为构建一种能够用于开发猪细小病毒病毒样颗粒疫苗的猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒.根据GeneBank数据库中的猪细小病毒全基因组序列设计并合成了1对能扩增VP2基因的引物,采用PCR扩增猪细小病毒BJ-2株的VP2基因,并将其克隆到杆状病毒转移载体pFastBacH TA中,获得阳性质粒pFastBac-PPV VP2;测序后将该质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得含有VP2基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPV VP2;最后将获得的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPV VP2转染Sf9昆虫细胞,并成功拯救了能稳定表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒Bacmid-PPV VP2.结果发现,该重组病毒可用于稳定表达猪细小病毒VP2蛋白,并且表达的VP2蛋白可在体外自我组装形成病毒样颗粒,电镜观测其颗粒大小与猪细小病毒全病毒大小类似,且形成的病毒样颗粒与全病毒一样具有豚鼠红细胞凝集作用,凝集效价可达1:2048.故构建的表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒为研制猪细小病毒的基因工程亚单位疫苗奠定了基础.

为鉴定引起河南新乡某鹅场鹅痛风的病原,采集具有典型痛风症状和病变的肝脏、肾、肺和脾组织,对病料进行病原分离、PCR扩增、序列分析、电镜观察、动物回归试验和组织病理学观察.结果 显示:所分离的病原接种鹅胚后,9d内死亡率约75％;死亡鹅胚剖检显示胚体严重水肿、紫褐色充出血、尿囊膜沉积大量的尿酸盐.基因序列检测结果表明分离株与公布的2株鹅星状病毒同源性高达98.4％～99.0％;电镜观察结果显示病毒粒子有实心和空壳2种,无囊膜,直径大小20 nm左右.动物回归试验显示可复制典型的雏鹅痛风症状,攻毒后可引起雏鹅20.0％～26.7％的死亡率,并严重影响未死亡鹅的生长性能;死亡鹅剖检可见心、肝、肺、肾等内脏表面出现明显的尿酸盐沉着.研究表明分离的病原为鹅星状病毒.

[目的]开发和研制鉴别猪圆环病毒疫苗免疫和野毒感染的ELISA检测试剂盒.[方法]根据NCBI数据库录入的2型猪圆环病毒(porcine circovirus 2,PCV-2)REP蛋白序列(GenBank登录号为KX828581)设计引物,利用PCR扩增REP蛋白全长基,构建原核表达载体pET-28a-rep,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达.[结果]经过SDS-PAGE分析,获得了大小约40 ku的目的蛋白,与理论大小相一致.重组蛋白经镍柱纯化后重组蛋白浓度为40μg/mL,纯度约95％.Western Blot及ELISA鉴定结果显示,该重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性.[结论]鉴于该重组蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该重组蛋白可为开发区分猪圆环病毒2型疫苗免疫和野毒感染的检测试剂盒奠定基础.

从江苏省各市鹅场死亡的、具有小鹅瘟典型病变的雏鹅肝、脾、肠病料组织中分离到5株病毒分离物.经过实验鉴定,该5株病毒分离能与小鹅瘟阳性血清发生沉淀反应,并均能使用针对小鹅瘟病毒VP3基因特异性引物扩增出与目的条带大小一致的DNA片段.将PCR产物纯化、连接、转化、TA克隆等一系列实验后将获得阳性重组质粒送测序.另外,为了探究该病毒的遗传进化方向,本研究同时对鹅细小病毒VP3基因进行了系统进化分析.