目的 探讨延胡索总碱贴片的安全性及其对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其机制.方法 ①安全性实验:采用单次、多次给药的皮肤刺激性实验及皮肤过敏性实验,评价延胡索总碱贴片的安全性.②镇痛实验:取48 只雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、布洛芬组、双氯芬酸钠贴片组及延胡索总碱贴片高、中、低剂量组,每组 6 只.除正常组和假手术组外,其余组大鼠采用坐骨神经慢性压迫损伤方法诱导神经病理性疼痛模型,术后第8 天开始,布洛芬组灌胃给药,双氯芬酸钠贴片组及延胡索总碱贴片高、中、低剂量组分别给予双氯芬酸钠贴片及延胡索总碱贴片腹部贴敷,其余组腹部贴敷空白贴片,均每天1 次,连续14 d.分别于术前及干预后1,3,7,10,14 d测定各组大鼠热缩足反射潜伏期;采用Western blot法检测各组大鼠干预结束后脊髓中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、信号传导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达情况.结果 ①给予延胡索总碱贴片后,皮肤刺激反应评分均小于0.5 分,致敏率为0,组织结构与正常皮肤无差异.②镇痛实验中,延胡索总碱贴片中、高剂量组干预后3 d和延胡索总碱贴片各剂量组干预后7,10,14 d患侧的热缩足反射潜伏期均明显长于同期模型组(P均<0.05);干预结束后,延胡索总碱贴片各剂量组大鼠脊髓中 TLR4、NF-κB、p38MAPK蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),STAT3 蛋白相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05).结论 延胡索总碱贴片安全性良好,可抑制慢性坐骨神经挤压损伤神经病理性疼痛大鼠痛觉敏感,其机制可能与抑制脊髓中TLR4、NF-κB、p38MAPK表达并上调STAT3 的表达有关.

Objective To investigate the effects of the extracts from Semen Euphorbiae before and after frosting on the toll-like receptor 4 （TLR4）/nuclear factor kappa-B （NF-κB）/nod-like receptor family pyrin domain containing 3 （NLRP3） signaling pathway. Methods According to the body weight， 42 BALB/c mice were randomly divided into a blank control group， Semen Euphorbiae low-， medium-， and high-dose groups （10.49， 20.98， and 41.96 g/kg， respectively） and Semen Euphorbiae Pulveratum low-， medium-， and high-dose groups （10.49， 20.98， and 41.96 g/kg， respectively）， with six rats per group. Mice received continuous gavage for 7 d. The contents of interleukin-1β （IL-1β） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in serum of mice were determined by enzyme linked immune sorbent assay. The protein and the mRNA expression of TLR4， NF-κB p65， and NLRP3 in colon tissues of mice were detected by Western blotting and real-time PCR. According to the body weight， 30 BALB/c mice were randomly divided into a blank control group， Semen Euphorbiae group， Semen Euphorbiae+TAK-242 group， Semen Euphorbiae Pulveratum group， and Semen Euphorbiae Pulveratum+ TAK-242 group， with six rats per group. The administration groups were respectively given 20.96 g/kg of Semen Euphorbiae or Semen Euphorbiae Pulveratum， and the continuous gavage was 7 d. The Semen Euphorbiae+TAK-242 group and Semen Euphorbiae Pulveratum+ TAK-242 group were intraperitoneally injected with TAK242 （3 mg/kg） 30 min before and on days 5， 6， and 7 of administration. The protein expression of NLRP3 and NF-κB p65， and the mRNA expression of NLRP3 and IL-1β in colon tissues of mice were assessed by Western blotting and real-time PCR. Results Semen Euphorbiae not only significantly promoted the release of IL-1β and TNF-α， but it also significantly increased the protein and the mRNA expression of TLR4， NF-κB p65 and NLRP3 （P ＜ 0.05， P ＜ 0.01）. However， upregulation of IL-1β and TNF-α secretion， and TLR4， NF-κB p65， NLRP3 protein， and mRNA expression were decreased by Semen Euphorbiae Pulveratum （P ＜ 0.05， P ＜ 0.01）. NLRP3 and NF-κB p65 protein expression and NLRP3 and IL-1β mRNA expression were inhibited after the intervention with the TLR4 inhibitor TAK-242 （P ＜ 0.01）. Conclusion Semen Euphorbiae could induce an inflammatory response of the colon tissue by activating the TLR4-mediated NF-κB/NLRP3 pathway， thus promoting the release of TNF-α and IL-1β. However， upregulation of the TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway and pro-inflammatory factor secretion were significantly alleviated by Semen Euphorbiae Pulveratum， indicating that the detoxification mechanism of Semen Euphorbiae frosting may be related to the decreased ability to cause inflammation and the intervention of TLR4/NF-κB/NLRP3 signaling pathway.

