目的 用聚乙二醇(PEG 6000)沉淀法提取人脐带间充质干细胞源外泌体(hUCMSCs-exo);观察hUCMSCs-exo对低氧诱导的PASMCs增殖的抑制作用.方法 培养人脐带间充质干细胞并鉴定.低速离心提取脐带间充质干细胞培养上清液的 hUCMSCs-exo.用透射电子显微镜观察hUCMSCs-exo形态,用考马斯亮蓝及BCA试剂盒检测hUCMSCs-exo蛋白质含量,用Western Blot法检测hUCMSCs-exo 表面标记物CD63/Alix/TSG101 蛋白的表达水平,用激光共聚焦显微镜观察PASMCs摄取hUCMSCs-exo情况,用EdU法检测hUCMSCs-exo对低氧诱导的大鼠PASMCs增殖的影响,用Western Blot法检测PASMCs核增殖抗原(PCNA)蛋白表达水平,用cck-8 法测定用不同浓度hUCMSCs-exo干预低氧诱导后PASMCs的细胞吸光度值.结果 通过低速离心成功分离出hUCMSCs-exo.透射电镜下的hUCMSCs-exo为圆形或椭圆形.考马斯亮蓝结果显示,hUCMSCs-exo蛋白条带表达清晰.BCA定量结果显示,PEG 6000 溶液浓度为 10%时提取的hUCMSCs-exo浓度最高.用激光共聚焦显微镜观察到,用PKH26 标记的hUCMSCs-exo能被PASMCs内化.EdU与Western Blot结果显示,hUCMSCs-exo 可以抑制 PASMCs 增殖,P<0.05.cck-8 结果显示,hUCMSCs-exo 抑制PASMCs增殖,且当hUCMSCs-exo浓度达 80 μg·mL-1 时的细胞吸光度值明显降低,P<0.05.结论 PEG 6000 沉淀法提取的hUCMSCs-exo可抑制低氧诱导的大鼠PASMCs增殖.
目的 分析青海玛多地区(海拔4300 m)藏族肥胖儿童与正常体质量儿童粪便代谢组分是否不同;差异代谢物组成及相关代谢途径.方法 用液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术的非靶向代谢组学方法进行代谢物鉴定,所得数据与数据库进行比对.使用SIMCA14.1 软件进行主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),通过OPLS-DA模型筛选出变量重要性投影(VIP)值>1 的差异代谢物,用MetaboAnalyst 5.0 软件进行单因素t检验筛选出两组间的差异代谢物,并计算代谢物在两组间的差异倍数(fold change,FC).最终用VIP、FC、P三个参数的交集确定差异代谢物;通过KEGG数据库对差异代谢物进行通路富集分析.结果 (1)通过PCA、OPLS-DA分析法,在整体水平上对代谢物的组间差异进行可视化分析,各组样本代谢物在组内的分布是均匀的,在组间的分布存在差异;(2)在正离子模式下筛选出差异代谢物20 个(5 个上调,15个下调),在负离子模式下筛选出差异代谢物14 个(11 个上调,3 个下调);(3)叶酸依赖性碳池代谢,柠檬酸循环代谢,乙醛酸和二羧酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路显著富集(P<0.05),主要富集的差异代谢物是柠檬酸、α-酮戊二酸.结论 (1)青海玛多地区藏族肥胖儿童粪便代谢组分存在差异;(2)大多数差异代谢物以脂质分子为主;(3)可能通过影响柠檬酸循环代谢,乙醛酸、二羧酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸代谢途径影响机体的能量代谢.
