采用PCR技术检测分离自广西钦州、北海和防城港3市凡纳滨对虾样品中的67株副溶血弧菌(Vib-rio parahaemolyticus)3种毒力基因 tdh、trh和tlh的携带情况,并将 tlh基因进行原核表达,SDS -PAGE和Western blotting鉴定分析.结果显示,67株副溶血弧菌均未扩增出 tdh和 trh基因,而 tlh基因检出率为100 .0%,所检副溶血弧菌的毒力基因型为 tdh- trh- tlh+.成功构建了原核表达质粒pET -28a-tlh ,将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导表达,SDS -PAGE电泳检测得到大小约为53 kDa的产物,与预测值相符.经Western blotting鉴定,该重组表达产物能与抗6× His标签的单克隆抗体发生特异性反应.

[目的]检测广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌的耐药性和整合子—基因盒携带情况,为凡纳滨对虾副溶血弧菌病的防控及该菌耐药分子机制研究提供基础数据.[方法]呆用K-B纸片扩散法测定副溶血弧菌对16种抗菌药物的敏感性;采用PCR检测Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型整合子及Ⅰ型整合子可变区基因盒的携带情况,并分析菌株整合子—基因盒携带情况与耐药性的相关性.[结果]104株广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌对16种抗菌药物表现出不同程度的敏感性,其中,对氟苯尼考(FFC)的敏感性最高,敏感率达82.7％;对磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲嘧啶(SM2)和复方磺胺嘧啶(SD)的耐药性较强,耐药率达93.3％～100.0％.在2013-2018年,广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌共有20种耐药谱,其中优势耐药谱为SD/SM2/SMM/SMD/SXT/RAD.PCR扩增结果表明,Ⅰ型整合酶int1基因检出率为64.4％,sul1和qacEΔ1基因检出率分别为25.0％和27.9％.int1、sul1和qacEA1基因均为阳性的菌株检出率为22.1％.在int1、sul1和qacEΔ1基因均为阳性的菌株中,有6株检出携带基因盒,基因盒种类包括blaCTX-M-2-aadA1和bla VIM-60-aadA1-aacA.所有菌株均未检出Ⅱ和Ⅲ型整合酶基因.int1和qacEΔ1基因在广西北海市、钦州市和防城港市分离菌株中的检出率差异显著(P＜0.05,下同).int1阳性菌株对甲砜霉素(TAP)的耐药率显著大于int1阴性菌株,但其余抗菌药物的耐药表型与int1基因无显著相关性(P＞0.05,下同);头孢拉定(RAD)的耐药表型与blaCTX-M-2和bla VIM-60基因、新霉素(NEO)的耐药表型与aadA1和aacA基因、磺胺类的耐药表型与sul1基因均无显著相关性.[结论]广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌对氟苯尼考的敏感性最高,可考虑将该抗菌药物作为广西凡纳滨对虾副溶血弧菌病防治的备选药物.副溶血弧菌对大部分抗菌药物的耐药表型与int1基因间未检测到显著相关性、基因盒与相应抗菌药物的耐药表型间相关性也不显著,但Ⅰ型整合子的流行增加了广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌产生多重耐药的可能性,因此应加强对弧菌整合子—基因盒的监控.

