反应可为无肌松麻醉气管插管和麻醉维持提供有利条件.与其他阿片类药物比较,瑞芬太尼具有起效迅速、快速清除和持续静脉输注无明显蓄积的特点,并可基本满足无肌松全身麻醉诱导的气管插管条件.瑞芬太尼和丙泊酚的药代动力学模式互补,能协同消除麻醉对机体的伤害性刺激,维持稳定的通气状态和血流动力学,满足手术条件,在停药后患者苏醒迅速,可避免肌松药残余作用导致呼吸恢复延迟和术后肺部并发症的发生,是实现无肌松麻醉的优选组合.现综合分析瑞芬太尼复合丙泊酚在不同手术需求和不同年龄患者中的应用效果,为无肌松全身麻醉诱导及维持提供依据.
目的:探讨Sirtuins(Sirt)蛋白家族在双酚A(BPA)诱导的雄性生殖系统损伤细胞和动物模型中的作用,阐明其对BPA诱导的雄性生殖系统损伤的影响.方法:40只昆明种小鼠随机分为对照组、低剂量BPA组(给予3 mg·kg-1·d-1 BPA)、中剂量BPA组(给予30 mg·kg-1·d-1 BPA)和高剂量BPA组(给予 300 mg·kg-1·d-1 BPA),每组 10只.低、中和高剂量BPA组小鼠采用玉米油(0.01 mL·g-1)配成相应浓度BPA灌胃,对照组小鼠给予0.01 mL·g-1玉米油.5周后,检测各组小鼠体质量、睾丸指数和附睾指数,计算机辅助精液分析(CASA)系统检测各组小鼠精子质量,HE染色观察各组小鼠睾丸组织形态表现,Western blotting法检测各组小鼠睾丸组织中Sirt1～Sirt7蛋白表达水平.小鼠GC-2细胞分为0、20、40和80 µmol·L-1 BPA组(给予0、20、40和80 µmol·L-1 BPA处理),EdU荧光染色法检测各组GC-2细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期各组GC-2细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组GC-2 细胞中Sirt1～Sirt7 蛋白表达水平.结果:与对照组比较,高剂量BPA组小鼠的睾丸指数降低(P<0.05);与对照组比较,中和高剂量BPA组小鼠不动精子百分率升高(P<0.01),快速前向运动精子百分率降低(P<0.01),中速前向运动精子百分率降低(P<0.05),高剂量BPA组小鼠精子畸形率升高(P<0.01).HE染色,各剂量BPA组小鼠曲细精管内各级生精细胞呈现数量减少且排列疏松的趋势.与对照组比较,低剂量BPA组小鼠睾丸组织中 Sirt6蛋白表达水平降低(P<0.01),中剂量BPA组小鼠睾丸组织中Sirt1、Sirt2和Sirt6蛋白表达水平降低(P<0.01),高剂量BPA组小鼠睾丸组织中Sirt1、Sirt2、Sirt3、Sirt4、Sirt5、Sirt6和Sirt7蛋白表达水平降低(P<0.05或 P<0.01).EdU染色法,与0 µmol·L-1 BPA组比较,20、40和80 µmol·L-1 BPA组细胞增殖率降低(P<0.01).流式细胞术,作用48 h后,与0 µmol·L-1 BPA组比较,20、40和 80 µmol·L-1 BPA组GC-2细胞凋亡率升高(P<0.01).Western blotting法,作用 24 h后,与0 µmol·L-1 BPA组比较,20 µmol·L-1 BPA组小鼠GC-2细胞中 Sirt4 和 Sirt7 蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),80 µmol·L-1 BPA组小鼠GC-2细胞中Sirt4和Sirt7蛋白表达水平降低(P<0.05或 P<0.01).作用 48 h后,与 0 µmol·L-1 BPA组比较,20 µmol·L-1 BPA组小鼠GC-2细胞中Sirt2、Sirt3、Sirt4 和Sirt6蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),40 µmol·L-1 BPA组小鼠GC-2细胞中Sirt1、Sirt2、Sirt3、Sirt4和Sirt6蛋白表达水平降低(P<0.05或 P<0.01),80 µmol·L-1 BPA组小鼠GC-2 细胞中Sirt1、Sirt2、Sirt3、Sirt4、Sirt 5 和 Sirt6 蛋白表达水平降低(P<0.05 或 P<0.01).结论:BPA诱导的雄性生殖损伤细胞和动物模型中Sirt1～Sirt7蛋白表达水平降低,加重了BPA诱导的雄性生殖系统损伤.
目的:探讨人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变(DKL)大鼠肾脏损伤的保护作用,并阐明其作用机制.方法:通过高脂高能量饲料配以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法制备DKL大鼠模型.将30只SD成模大鼠随机分为模型组、低剂量(10 mg·kg-1)Rh2组和高剂量(20 mg·kg-1)Rh2组,每组10只,另选取10只SD大鼠作为正常对照组.检测各组大鼠体质量和肾脏质量,并计算肾指数,干预8周后全自动分析仪检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(UP)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠肾组织中Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)水平,Western blotting法检测各组大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3和Smad7蛋白表达水平.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),肾脏质量和肾指数明显升高(P<0.01),血清中Scr、BUN和 24 h UP水平均升高(P<0.01),肾组织中Col Ⅳ水平升高(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平升高(P<0.01),而肾组织中Smad7蛋白表达水平降低(P<0.01).与模型组比较,低和高剂量Rh2组大鼠体质量升高(P<0.05或P<0.01),肾脏质量和肾指数均降低(P<0.05或P<0.01),血清中Scr、BUN和24 h UP水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),肾组织中Col Ⅳ水平降低(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白表达水平降低(P<0.01),肾组织中Smad7蛋白表达水平升高(P<0.01).结论:人参皂苷Rh2可抑制DKL大鼠肾脏纤维化,改善肾功能,对DKL大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与Rh2调节TGF-β1/Smads信号通路表达有关.