目的 研究不同浓度L-谷氨酸钠对盐单胞菌XH26 胞内四氢嘧啶(Ectoine)的合成影响,并利用基因组测序法分析L-谷氨酸钠代谢途径与Ectoine生物合成通路的关联性,明确相关代谢基因的参与情况,为后续Ectoine的高效生产和系统代谢工程菌株改造提供理论支持.方法 设置不同浓度梯度的L-谷氨酸钠培养菌株XH26,采用HPLC法检测胞内Ectoine的合成量.利用PacBio平台完成全基因组测序,基于KEGG数据库整合分析谷氨酸代谢与Ectoine合成途径的关联基因,并利用荧光qRT-PCR法进行关联基因的表达量验证.结果 L-谷氨酸钠浓度从 15 mM升至30 mM时,主要参与基因davT(4-氨基丁酸转氨酶)、gdhA(谷氨酸脱氢酶)、lysC(天冬氨酸激酶)的相对表达量显著上调.菌株XH26 隶属于盐单胞菌科坎帕尼亚盐单胞菌(Halomonas cam-paniensis),菌株XH26 基因组大小为4.11 Mb,编码基因为 3927 个.通过KEGG代谢通路富集分析显示:氨基酸代谢有277 个基因、碳水化合物代谢有 221 个基因参与.结论 30 mM的L-谷氨酸钠能有效提高胞内Ectoine的合成量.Ectoine的合成前体天冬氨酸半醛与天冬氨酸、三羧酸循环代谢中间物、琥珀酸半缩醛、谷氨酸以及谷氨酰胺代谢密切关联.
目的 基于响应面法对四氢嘧啶羟化酶(ectoine hydroxylase,EctD)催化反应体系进行优化,以四氢嘧啶(Ectoine,Ect)为底物,以温度、酸碱度和Ect、EctD浓度为影响因素,利用Box-Benhnken实验法研究各因素及其交互作用对EctD体外催化反应效率的影响,以期获得EctD体外催化合成5-羟基四氢嘧啶(5-Hydroxyectoine,5-HE)的最优条件.方法 分别以Ect浓度、温度和酸碱度为自变量,在1 mM Fe2+、10 mM α-酮戊二酸(α-ketoglutarate)和10 mM TES缓冲液及EctD液组成的反应体系中反应25 min后,利用高效液相色谱仪(HPLC)检测5-HE的合成量,得到各单因素对酶催化反应的影响情况,并利用SPSS 22.0 软件对数据进行统计分析;以单因素实验结果为基础,选择X1(温度)、X2(酸碱度)、X3(Ect浓度)、X4(EctD浓度)为影响因素,以5-HE合成量为响应值,设计4 因素3 水平响应面Box-Benhnken实验29 组,每组实验重复3 次,其数据以平均值±标准差表示,并用Design-Expert 12.0 软件进行统计分析.结果 单因素实验结果显示,EctD在体外催化5-HE的合成量随着酸碱度和温度的增加呈现先升高后降低趋势,当酸碱度为 7、温度为35℃时5-HE合成量达到最高值;而Ect浓度在1.25～1.5 mM时,5-HE的合成量无明显变化,说明此时底物Ect与酶催化中心的结合达到饱和.通过Box-Benhnken实验得到的回归方程及结果的方差分析表明,该模型的F为9.41,P<0.0001,失拟项P为0.0634,说明回归方程可信.回归方程一次项系数绝对值的大小依次为X4(EctD浓度)>X3(Ect浓度)>X1(温度)>X2(酸碱度),说明X4(EctD浓度)是影响EctD催化合成 5-HE的显著因素,而X2(酸碱度)对其影响较小.与此同时,X1(温度)与X4(EctD浓度)的交互作用对酶催化反应也具有显著影响.结论 EctD体外催化合成5-HE的最优反应条件:温度为 35℃、pH为 7、Ect浓度为 1 mM、EctD浓度为 0.6 U/mL、Fe2+浓度为1 mM、α-ketoglutarate浓度为10 mM.温度是影响酶催化的主要外界因素.
