为鉴定引起河南新乡某鹅场鹅痛风的病原,采集具有典型痛风症状和病变的肝脏、肾、肺和脾组织,对病料进行病原分离、PCR扩增、序列分析、电镜观察、动物回归试验和组织病理学观察.结果 显示:所分离的病原接种鹅胚后,9d内死亡率约75％;死亡鹅胚剖检显示胚体严重水肿、紫褐色充出血、尿囊膜沉积大量的尿酸盐.基因序列检测结果表明分离株与公布的2株鹅星状病毒同源性高达98.4％～99.0％;电镜观察结果显示病毒粒子有实心和空壳2种,无囊膜,直径大小20 nm左右.动物回归试验显示可复制典型的雏鹅痛风症状,攻毒后可引起雏鹅20.0％～26.7％的死亡率,并严重影响未死亡鹅的生长性能;死亡鹅剖检可见心、肝、肺、肾等内脏表面出现明显的尿酸盐沉着.研究表明分离的病原为鹅星状病毒.

旨在研究重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白在多联疫苗中的免疫效果.将50羽21日龄SPF鸡平均分为5组,分别用新流法(新城疫ND-禽流感H9-传染性法氏囊IBD)三联疫苗进行免疫,1组为非免疫对照组,2组免疫剂量0.05 mL,3组免疫剂量0.1 mL,4组免疫剂量0.2 mL,5组免疫剂量0.3.免疫后第21天采血,检测ND/H9血凝抑制抗体和IBD琼脂免疫扩散抗体.并用传染性法氏囊病毒强毒BC6/85株F1代点眼攻毒,攻毒剂量为每只0.1 mL,观察96 h后剖检.结果表明,免疫后21 d,第5组血清中ND/H9 HI抗体分别为8.1log 2和9.0log 2,IBD抗体4个试验组均显著高于对照组(P<0.05),5组显著高于2组.1组攻毒鸡全部发病,法氏囊外观发黄,呈胶冻样,囊内剖开有黏液,部分肉眼可见出血.1组未攻毒对照和免疫组,均未见异常,免疫攻毒保护率为100％.结果表明,重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白在三联疫苗中免疫剂量为每只0.05 mL,具有良好的免疫保护力,且不影响疫苗中其他抗原的免疫效果.

采用细胞培养和免疫荧光试验从河南某种鸡场已免疫马立克氏病疫苗的产蛋期发病肉种鸡中成功分离到一株马立克氏病病毒,命名为MDV/HeN15.用PCR方法对其pp38、meq和gB基因进行序列分析,与GenBank参考序列比较发现,分离株meq和pp38基因与Ⅰ型MDV毒株的同源性分别达到99.0％～99.8％和99.8％～100％,gB基因序列与参考株GX0101序列完全一致,基因上具有强毒特征.表明在免疫过疫苗的鸡群中仍然存在MDV强毒感染的风险.

为了建立起双抗体夹心ELISA定量测核衣壳蛋白(caspid protein,Cap)抗原方法,采用氯化铯密度梯度超速离心方法制备猪圆环病毒2型Cap蛋白标准品,制备出针对PCV2-Cap单克隆抗体及PCV2-Cap多克隆抗体,筛选最佳包被抗体和酶标抗体的稀释度,绘制标准曲线,验证方法,并应用该方法对不同转移载体构建的PCV2-Cap蛋白随时间变化的表达量进行测定.结果显示:最佳包被抗体和酶标抗体的稀释度均为1∶10 000,标准曲线的范围是15.6～250 ng/mL,线性相关系数≥0.99,准确性为(103.46±12.50)％,特异性良好;检测不同转移载体构建的Cap表达量随时间的变化,发现Cap含量接种后24h开始表达,72 h达到高峰,呈S形曲线增长模式.结果表明:已建立的双抗体夹心ELISA定量测Cap抗原方法灵敏度、精密性和准确性均符合研究要求.

将从临床采集的发病鸡组织处理后经绒尿膜接种7日龄SPF鸡胚,通过PCR方法对鸡胚培养物进行鉴定,分离到3株禽腺病毒.结合免疫学实验、病理学实验以及动物回归实验对病毒进行特性研究,结果表明分离的病毒均能致鸡死亡并表现出临床症状.使用针对Ⅰ群禽腺病毒Hexon基因的特异性引物对病毒进行基因测序分析发现,分离株均为禽腺病毒基因E型血清8b型.

The expression and immunogenicity of conserved domain of protein gD were researched for developing antibody detection kit of IBRV virus. Specific primers were designed for the amplification of the gene gD sequence with the immunoglobulin-like domain based on the full length gene gD sequence from bovine herpesvirus, type 1 (GenBank ID NO. NC_001847). The immunoglobulin-like domain gene of gD protein was inserted into plasmid pET-32a after PCR amplication, and was named as pET32a-ΔgD. The expression vector was then transferred into strain E. coli Rosseta (DE3) with aim to induce the recombinant protein. The result showed that 43000 recombinant proteins were obtained through the analysis of SDS-PAGE, and the relative molecular mass of them were accordance with the theoretical value of recombinant protein gD. After purified from nickel column, the concentration of them was 2.5 mg/mL, with the purity of about 95％. The recombinant proteins were proved of good immunogenicity after experienced the identification of Western Blot and Elisa, which indicated that they could be used as antigen for the development of antibody detection kit of IBR.

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)属于单股DNA病毒,种属圆环病毒科,其致病性较强,且致病机理非常复杂.PCV2很少单独感染,经常与其他病原发生共感染且临床表现大多十分显著.PCV2疫苗已经在很大程度上控制了猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)在北美和欧洲的发展[1].但该病仍在持续,造成全球性损害,特别是未经疫苗免疫的国家或地区. 猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)的病毒核酸为单股RNA且不分节段,种属动脉炎病毒科.该病可发生在各年龄阶段的猪群,其发病率和死亡率都非常高.母猪感染该病毒后可引起成年母猪繁殖障碍,而在仔猪身上主要表现为呼吸道疾病[2].

将从临床采集的发病鸡组织处理后经绒毛尿囊膜接种7日胚龄SPF鸡胚,通过PCR方法对鸡胚培养物进行鉴定,确定分离到4株Ⅰ群禽腺病毒.结合免疫学试验、病理学试验以及动物回归试验对病毒进行特性研究,结果表明分离的病毒均能致鸡死亡并表现出临床症状.使用针对Ⅰ群禽腺病毒Hexon基因的特异性引物对病毒进行基因测序分析发现,分离株均属于基因C型血清4型禽腺病毒.