目的 探究miR-206-3p在缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞损伤中的作用及机制.方法 体外培养H9c2细胞,建立H/R损伤心肌细胞模型,将细胞分为对照组(Control),H/R模型组,H/R+miRNA 阴性对照组(H/R+miR-NC),H/R+miR-206-3p模拟物组(H/R+miR-206-3p mimics),H/R+miR-206-3p模拟物组+pcDNA 阴性对照组(H/R+miR-206-3p mimics+pcDNA3.1)和H/R+miR-206-3p模拟物组+PDCD4过表达组(H/R+miR-206-3p mimics+pcDNA3.1-PDCD4),实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-206-3p和PDCD4的相对表达水平,Western blot检测各组细胞中PDCD4蛋白表达,Targetscan和双荧光素酶实验分析PDCD4与miR-206-3p的靶向关系,MTT法检测各组细胞活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡.结果 与对照组相比,H/R组miR-206-3p表达降低,PDCD4表达升高(P＜0.05);与miR-NC组相比,miR-206-3p模拟物组中miR-206-3p表达升高,PDCD4表达降低(P＜0.05).Targetscan网站分析及双荧光素酶实验证实PDCD4为miR-206-3p的靶基因.相比miR-NC组,miR-206-3p模拟物组细胞活力升高,凋亡率下降;相比miR-206-3p mimics+pcDNA3.1组,PDCD4过表达组细胞活力下降,凋亡率升高.结论 过表达miR-206-3p可以靶向负调控PDCD4在缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤中发挥保护作用.
目的 探讨miR-99a-5p靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响.方法 CCK-8法检测miR-99a-5p对DU-145细胞增殖的影响;miR-99a-5p mimics转染前列腺癌DU-145细胞,通过实时定量PCR检测miR-99a-5p和mTOR mRNA表达,Western blot检测miR-99a-5p过表达后DU-145细胞mTOR蛋白的表达;通过生物信息学网站预测mTOR是否为miR-99a-5p潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证,CCK-8和肿瘤异种移植裸鼠模型验证miR-99a-5p通过靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响.结果 转染miR-99a-5p mimics抑制DU-145细胞体外增殖活性,降低mTOR mRNA和蛋白的表达,miR-99a-5p结合mTOR mRNA3'UTR区域,且miR-99a-5p通过靶向mTOR抑制前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长.结论 miR-99a-5p通过靶向调控mTOR抑制前列腺癌细胞的增殖及肿瘤生长.
目的 探讨miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及可能机制.方法 qRT-PCR方法检测人结肠癌细胞株SW480与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中miR-27a的表达水平.体外培养SW480细胞,将SW480细胞随机分为空白对照组(不进行任何处理)、miR-27a抑制剂组(转染miR-27a inhibitor)与阴性对照组(转染miR-27a inhibitor NC),采用脂质体法进行转染,实时荧光定量PCR方法验证转染效率.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SW480细胞增殖;Transwell实验检测SW480细胞侵袭与迁移;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot法检测转染后叉头框蛋白O1(FOXO1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、泛素连接酶FBW7的表达.结果 miR-27a在SW480细胞中的表达水平显著高于NCM460细胞(P＜0.01).转染miR-27a抑制剂后,SW480细胞中miR-27a的表达水平明显降低,转染成功.抑制miR-27a表达后,SW480细胞的增殖、迁移与侵袭能力显著降低,凋亡率显著升高,FOXO1、TIMP-2、泛素连接酶FBW7的表达明显升高(P＜0.01).结论 下调miR-27a能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并诱导凋亡.
目的 探究远隔缺血后适应介导线粒体膜电位调控脑缺血/再灌注损伤大鼠炎性损伤的作用机制.方法 30只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组及远隔缺血后适应组,每组10只,建立脑缺血/再灌注损伤大鼠模型,即刻进行3个循环远隔缺血后适应.采用Longa评分法评价各组大鼠神经功能障碍评分;HE染色观察各组大鼠脑组织病理学形态变化;TUNEL检测神经细胞凋亡指数;JC-1法测定线粒体膜电位;ELISA试剂盒测定大鼠缺血区脑组织IL-1 β、IL-18表达;Western blot检测缺血区脑组织中NLRP3、Caspase-1、ASC及GSDMD蛋白表达.结果 远隔缺血后适应干预后大鼠神经功能障碍评分明显降低,缺血侧脑组织损伤明显减轻,细胞凋亡指数明显降低,线粒体膜电位水平明显升高,缺血区脑组织IL-1β、IL-18水平、NLRP3、Caspase-1、ASC及GSDMD蛋白水平明显降低.结论 远隔缺血后适应改善大鼠脑缺血/再灌注炎性损伤可能与调控线粒体膜电位有关.
目的 探讨脐血间充质干细胞对同基因和异基因来源的T淋巴细胞亚群数量的影响.方法 取新生儿脐血,体外培养间充质干细胞和T淋巴细胞,间充质干细胞和同基因及异基因T淋巴细胞共培养,流式细胞仪分析其亚群细胞的数量变化.结果 与间充质干细胞共培养的T淋巴细胞中CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞及CD4+CD25+调节性T细胞的数量均增多,且异基因来源的CD3+CD4+T淋巴细胞的数量与同基因来源的CD3+CD4+T淋巴细胞的数量相比,数量增多更显著(P＜0.05).结论 脐血间充质干细胞可以促进同基因和异基因T淋巴细胞的增殖,为间充质干细胞应用于临床疾病的治疗提供了数据支持.