目的 探究不同浓度1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对高原肺水肿(High al-titude pulmonary edema,HAPE)雄性大鼠的防治作用及可能机制.方法 将 105 只雄性SD大鼠随机分为对照组、低氧组和5 个不同浓度组(低氧+浓度A-E组).不同浓度组大鼠每天灌胃[应用1,25-(OH)2D3)]一次,5 天后,低氧组和5 个浓度组均置于模拟海拔6000 m的低压舱 48 h,检测大鼠血气指标氧饱和度(Oxygen Saturation,SaO2)、氧分压(Partial pressure of oxygen,PaO2)及肺动脉压(Pulmonary artery pressure,PAP)后处死大鼠,测定肺组织干湿重比,通过HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化,用ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)活性含量,用RT-PCR法测定大鼠肺组织中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞色素1β(IL-1β)、白细胞色素6(IL-6)和CYP27B1、VDR mRNA水平,用蛋白质免疫印迹实验(Western Blot)法检测CYP27B1、VDR蛋白水平.结果 1,25-(OH)2D3 降低HAPE 大鼠PAP、LWC,提高SaO2 及PaO2,降低肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P<0.05),升高SOD、GSH-Px酶活性(P<0.05),降低MDA含量,上调VDR蛋白水平,下调CYP27B1 水平,可减轻肺水肿程度.预防性给予1,25-(OH)2D3(浓度0.252 μg/kg)能够有效预防HAPE的发生.结论 初步明确了浓度为0.252 μg/kg(浓度D组)的1,25-(OH)2D3 对雄性大鼠有较好的防治HAPE的效果;这种预防及保护作用可能与1,25-(OH)2D3 下调CYP27B1、上调VDR表达有关.
目的 利用网络药理学方法和分子对接技术,探究六君二陈解毒汤治疗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的潜在作用机制.方法 基于网络药理学方法检索TCMSP数据库收集六君二陈解毒汤的药物活性成分,并预测其作用靶点;检索 GenCards、OMIM、PharmGKB数据库获得NSCLC疾病靶点;使用Venny(2.1)在线工具获得药物活性成分与疾病的交集靶点后,通过STRING数据库构建蛋白互作图并做拓扑学分析;使用Cytoscape Version(3.9.2)软件的MCODE插件对核心靶点进行聚类分析;使用DAVID数据库对核心靶点进行GO生物功能和KEGG通路富集分析;运用Kaplan-Meier Plotter数据库对核心靶点进行生存分析.基于分子对接技术使用AutoDock(1.5.6)软件对网络药理学预测结果进行分子对接验证.结果 基于网络药理学方法得到六君二陈解毒汤的主要活性成分198 个、潜在作用靶点968 个;检索疾病数据库收集筛选得到NSCLC靶点1093 个,取交集后得到NSCLC治疗靶点 12 个.蛋白互作图和拓扑学分析结果显示,EGFR、CAV1、PTEN等10 个靶点可能是六君二陈解毒汤治疗NSCLC的核心靶点.聚类分析得到1 个具有相似功能的子簇,涉及PARK2、MCL1、EGFR等 8 个核心靶点.GO 生物功能和KEGG通路富集分析表明,六君二陈解毒汤通过影响癌症信号通路和FAK、PI3K-act等信号通路发挥作用.生存分析结果显示,EGFR、CAV1、PTEN、MCL1、MET、RASA1、VCAM1 核心靶点的表达与NSCLC患者总生存率有关.基于分子对接技术得到六君二陈解毒汤活性成分中β-谷甾醇与核心靶点MCL1 有较好的结合能力,其结合能为-4.33 kJ/mol.结论 基于网络药理学方法预测出六君二陈解毒汤主要通过槲皮素、β-谷甾醇、木犀草素等药物活性成分作用于EGFR、CAV1、MCL1 等核心靶点发挥治疗作用;通过分子对接技术证明,活性成分β-谷甾醇与核心靶点MCL1 密切相关.
