猪圆环病毒2d型(Porcine circovirus type 2d,PCV2d)是猪圆环病毒的一个主流亚型,是引起断奶仔猪(Sus scrofa)多系统衰竭综合征等猪免疫抑制相关疾病的重要病原,严重危害着我国养猪业的健康发展.目前报道的PCV2d中和表位均位于衣壳蛋白(capsid protein,Cap)上,Cap是产生中和抗体的关键蛋白,其中和抗体能够与病毒结合,从而阻止PCV2d的感染.本研究首先通过原核表达、纯化获得PCV2d Cap重组蛋白,并免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),筛选得到了2株鼠源抗PCV2d Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B3和1B4,其中1B3具有中和活性且不与其他病毒发生交叉反应.将1B3抗体可变区基因与猪源恒定区基因嵌合后克隆至真核表达载体中,利用中国仓鼠(Cricetulus griseus)卵巢CHO-S细胞制备1株PCV2d Cap蛋白重组猪源化嵌合抗体r1B3swine稳定表达细胞系.抗体功能验证和Western blot结果显示,r1B3swine与PCV2d病毒结合反应良好,并且不与抗鼠二抗发生交叉反应.综上所述,本研究构建的猪源化抗PCV2d Cap蛋白的单克隆抗体r1B3swine的真核表达体系,为研究PCV2d Cap蛋白的结构、功能及为PCV2研发新的治疗和诊断制剂提供物质基础.

[目的]旨在分析当前规模化养殖场副猪格拉菌(Glaesserellaparasuis)优势血清型、耐药特性、耐药基因与分子特征.[方法]对源自规模化养猪场21株副猪格拉菌临床分离株,采用PCR鉴定血清型;利用K-B纸片扩散法鉴定其对25种抗生素的耐药表型;采用PCR检测bla-TEM、bla-NDM和bla-cTx等7种耐药基因,并采用Chi-square test和Fisher exact test分析耐药表型和耐药基因型的相关性;耐药基因目的条带测序,并应用CLC Sequence Viewer软件分析β-内酰胺类耐药基因(bla-TEM)编码蛋白氨基酸关键位点差异与耐药性的关系.[结果]21株副猪格拉菌临床分离株的优势血清型为4和12型;对β-内酰胺类药物苯唑西林的耐药性较强,耐药菌占比达61.9％(13/21);多重耐药菌株占比高达90.5％(19/21);β-内酰胺类耐药基因bla-TEM携带率较高(52.4％,11/21),且bta-TEM与 β-内酰胺类药物青霉素G、苯唑西林和头孢拉定的耐药性显著相关,部分bla-TEM编码氨基酸存在可能与副猪格拉菌耐药能力有关的差异位点.[结论]本研究表明,规模化养猪场的副猪格拉菌多重耐药情况仍很严重,并明确了被调查区域β-内酰胺类药物耐药率高的主要原因是携带耐药基因bla-TEM,为加强对规模化养猪场副猪格拉菌耐药性监测提供理论依据.

为了鉴定引起大白鹅死亡的病原,对两只病死的大白鹅进行临床剖检与无菌采集肝脏和心脏进行细菌分离培养.试验通过临床剖检、分离培养、培养特性鉴定、生化试验和16S rRNA PCR等方法进行鉴定,用琼脂扩散法进行药敏试验和抑菌试验,用腹腔注射法进行动物回归试验.结果显示从两只病死鹅的肝和心中分别分离得到4株革兰氏阴性短杆菌(分别标记为BE-X-1、BE-X-2、BE-G-1、BE-G-2);其生化特性分解葡萄糖、蔗糖等产酸不产气,不分解乳糖;分离菌均在1400 bp处出现目的条带,16S rRNA基因序列与多杀性巴氏杆菌同源性最高;药敏试验结果显示分离菌对头孢曲松等药物敏感,对克林霉素等低敏甚至耐受;鸡唾液乳杆菌、猪小肠乳杆菌对分离菌有较好的抑菌效果;试验动物攻毒12～24 h内死亡.分离菌均为多杀性巴氏杆菌,对头孢曲松等药物高敏,具有致病性且致病性较强,试验为鹅巴氏杆菌病的防治提供依据.

