为给Ⅰ型犬腺病毒(CAV-Ⅰ)后续研究提供基础材料,采集疑似犬传染性肝炎患犬粪便,用PCR方法进行CAV-Ⅰ核酸检测,并运用犬肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离培养,采用PCR和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在细胞内的繁殖状态.结果显示:患犬粪便样品PCR检测为CAV-Ⅰ核酸阳性,病料接种MDCK细胞培养24h后出现明显的“葡萄串样”细胞病变效应(CPE);培养物血清学鉴定为CAV抗原阳性,不同代次病毒培养物均为CAV-Ⅰ核酸强阳性;第9代病毒核酸序列与GenBank中CAV-Ⅰ毒株核苷酸相似性在99.0％以上,与CAV-Ⅱ相似性仅为65.3％;该病毒与CAV-Ⅰ毒株处于同一遗传分支1;病毒接种MDCK后8h内均无抗原检出,12h后细胞核中分布大量的CAV抗原,24h后细胞出现典型的“葡萄串样”病变,抗原在细胞中呈弥散分布.上述结果表明,分离到的毒株为CAV-Ⅰ,命名为CAV-ZY 180711.

为克隆并分析湖南衡阳分离的犬瘟热病毒(CDV)HuN-HY171124毒株H基因,采用逆转录反应合成第一链cDNA,利用巢式PCR扩增H基因全长,将PCR产物纯化克隆至T载体中构建重组载体pMD19-T-CDV-HuN-HY171124-H,经序列测定,利用DNAStar和Mega等生物信息学软件进行序列分析.结果 显示,CDV HuN-HY171124毒株H基因开放阅读框(ORF)为1824 bp,编码607aa.相似性比对结果显示,该毒株与GenBank中58株分离毒株的核苷酸相似性在90.4％～98.8％之间,与弱毒疫苗毒株核苷酸的相似性均在90％左右,与我国分离的强毒株核苷酸的相似性均在98％左右.CDV HuN-HY171124毒株H蛋白第519氨基酸氨基酸为精氨酸、第549氨基酸氨基酸为酪氨酸,均为犬源CDV H蛋白特征性氨基酸.遗传进化分析发现该毒株与我国分离的大部分毒株均属于与我国分离的大部分毒株属于Asia 1型,与现有疫苗毒株不处同一个分支.CDV HuN-HY171124毒株是一株犬源CDV,其基因型属于Asia-1型,本研究扩充了CDV区域性流行病学基础数据.

运用实验室分子诊断技术对湖南岳阳某猪场一例疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染病例进行确诊,测定并分析其基因序列,为猪蓝耳病的防控提供依据.采集病猪淋巴组织提取RNA,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测病毒核酸,构建重组栽体,经序列测定,利用DNAStar等生物信息学软件进行序列分析.结果显示,RT-PCR产物大小为657 bp,同源性比较结果显示,此毒株ORF5基因核苷酸序列与与经典美洲型毒株VR-2332的同源性为83.4％,与我国经典毒株CH-1a株的同源性为85.4％,与高致病性代表株HUN4和JXA1的同源性分别为84.5％和84.3％,与欧洲经典型毒株LV的同源性为62.8％,与GDZS2016和GD/YJ/2014的同源性分别为95.0％和95.9％.遗传进化分析表明,此毒株属美洲型毒株;美洲型毒株下分两个亚群,以近年来新流行的GDZS2016和GD/YJ/2014毒株为代表的Ⅰ亚群和以HuN4、JXA1和VR-2332等为代表的Ⅱ亚群,此毒株与GDZS2016和GD/YJ/2014等同属Ⅰ亚群.结果表明,此次病例是由美洲型PRRSV毒株感染引起,将此毒株命名为HuNYY201805.