目的 探讨藏药二十五味鬼臼丸对雌性去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢平衡的影响.方法 将48 只 3 月龄SD雌性大鼠随机分为OVX、Sham、E2、GJW组.用ELISA 法检测血清OC、TRAP5b、Ca、E2、LH含量,以TRAP法将股骨远端干骺端染色,通过三点弯曲实验获得骨生物力学相关数据,用扫描电镜观察股骨远端松质骨超微结构.结果 与 Sham 组比较,OVX 组大鼠TRAP5b、LH升高(P<0.05,P<0.05),OC、Ca、E2 水平降低(P<0.05,P<0.05,P<0.05);破骨细胞数明显上升(P<0.05);骨超微结构破坏明显,骨最大载荷、最大位移明显下降(P<0.05,P<0.05).与OVX组比较,GJW组和E2 组TRAP5b、LH水平下降(P<0.05,P<0.05),OC、Ca、E2 水平升高(P<0.05,P<0.05,P<0.05);破骨细胞数明显减少(P<0.05,P<0.05);骨最大载荷、最大位移明显上升(P<0.05,P<0.05);骨胶原纤维走向趋于整齐.结论 藏药二十五味鬼臼丸具有雌激素样作用,对雌性去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢平衡产生影响:可有效改善雌性去卵巢骨质疏松大鼠骨质疏松症的骨代谢和血清指标及骨微结构,抑制破骨细胞形成,显著提高PMOP 大鼠股骨最大载荷及最大位移.
目的 探讨应用不同血红蛋白(Hb)标准对高原地区孕晚期妇女贫血诊断的影响.方法 测定居住在海拔2200 米和4000 米地区、妊娠>28 周的孕妇Hb;评估应用不同Hb标准对高原地区孕晚期妇女贫血诊断的影响.结果 采用现用国家标准作为贫血诊断标准(Hb<110 g/L),2200 米地区的孕晚期妇女检出率为19.77%;4000 米地区检出率为 26.63%,轻度贫血多见.以国际卫生组织(WHO)海拔矫正后标准作为贫血诊断标准,2200 米地区以Hb<120 g/L为贫血诊断标准检出率为47.81%;4000 米地区以Hb<145 g/L为贫血诊断标准检出率为 92.39%,中度及以上贫血多见.结论 现用国家标准会导致高原地区孕晚期妇女贫血患者漏诊,WHO海拔矫正后标准是否适宜高海拔地区孕晚期妇女相关诊断还有待商榷.
目的 利用网络药理学和实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)法研究鬼臼毒素对胃癌的作用机制.方法 利用TCMSP、Pubchem、Swiss Target Prediction、Similarity ensemble approach、Pharmapper数据库预测鬼臼毒素作用于胃癌的潜在靶标,通过蛋白互作网络和富集分析法找到关键节点和作用的主要通路,并采用qRT-PCR实验验证潜在靶基因.结果 通过查询多个数据库筛选获得 15 个胃癌特征基因(可能为鬼臼毒素的潜在靶标).PPI网络图谱进一步显示,15 个基因所对应的蛋白是鬼臼毒素作用于胃癌的关键靶标.通过GO富集分析和KEGG通路富集分析确定PI3K/AKT通路为主要作用通路.通过qRT-PCR验证发现,鬼臼毒素可以抑制与 PI3K/AKT 信号通路相关基因(CCND1、TP53、MET、RELA、EGFR、BCL2L1、IGF1R)的表达.结论 鬼臼毒素可能通过PI3K/AKT信号通路发挥抗胃癌细胞生长的作用.
目的 研究HSP90β对人骨肉瘤MG63 细胞干性特征的影响及其相关分子机制.方法 将骨肉瘤MG63 细胞进行慢病毒转染并分为四组:过表达HSP90β组(HSP90β-pEZ)、过表达对照组(NEG-pEZ)、沉默HSP90β组(HSP90β-shRNA)以及沉默对照组(NEG-shRNA).用West-ern Blot法测定HSP90β蛋白以及SOX2、OCT4 干性蛋白的表达水平,AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR等AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平;用细胞迁移实验(Transwell)法测定HSP90β对骨肉瘤MG63 细胞迁移和侵袭功能的影响;用甲基纤维素成球(Self-renewal assay)法测定HSP90β对骨肉瘤MG63 细胞自我更新的影响.并进行相关分子机制的研究.结果 与 NEG-pEZ 组相比,HSP90β-pEZ组的HSP90β蛋白及干性相关蛋白表达水平明显升高(P<0.05);HSP90β-pEZ组细胞自我更新、迁移及侵袭活力均增加(P<0.05).与NEG-shRNA 组相比,HSP90β-shRNA 组的HSP90β蛋白及干性相关蛋白表达水平显著降低(P<0.05);NEG-shRNA组自我更新、迁移及侵袭活力均减弱(P<0.05).与NEG-pEZ组相比,HSP90β-pEZ组p-AKT、p-mTOR等AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平明显升高(P<0.05);与 NEG-shRNA 组相比,HSP90β-shRNA 组、p-AKT、p-mTOR 等 AKT/mTOR 信号通路相关蛋白的表达水平明显降低(P<0.05).结论HSP90β基因可能通过激活AKT/mTOR信号通路促进人骨肉瘤MG63 细胞的自我更新、迁移及侵袭活力,并促进骨肉瘤细胞相关干性基因的表达.这也是HSP90β对人骨肉瘤MG63 细胞干性特征产生影响的分子影响机制.