[目的]对广西武宣县某养殖场患病黄沙鳖(Pelodiscus sinensis)进行病原菌分离鉴定及药敏试验,为防治黄沙鳖蜡样芽孢杆菌病提供参考依据.[方法]采用常规方法对患病黄沙鳖进行细菌分离,通过人工感染试验确定其致病性.采用API 50CH生化鉴定和16S rRNA序列分析进行细菌鉴定,并以K-B纸片扩散法及二倍稀释法进行药敏试验.[结果]从患病黄沙鳖肝脏中分离获得1株具有芽孢的革兰氏阳性杆菌GXWXAA,对健康黄沙鳖致死率达100.0％.经鉴定,菌株GXWXAA属于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),与蜡样芽孢杆菌JY5(HQ833024)、JY7(HQ833025)、JY9(HQ833026)和VBE16(MG027671)的亲缘关系最近,相似性均达99.9％.菌株GXWXAA对新霉素、恩诺沙星和多西环素等15种抗生素敏感,对头孢曲松、环丙沙星和依诺沙星中介,对青霉素G、氨苄青霉素、复达欣、复方新诺明和多粘菌素B耐药.新霉素、恩诺沙星和多西环素对菌株GXWXAA的最小抑菌浓度分别为0.488、0.122和0.244 üg/mL.[结论]引起广西武宣县某养殖场黄沙鳖发病的病原菌属于蜡样芽孢杆菌,建议选择新霉素、恩诺沙星和多西环素等抗生素对患病黄沙鳖进行治疗.

[目的]克隆黄沙鳖cathelicidin基因并分析其组织分布特征及在攻毒后的表达变化,为深入研究cathelicidin功能及在黄沙鳖先天免疫中的潜在作用提供基础数据.[方法]采用RT-PCR结合RACE克隆黄沙鳖cathelicidin基因cDNA全长序列,利用生物信息学分析软件对黄沙鳖cathelicidin基因及其推导氨基酸序列进行结构特征分析,并采用实时荧光定量PCR检测黄沙鳖cathelicidin基因在不同组织中的表达特征及攻毒后的表达变化.[结果]黄沙鳖catheli-cidin基因cDNA序列全长1026 bp(GenBank登录号MK250818),包括483 bp的开放阅读框(ORF)、315 bp的5'非编码区(5'UTR)和228 bp的3'非编码区(3'UTR).黄沙鳖cathelicidin基因cDNA序列编码160个氨基酸,包括氨基端的信号肽区域、含有4个保守半胱氨酸(Cys)残基的cathelin区域及羧基端的成熟肽区域.黄沙鳖cathelicidin基因推导氨基酸序列与中华鳖cathelicidin基因推导氨基酸序列(KY948708.1)的相似性最高,为97.5％;基于cathelicidin基因推导氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示黄沙鳖与中华鳖的亲缘关系最近.黄沙鳖cathelicidin基因在脾脏和肝脏中的相对表达量相对较高,其次是心脏,在脑组织、肾脏、肠道、肌肉、表皮和背甲的相对表达量较低.以温和气单胞菌攻毒后,黄沙鳖脾脏cathelicidin基因相对表达量呈升—降—升—降的波动变化趋势,出现2个峰值(攻毒后第3和36 h),对应的cathelicidin基因相对表达量分别是对照(注射等量无菌生理盐水)的23.1和3.5倍.[结论]黄沙鳖catheli-cidin基因在脾脏和肝脏中高表达量,且可被温和气单胞菌感染诱导,说明cathelicidin基因在黄沙鳖抵抗病原感染过程中发挥重要作用.

对虾肝肠胞虫 (EHP) 是一种分布范围较广、危害性较大的对虾寄生虫.在我国, EHP已造成一定的流行趋势, 严重影响我国对虾养殖业的可持续发展.本文从EHP的流行情况及宿主、致病机理、传播和感染机制等方面综述了与EHP致病性相关的研究进展, 为我国的EHP病害防控提供参考.

为查明副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)对广西凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的危害及耐药情况,用常规方法对凡纳滨对虾病样进行细菌分离,API 20NE和16S rRNA对病原菌进行鉴定,K-B纸片扩散法进行药敏试验.结果 显示,从160份发病凡纳滨对虾肝胰腺中共分离到67株副溶血弧菌,总检出率为41.88％.67株副溶血弧菌彼此之间高度同源,其相似度达99.2％ ～ 100％,与标准副溶血弧菌ATCC17802(GenBank登录号:NR114632.1)相似度为98.8％ ～100％.67株副溶血弧菌对28种试验抗生素中的氟苯尼考等12种药物表现出很强的敏感性,敏感率均在80％以上;对青霉素G等5种抗生素表现出很强的耐药性.