目的 运用网络药理学和分子对接探讨千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的潜在作用机制.方法 选取千金子中7种代表性二萜醇酯类成分为研究对象,综合运用SwissTargetPre-diction、SEA、OMIM、Gene Cards数据库筛选及预测千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的潜在靶点.通过STRING数据库和Cytoscape 3.7.2软件来建立PPI网络.使用DAVID数据库对筛选出的靶点进行基因本体(GO)生物学过程分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,并应用Cytoscape 3.7.2构建"成分-靶点-通路"网络,最后对千金子二萜醇酯类成分与关键靶蛋白进行分子对接验证.结果 7种千金子二萜醇酯类成分涉及252个作用靶点,筛选得到75个治疗白血病的潜在靶点,PPI核心网络表明治疗白血病的关键靶点为CDK1、CDK2、CCNA2,基因富集分析及"成分-靶点-通路"网络图显示千金子二萜醇酯类成分可能通过调节PI3 K-Akt、ErbB、p53等信号通路来发挥对白血病的治疗作用.结论 本研究表明千金子二萜醇酯类成分可能通过调节细胞凋亡、增殖分化、转录、细胞周期等多种途径来治疗白血病,诠释了中药通过多成分、多靶点、多途径治疗疾病的研究思路,为进一步深入研究千金子二萜醇酯类成分治疗白血病的作用机制提供了科学依据.

以千金子中3种主要的二萜醇酯类成分提取率的综合评分为评价指标,通过Box-Behnken响应面法结合熵权法对千金子二萜醇酯类成分的闪式提取工艺进行优化.确定最佳提取工艺为:料液比1:14(g:mL)、提取时间2.5 min、提取电压130 V,在此条件下,3种二萜醇酯类成分提取率的综合评分为0.370,与模拟预测值(0.396)接近.该闪式提取工艺设计合理,可为千金子主要二萜醇酯类成分的快速高效提取提供一定的参考.

目的:研究甘草炮制前后对免疫低下小鼠免疫调节作用的影响.方法:小鼠腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下模型,给予生甘草、清炒甘草、蜜炙甘草的提取液,检测免疫功能学评价指标,包括免疫器官指数、半数溶血值、溶血空斑数、脾淋巴细胞增值率、自然杀伤(NK)细胞杀伤率、耳肿胀度、碳廓清指数、腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数.结果:与对照组小鼠比较,模型组小鼠各检测指标明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组小鼠比较,各给药组(生甘草组、清炒甘草组、蜜炙甘草组)小鼠各检测指标均能增强.其中,仅蜜炙甘草组能明显增强各检测指标(P<0.05,P<0.01);与生甘草组小鼠相比,清炒甘草组能明显增强血清溶血素和抗体生成细胞、脾淋巴细胞增殖率和NK细胞活性(P<0.05,P<0.01),但对胸腺指数、脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、DTH、碳廓清功能无明显影响,蜜炙甘草组能明显增强除胸腺指数的各项评价指标(P<0.05,P<0.01),但对胸腺指数无明显影响.结论:甘草蜜炙前后对小鼠非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫功能均有促进作用,且蜜炙后作用更强,为蜜炙甘草机制研究提供参考.

目的 考察延胡索总碱的溶解度、油水分配系数等理化性质,研究促透剂及穴位、非穴位贴敷对其体外经皮渗透特性的影响,为指导其经皮给药剂型设计和制备提供参考.方法 建立酸性染料比色法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法对延胡索总碱、延胡索甲素、延胡索乙素及延胡索丑素的含量进行测定,应用饱和溶液法和经典摇瓶法检测延胡索总碱的溶解性及油水分配情况;采用Franz扩散池法考察大鼠神阙穴与非穴位皮肤体外经皮渗透性能.结果 结果显示,延胡索总碱纯度大于50％,其在10％乙醇的生理盐水中溶解性较好,可作为扩散池接收介质.当pH在5.5～7.2时,延胡索总碱的logP值控制在-1～0之间,说明延胡索总碱为强亲水性组分,延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丑素的logP值均在0～3之间,体外经皮渗透性良好,神阙穴用药组的24小时体外累积透过量和滞留量优于非穴位(P<0.05).结论 延胡索总碱具有适宜经皮渗透的理化性质及较好的经皮渗透性能,适宜制成经皮给药制剂,且经神阙穴用药具有一定优势,以上结果可为经皮给药剂型设计提供实验基础.

目的:比较千金子制霜前后提取物对正常人胚肾细胞HEK293的影响,探究千金子制霜减毒的作用机制.方法:采用HEK293细胞为体外模型,随机分为对照组,千金子生品低、中、高质量浓度(100、200、400μg·mL–1)组和千金子霜品低、中、高质量浓度(100、200、400μg·mL–1)组.细胞体外培养后,分别给予等体积的无血清培养液和千金子生品、霜品提取物溶液,各组均设置3个复孔.采用CCK-8法评价细胞存活率,利用倒置显微镜观察细胞数量及形态变化;碘化丙啶(PI)染色法和Annexin V-FITC/PI双重染色法检测细胞周期和凋亡情况;试剂盒法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)、肌酐(Cr)和细胞裂解液中尿素氮(BUN)水平.结果:与对照组比较,千金子生品各质量浓度组HEK293细胞存活率降低,细胞形态异常,细胞数量减少,G0/G1、G1/G2期细胞比例明显降低,S期细胞比例明显增加,细胞凋亡率升高(P<0.01),LDH、BUN、Cr水平升高(P<0.05,P<0.01),GSH水平降低(P<0.01);与千金子生品组比较,千金子霜品相应质量浓度可显著增加HEK293细胞存活率(P<0.01),改善细胞形态,增加G0/G1期、G1/G2期细胞比例,降低S期细胞比例,同时能明显降低LDH、BUN、Cr水平(P<0.05,P<0.01),提高GSH水平(P<0.01).结论:千金子制霜后可能通过减轻细胞周期阻滞和细胞氧化损伤改善肾细胞功能、减少细胞凋亡,从而降低体外肾毒性.