目的 构建低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)雄性大鼠模型,了解低氧性肺动脉高压雄性大鼠肺组织中的p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白的表达特点.方法 将16 只SPF级雄性SD大鼠随机分为control组、hypoxic组,每组8 只.将hypoxic组大鼠置低压低氧舱(模拟海拔5 000 m)饲养、control组置舱外饲养(海拔 2 260 m),持续 28 d.使用右心导管术检测大鼠平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP),分离心脏并称重以计算RVHI;用HE染色法观察肺小动脉病理形态学变化,计算血管壁面积占血管总面积的百分比(WA%)、血管壁厚度占血管直径的百分比(WT%);用Western Blotting法检测肺组织p38、p-p38、IκBα、p-IκBα、p65、p-p65 蛋白的表达水平.结果 同control组比较,hypoxic组大鼠mPAP、RVHI升高(P<0.05),大鼠肺小动脉管壁明显增厚,管腔变窄,WA%、WT%升高(P<0.05);hypoxic组大鼠肺组织p-p38、p-IκBα、p-p65 蛋白的表达水平均升高(P<0.05),p-p38/p38、p-IκBα/IκBα、p-p65/p65 同样升高(P<0.05).结论 在低氧条件下,HPH 雄性大鼠肺组织中的 p-p38、p-IκBα、p-p65 蛋白表达水平均升高,p38 MAPK/NF-κB 信号通路被激活.
目的 借助网络药理学方法和实验验证方法探究余甘子抗三阴性乳腺癌(TNBC)的作用机制.方法 1.网络药理学方法:1)通过TCMSP 数据库分析余甘子活性成分,2)借助 Pharm Mapp数据库进行作用靶点垂钓,3)利用生物信息学方法筛选TNBC差异表达基因,4)进行GO生物功能和KEGG通路富集分析,5)运用STRING数据库进行蛋白质互作网络的构建,6)使用Kaplan-Meier Plotter工具对相关靶点作生存分析,2.实验验证方法:1)用CCK-8 法探究余甘子粗提物对MDA-MB-231 细胞生长的影响,2)以划痕实验探究余甘子粗提物对三阴性乳腺癌细胞迁移能力的影响.结果1.网络药理学方法结果:1)通过TCMSP 数据库获得余甘子有效活性成分 21 个,2)通过靶点垂钓分析得到作用靶点 115 个,3)通过TNBC差异基因分析发现 2 876 个基因表达发生显著变化,4)余甘子有29 个主要作用靶点影响孕酮受体、激素调节信号传导、乳腺细胞分化和中心体分离等通路,5)确定关键靶点为AURKA、PGR、AR、CCNA2、PPARG,6)AURKA、CCNA2 的低表达与PGR、AR、PPARG的高表达与患者生存预后呈正相关关系;2.实验验证方法结果:1)确定了余甘子粗提物IC50=6.1 μg·mL-1,2)余甘子粗提物显著抑制MDA-MB-231 细胞迁移.结论 1.网络药理学结论:1)确定了余甘子抗TNBC的 21 种主要活性成分,2)预测其关键靶点为AURKA、PGR、AR、CCNA2、PPARG;2.实验验证结论:余甘子粗提物能够明显抑制MDA-MB-231 细胞的生长和迁移.