为了对番鸭巴氏杆菌病的防治提供科学方法,对疑似番鸭巴氏杆菌病例进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验.从病变部位划线接种血平板进行细菌分离培养;用微量生化法结合分子生物法对分离菌进行种属鉴定;用纸片扩散法和牛津杯扩散法检测分离菌抑菌活性;用腹腔注射分离菌来复制病例.结果:获得菌株Y-X-1、Y-X-2、Y-G-1、Y-G-2,在血平板上半透明、不溶血;对蔗糖产酸不产气,对乳糖不产酸也不产气;于1800bp处出现分离菌PCR电泳条带,分离菌16S rRNA基因序列与多杀性巴氏杆菌高度吻合,Y-G-1与MG597107.1菌株,Y-X-1与KX579748.1菌株的亲缘关系最近,进化树上处于同一分支;头孢曲松高度抑制分离菌生长,青霉素不影响分离菌生长;鸡唾液乳酸杆菌、猪小肠乳酸杆菌对分离菌均表现较强的抑菌性能;复制病例的试验动物,均死于攻菌后的12h之内,死亡动物呈现典型症状.结论:Y-X-1、Y-X-2、Y-G-1、Y-G-2为多杀性巴氏杆菌,该病例确诊为番鸭巴氏杆菌病.该病防治首选抗生素为头孢曲松,头孢曲松结合乳酸杆菌治疗效果更好.

为了诊断一起猪的死亡病例,从病死猪的内脏分离出2株病原菌ZH-S-1和ZH-S-2,进行鉴别培养、生理生化鉴定、体外抑菌等试验.结果:ZH-S-1,ZH-S-2为G-短杆菌;麦康凯、伊红美蓝培养基上生长良好,菌落均为透明不着色;SS琼脂斜面呈红色,底部生成黑色沉淀;分解甘露醇等,不能分解乳糖;对恩诺沙星等高度敏感,对红霉素等完全耐药;鸡唾液乳酸菌对其有较强的抑制效果.结论:ZH-S-1和ZH-S-2均为沙门氏杆菌,高敏药物恩诺沙星配合鸡唾液乳酸菌,可以防治由沙门氏杆菌引起的疾病.

为了确诊某猪场患病猪的病原菌,找到防控办法,对死亡猪肺脏、气管液进行细菌分离鉴定,经过生化试验、药敏试验、体外抑菌试验、动物试验等,得知:分离菌培养特性、生化反应特性与巴氏杆菌基本一致;分离菌高敏药物为头孢氨苄、头孢曲松等,低敏药物为青霉素G、林可霉素等;乳酸菌对巴氏杆菌有明显的抑菌作用;攻毒小白鼠48 h内全部死亡.结论:分离菌为多杀性巴氏杆菌,该病为多杀性巴氏杆菌引起的猪巴氏杆菌病,乳酸菌配合高敏药物能防治该病.

为了获得无耐药性、无毒副作用的生物药物减少抗生素的使用,将健康肉鸡肠道进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验,结果得知:分离菌在MRS培养基上产生明显的溶钙圈,革兰氏染色阳性,呈圆形或卵圆形;发酵分解乳糖、甘露醇等糖类,H2S、V-P等试验为阴性,MR为阳性;在约1 400bp处出现目的条带,测序比对结果,分离菌与乳酸乳球菌同源性最高;该菌对阿奇霉素、红霉素等高敏,对头孢曲松、环丙沙星中敏,对诺氟沙星、四环素耐药;分离菌对病原指示菌均有抑制作用,其中对葡萄球菌、嗜水气单胞菌尤为显著;试验小白鼠均健康生长,无不良反应.结论:分离菌为乳酸乳球菌,具有广谱抑菌作用,可作为益生菌取代或减少抗生素的使用.

为了诊断一起鸡细菌性感染死亡病例,对死亡鸡内脏进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验.结果 得知:分离菌为G-短杆菌;能够分解葡萄糖、蔗糖等;对庆大霉素、环丙沙星等高度敏感,对青霉素、阿莫西林等耐药;鸡乳酸菌对其有较强的抑制作用;攻毒小白鼠病变明显.结论:分离菌为鸡大肠杆菌,该病是由大肠杆菌引起的鸡大肠杆菌病,治疗首选药物为庆大霉素,鸡乳酸菌配合高敏药物能够防治该病.

南昌某猪场仔猪大量死亡,为了查明病因,找到防控的有效办法,对死亡仔猪病变部位进行细菌分离培养,得到分离菌Z-d-1、Q-d-1、Q-d-2,用常规法对3株分离菌进行生化鉴定、药敏试验、致病性试验、体外抑菌试验.结果:Z-d-1与大肠杆菌的生化特性一致;Q-d-1、Q-d-2与气单胞杆菌生化特性一致;3株分离菌对大部分抗生素耐药,对丁胺卡那、呋喃唑酮均高敏;攻毒小白鼠24h均死亡;乳酸菌对其均有较好的抑制作用.结论:分离菌Z-d-1为大肠杆菌,Q-d-1、Q-d-2为嗜水气单胞杆菌;该病为大肠杆菌与嗜水气单胞杆菌混合感染所致;乳酸菌可取代或部分取代抗生素对该病的防治.