目的 结合层次分析法(AHP)-熵权法(EWA)对不同种类黄酒炮制的酒当归饮片进行质量综合评价研究,为其他中药饮片质量评价提供参考.方法 对比15批不同种类黄酒的理化性质,包括总糖、非糖固形物、总酸、氨基酸态氮、氧化钙含量、酒精度和pH值,并用其对当归进行炮制,以阿魏酸、多糖、醇溶浸出物、水溶浸出物、总灰分、酸不溶性灰分为评价指标,采用AHP-EWA建立酒当归质量的量化评价模型,并对黄酒理化性质与酒当归饮片质量综合评分进行相关性分析,探究不同种类黄酒对酒当归饮片质量的影响.结果 黄酒的总糖、酒精度与其炮制的酒当归饮片质量存在一定相关性.结论 黄酒的种类对酒当归饮片质量具有一定影响,采用AHP-EWA确定各指标的权重,提高了酒当归饮片评价结果的可靠性,可为酒当归饮片质量评价研究提供参考.

目的 研究不同地区、不同种类的15批大米理化性质、米炒党参粉末颜色值与米炒党参主要有效成分含量的相关性,探究不同大米对米炒党参饮片质量的影响.方法 测定大米理化性质,利用色度仪对不同米炒制的党参粉末颜色值进行测量,采用紫外可见分光光度计对党参多糖进行定量,HPLC法测定党参炔苷、5-羟甲基糠醛含量,并测定醇浸出物含量,采用AHP-熵权法结合多元相关分析评价不同大米炒制的党参饮片质量.结果 在相同的炮制条件下,不同大米炒制的党参饮片质量均符合《中国药典》2020年版要求,但饮片内在质量存在一定差异.相关性分析结果显示米炒党参样品中党参多糖含量与颜色值L*、a*、E*ab及大米的过氧化氢酶活动度、直链淀粉含量呈正相关,党参炔苷含量与大米过氧化氢酶活动度成正相关,醇浸出物含量与颜色值L*、a*、b*、E*ab及大米水分含量、直链淀粉含量均呈正相关.结论 不同地区、不同种类的大米对米炒党参饮片内在质量产生不同影响,米炒党参饮片主要有效成分含量与颜色值、大米理化性质有一定的相关性.

目的:基于UPLC-MS/MS技术,研究大鼠灌胃千金子生品、霜品提取物后千金子素L1、千金子素L2和千金子素L3的尿液及粪便的排泄动力学特征.方法:SD大鼠灌胃给予千金子生品、霜品提取物,收集不同时间段的尿液和粪便,采用建立的UPLC-MS/MS方法对千金子制霜前后3个二萜醇酯类成分的浓度进行测定,以DAS 2.0软件计算尿排泄动力学参数,绘制累积排泄率及排泄速率曲线,比较制霜前后的排泄动力学差异.结果:灌胃给药千金子提取物96 h后,千金子素L1 、L2和L3在尿液中的累积排泄率分别为0.009％、0.008％、0.009％,在粪便中的累积排泄率分别为16.05％、51.57％、36.33％;灌胃给药千金子霜提取物96 h后,千金子素L、L2和L3在尿液中的累积排泄率分别为0.014％、0.01％、0.011％,在粪便中的累积排泄率分别为27.32％、59.03％、35.97％.结论:千金子3个二萜醇酯类成分在体内主要通过粪便排泄,制霜后在尿液的半衰期t1/2减小,消除速率常数ke增大,其制霜后毒性减弱可能与药物从体内的排泄量增加、在体内蓄积减少有关.

目的:运用多信息G1-熵权组合赋权法优选醋当归饮片的炮制工艺.方法:采用L9(34)正交试验设计,以阿魏酸含量、醇浸出物含量、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)组成的综合评分为指标,采用G1-熵权组合赋权法计算各指标的权重系数,考察炒制温度、炒制时间、米醋用量和闷润时间对醋当归炮制工艺的影响,进而确定醋当归的最优炮制工艺参数.结果:G1-熵权组合赋权法确定PT、APTT、TT、阿魏酸和醇浸出物的权重系数分别为0.4517、0.2316、0.1306、0.1046、0.0816,醋当归的最佳炮制工艺为每100 g当归饮片加米醋15 mL,闷润1 h,150℃炒制20 min.结论:联合凝血功能指标证实优选的醋当归炮制工艺稳定可靠,可为醋制中药炮制工艺研究提供参考.