Objective To explore the mechanism of chronic high altitude hypoxia-induced lung injury by non-targeted metabolomics.Methods 1.LC-MS/MS analysis was used to investigate the metabolic changes of lung tissue;2.PCA and OPLS-DA methods were used to identify differential metabolites;3.Marker identification and metabolic pathway analysis were performed by KEGG enrichment analysis.Results 1.2 489 peaks were extracted and 2 454 peaks were identified.2.PCA plot show that low levels of instrumental variation(i.e.,good reproducibility)are pres-ent across the study and 198 different metabolites were detected by OPLS-DA.3.KEGG analysis showed that these potential biomarkers mainly involved metabolic pathways such as purine metabolism,cysteine and methionine metabo-lism,pyruvate metabolism,amino sugar and nucleotide sugar metabolism.Conclusions 1.Metabolomics provides a pos-sibility for the identification of lung injury markers;2.These 198 metabolites might the potential markers of lung inju-ry;3.The study of untargeted metabolomics on lung injury caused by chronic altitude hypoxia in this study provides a new basis for the search for potential metabolic biomarkers of chronic altitude hypoxia lung injury.
目的 探讨藏药十八味诃子利尿丸对雄性糖尿病(Diabetes mellitus,DM)大鼠脑组织中小胶质细胞标记物离子钙结合衔接分子 1(Ionized calcium binding adaptor molecule 1,IBA1)及突触可塑性相关蛋白的影响.方法 30 只雄性SD大鼠适应性喂养 72 h后,取 10 只大鼠为对照组;另取 20 只制备DM大鼠,以高糖高脂饲料喂养 12 w后于尾静脉一次性注射STZ溶液,其中 10 只为模型组、10 只为藏药组(藏药组用十八味诃子利尿丸连续灌胃 2 w),实验结束后断头取脑组织.用Western Blot法检测IBA1、IL-6、syn-1、PSD95、HIF-1α,用IHC法检测IBA1、IL-6、HIF-1α.对实验结果进行相关统计学分析.结果 与对照组比较,模型组大鼠脑组织中的IBA1、IL-6、HIF-1α蛋白表达升高(P<0.05),syn-1、PSD95 蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,藏药组大鼠脑组织中的IBA1、IL-6、HIF-1α蛋白表达降低(P<0.05),syn-1、PSD95蛋白表达量升高(P<0.05).结论 藏药十八味诃子利尿丸可能通过IBA1 靶点降低DM大鼠脑组织中小胶质细胞的活化水平,并改善突触可塑性,从而对DM大鼠脑组织发挥保护作用.
半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)在焦亡中的作用是近期的研究热点.Caspase是在细胞焦亡过程中发挥重要作用的一个蛋白,不论是在经典还是非经典焦亡途径的信号通路中,Caspase都作为重要的中心环节发挥关键作用.研究显示,细胞焦亡在肝脏疾病、心血管疾病、免疫疾病和中枢神经系统疾病等多种疾病中起着至关重要的作用.
目的 研究黄香喷雾剂对紫外线损伤大鼠皮肤的保护作用.方法 将SD大鼠随机分为7 组:空白对照组、紫外线模型组、基质组、阳性药物组和黄香喷雾剂低、中、高剂量组,除空白对照组外,其余各组大鼠进行UV(UVA联合UVB)照射建立紫外线损伤模型,实验周期为 9 周,总照射强度:UVB为14.13 J/cm2,UVA为61.23 J/cm2.观察大鼠背部皮肤受损情况并进行评分;采用HE、Masson染色并用透射电镜观察大鼠皮肤组织病理变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠皮肤组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和透明质酸(HA)含量.结果 与空白对照组相比,紫外线模型组大鼠背部皮肤受损严重,有明显起皮和干裂现象,皮肤角质层角化过度伴角化不全,表皮层增厚,真皮层坏死,炎性细胞浸润,胶原纤维排列不规则,且真皮层成纤维细胞线粒体发生肿胀,粗面内质网见少量自噬现象,说明建模成功,经紫外线照射后大鼠皮肤组织中的SOD、GSH-Px、CAT及HA含量显著降低(P<0.05);与紫外线模型组相比,黄香喷雾剂低、中、高剂量组大鼠皮肤损伤程度有所减轻,皮肤角化明显,表皮层结构相对完整,真皮层被少量炎性细胞浸润,胶原纤维排列较整齐,成纤维细胞内的线粒体肿胀程度相对减轻,皮肤组织中的SOD、GSH-Px、CAT、HA含量显著升高(P<0.05).结论 黄香喷雾剂对紫外线照射所致大鼠皮肤损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与抗氧化有关.
目的 探讨Renalase在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)中的表达及其作用.方法 选取35 例DN患者、10 例因肾肿瘤行肾脏切除术患者,取非肿瘤区肾组织.应用免疫组织化学法检测肾脏局部Renalase表达情况.收集DN患者血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清Renalase水平;收集DN患者临床资料,计算肾小球滤过率(eGFR),并采用Pearson相关性分析法探讨DN患者血清Renalase水平与尿蛋白及肾功能的相关性.结果 与对照组相比,DN患者肾组织Renalase表达明显减少,DN患者血清Renalase水平与尿α1 微球蛋白(α1-M)、尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)及血清尿素氮(BUN)水平呈正相关,尿α1-M水平是血清Renalase水平的独立危险因素.进一步在糖尿病肾病小鼠模型尾静脉注射过表达Renalase腺病毒,收集小鼠 24 小时尿,应用ELISA法检测尿微量白蛋白及尿肌酐,计算尿ACR.在动物水平明确Renalase对蛋白尿的作用,结果显示,过表达Renalase可以明显减轻糖尿病小鼠尿蛋白水平.结论 DN患者肾脏Renalase表达明显减少,血清Renalase水平与尿蛋白相关,对糖尿病小鼠过表达Renalase可以明显减轻蛋白尿,提示Renalase可能与DN患者尿蛋白的发生发展相关.
目的 分析青海地区藏族、汉族毒性弥漫性甲状腺肿(Graves disease,GD)患者与健康者血清巨噬细胞移动抑制因子基因(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)rs755622、rs1007888、rs2096525 位点基因多态性,探讨其与青海藏族、汉族GD发病的关联性.方法 本研究设GD组(汉族60 例,藏族60 例)、对照组(汉族 60 例,藏族 60 例),应用SNaPshot法测定MIF基因多态性.结果 藏族、汉族GD组及对照组均符合Hardy-Weinberg平衡检验,提示样本具有良好群体代表性.藏族GD组、藏族对照组、汉族GD组、汉族对照组四组MIF-rs755622 位点基因型(GG、GC、CC)、rs1007888 位点基因型(GG、GA、AA)、rs2096525 位点基因型(TT、TC、CC)频率的差异均无统计学意义;各位点等位基因(G/C、G/A、T/C)差异均无统计学意义.结论 MIF-rs755622位点GC单核苷酸多态性、rs1007888 位点GA单核苷酸多态性、rs2096525 位点TC单核苷酸多态性均与青海地区藏族、汉族GD发病无关联,该基因不是青海地区藏族、汉族GD发病的易感候选基因.
目的 探讨西宁地区不同死因雄性大鼠玻璃体液(vitreous humor,VH)内镁离子(Mg2+)、磷离子(P3+)、尿素(Urea)、淀粉酶(AMS)、α 羟基丁酸脱氢酶(α-HBDH)的浓度变化与早期死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系.方法 将 105 只雄性大鼠随机分成 3 个大组(溺死组、勒死组、大失血死亡组),每个大组进一步按照死亡时间(0、3、6、9、12、18、24 h)分为7 个小组,每组 5 只,以每组死后 0 h组(死后即刻)作对照组.均置恒温恒湿培养箱(模拟西宁温、湿度:温度为 14℃,湿度为 55%).三个死因组于设定的时间点提取玻璃体液,用全自动生化分析检测仪检测Mg2+、P3+、Urea、AMS、α-HBDH浓度.使用SPSS19.0 统计软件对相关数据进行统计学分析.结果 Mg2+的浓度随着PMI的延长呈现先上升后下降趋势(P<0.05);勒死组和大失血死亡组P3+浓度随PMI延长呈现升高趋势,溺死组P3+浓度随PMI延长呈现先升高后下降趋势;Urea的浓度随PMI延长呈现先上升后下降的趋势(P<0.05);AMS的浓度随着PMI的延长呈现先升高后下降再升高再下降的趋势(P<0.05);α-HBDH的浓度随着PMI的延长呈现先升高后下降再升高的趋势(P<0.05).不同死因组同一PMI的Mg2+、P3+、Urea、AMS、α-HBDH浓度各不相同.溺死条件下的Mg2+的三次回归模型的r2 最大,回归方程:(y)=0.089+0.004x-0.001x2+ 2.936E-005x3;勒死条件下的 Mg2+的三次回归模型的 r2 最大,回归方程:(y) = 0.062+0.013x-0.001x2+2.410E-005x3;大失血死亡条件下的Urea的三次回归模型的r2 最大,回归方程:(y)=0.730-0.011x-0.002x2+6.613E-005x3.结论 1.在西宁地区,不同死因雄性大鼠玻璃体液内Mg2+、P3+、Urea、AMS、α-HBDH的浓度变化与早期PMI相关.2.雄性大鼠Mg2+、Urea的浓度随PMI延长呈先升高后下降趋势;α-HBDH浓度随PMI延长呈先升高后下降再升高趋势;溺死条件下的P3+浓度随PMI延长呈先升高后下降趋势,溺死和大失血死亡条件下的P3+浓度与PMI呈正相关;AMS浓度随PMI延长呈先升高后下降再升高再下降的趋势.3.Mg2+、P3+和Urea的三次回归方程更适合于推断溺死条件下的雄性大鼠PMI;AMS的三次回归方程更适合于推断大失血死亡条件下的雄性大鼠PMI;α-HBDH的三次回归方程更适合于推断溺死和勒死条件下的雄性大鼠PMI.
目的 在常氧及低氧条件下培养人滋养细胞株JEG-3 细胞,探讨在低氧环境下沉默内皮PAS蛋白1(EPAS1)对人滋养细胞株JEG-3 细胞增殖活性、侵袭行为、凋亡程度及细胞周期分布的影响.方法 通过转染小干扰RNA(siRNA)抑制JEG-3 细胞中EPAS1 的表达,将转染后的JEG-3 细胞分为4 组(常氧对照组、常氧抑制组、低氧对照组及低氧抑制组).在此基础上,根据处理时间分为48、72 h组.用CCK8 实验检测4 组细胞活力;用体外侵袭实验(transwell)检测 4 组细胞的侵袭能力;用流式细胞术检测不同处理条件对4 组细胞凋亡和细胞周期的影响.结果 (1)低氧及敲低HIF-2α的表达均可使JEG-3 细胞的增殖活性显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);经低氧处理72 h的JEG-3 细胞的增殖活性较48 h时的降低,差异有统计学意义(P<0.05).(2)低氧条件及敲低HIF-2α的表达均可使JEG-3 细胞的侵袭能力降低,差异有统计学意义(P<0.05).(3)低氧条件及敲低HIF-2α的表达均可使JEG-3 细胞的凋亡率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).(4)低氧条件及敲低HIF-2α的表达均可使JEG-3 细胞的G1 相细胞数量增加,表示细胞被阻滞在G1 期,差异有统计学意义(P<0.05).结论 在低氧环境下沉默EPAS1 使人滋养细胞株JEG-3 细胞增殖活性及侵袭能力降低、凋亡率增高且使JEG-3 细胞被阻滞在G1 期.由此推测,在低氧环境下沉默EPAS1 可影响滋养细胞生物学行为,以此参与子痫前期的发生.
