分析枣瘿蚊图尔病毒(DjTV-2a)衣壳蛋白的理化性质、蛋白结构及抗原表位.从UniProt数据库中得到DjTV-2a衣壳蛋白的氨基酸序列,利用Expasy、TMHMM、DNAStar、SignalP 5.0、TMHMM、NetPhos 3.1、NET CGlyc 1.0、SOPMA、SWISS-MODEL等生物信息学软件,预测DjTV-2a衣壳蛋白的理化性质、氨基酸组成、亲疏水性、信号肽、跨膜结构、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构、三级结构和抗原表位等.结果表明,DjTV-2 a衣壳蛋白是由449个氨基酸构成的亲水蛋白,分子式为C2337H3607N601O689S15,分子量为51.6 ku,理论等电点为5.98;主要二级结构是无规则卷曲,存在82个磷酸化位点和1个糖基化位点,无信号肽和跨膜结构;该蛋白有21个B细胞优势抗原表位和10个T细胞优势抗原表位.DjTV-2 a衣壳蛋白属亲水蛋白,具有多个抗原表位,预测其具有免疫原性,是可用作建立血清学检测技术的潜在抗原.

家蚕肠道菌群与蚕体对营养物质的消化吸收及健康密切相关.通过饲喂苏优一号家蚕3种不同处理的桑叶,探讨不同处理桑叶饲喂对家蚕肠道菌群的影响及可能的作用机制,为新疆蚕区家蚕肠道微生物种类组成及多样性差异提供一定的理论依据.以正常饲喂组、含沙桑叶组、高湿桑叶组等3种处理方式,饲喂5龄幼虫,采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法对家蚕肠道微生物进行DNA提取,之后通过琼脂凝胶电泳检测DNA的浓度,以16S rDNA高通量测序技术研究不同饲喂组家蚕肠道微生物种类组成及多样性.结果表明,苏优一号优势菌门为变形菌门(Proteobacteria),优势菌科为Chloroplast-norank科和伯克氏菌科(Burkholderiaceae),优势菌属为Chloroplast-noranks属、水杆菌属、Tyzzerella-3属等.正常桑叶饲喂组水杆菌属的含量显著高于其他处理,肠球菌属(Enterococcus)仅存在于含沙桑叶饲喂组,而不动杆菌属(Acinetobacter)仅在正常饲喂组.α多样性指数分析发现Simpson指数B处理显著高于其他处理,Chao1、Faith_pd、Goods_coverage和Observed_species指数组间无差异,而Shannon和Pielou_e指数有差异但不显著.说明桑叶表面沙尘和水分都能影响家蚕肠道微生物丰度,其中沙尘能够影响肠道微生物群落结构.

为了建立枣瘿蚊图尔病毒(DjTV-2a)的PCR检测方法,通过提取枣瘿蚊总基因组DNA和设计DiTV-2a特异性引物,以DNA模板(80,100,120 ng),引物浓度(0.7,0.8,0.9μmol·L-1),dNTP(0.2,0.3,0.4 mmol·L-1),Taq酶(1.25,1.35,1.45 U)为变量,采用正交设计筛选最佳PCR反应体系,建立与优化DjTV-2a的PCR检测方法.结果表明:正交设计的9组PCR反应体系均能够扩增和检测该病毒,且DNA模板100 ng,引物0.7μmol·L-1,dNTPs 0.4 mmol·L-1和Taq酶1.35U反应体系扩增效果最佳;对最佳PCR反应体系进行退火温度(46,48,50,52,54,56℃)优化,发现52℃为引物最佳退火温度.综上分析,在50μL反应体系下,引物退火温度为52℃,模板DNA量100 ng,引物0.7μmol·L-1,dNTPs 0.4 mmol·L-1,Taq酶1.35 U是DiTV-2a的最佳PCR扩增体系,可用于该病毒的检测.

国槐尺蠖是一种寡食性害虫,为害国槐、龙爪槐等,随着城市化进程加快,绿化树种跨区调运较为常见,导致该害虫长距离扩散,近年在新疆阿拉尔市被发现,为详细了解此害虫.通过查阅相关文献和调研,对国槐尺蠖的分布、形态特征、为害、发生规律和防治技术等方面进行了总结,以期为该害虫治理提供理论参考.

家蚕是人们长期驯化的单食性昆虫之一,桑叶不仅影响其取食行为,还能帮助家蚕肠道形成特殊的菌群,促进其幼虫的营养吸收和生长发育.文章基于文献阐述家蚕肠道微生物种类组成、功能及影响因素,以期为家蚕肠道微生物的研究提供参考.

[目的]研究枣瘿蚊基因遗传变异程度,分析基因多态性.[方法]从枣瘿蚊部分基因组序列中搜索SSR并设计相应引物,挑选引物48对进行有效筛选.枣瘿蚊样本来自新疆阿拉尔市、昆玉市、且末县等地区,以枣瘿蚊DNA为模板进行PCR扩增,筛选特异性微卫星引物;通过琼脂糖凝胶电泳进行定性检测,再以毛细管电泳检测其多态性.[结果]有42对引物能扩增出条带,选择其中20对特异性较好的引物进行多态性分析.观测杂合度(Observed heterozygosity,H-o)、期望杂合度(Expected heterozygosity,He)和多态信息含量(PIC)平均值分别是0.358、0.649和0.635,其中18对引物PIC值＞0.5,具有较高的多态性.[结论]开发的微卫星标记多态性较高,可用于枣瘿蚊种群遗传多样性及遗传结构研究.

[目的]为筛选出香梨优斑螟(Euzopherapyriella)在低温胁迫下合适的内参基因,并明确低温胁迫对热激蛋白基因表达的影响.[方法]从梨园采集香梨优斑螟5龄幼虫,于4 ℃处理0、0.25、1、3、8、12、18、24 h,以实时荧光定量技术测定内参基因及热激蛋白基因的表达丰度,利用△Ct法、GeNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件综合评价5个内参基因的稳定性,进一步分析低温处理后热激蛋白(HSP70和HSP90)基因表达规律.[结果]△Ct和Normfinder方法的内参基因稳定性为UBQ > GAPDH >Actin > 18s > TUB,BestKeeper方法中18s和UBQ基因表现最为稳定,GeNorm认为Actin和GAPDH稳定性好,其次是UBQ,RefFinder综合评价稳定性UBQ最高,其次为G4PDH,而稳定性最差的是TUB.以UBQ为内参基因,发现热激蛋白家族中HSP70和HSP90基因相对表达量都是在1h处理时达到峰值、然后下降,在18 h后有小幅度上升,维持在较高的水平,总体上表达呈现显著的先上升后下降的趋势.[结论]香梨优斑螟在温度胁迫中UBQ和GAPDH基因较为稳定.HsP70和HSP90基因对低温胁迫响应曲线相似,24 h内基因表达显著高于对照,这可能有助于提升幼虫对低温的耐受力.

[目的]研究Δ9去饱和酶基因特性及其在不同虫态下的表达,研究EpFAD9基因功能及潜在应用提供数据,为该香梨优玫玉暝、饱和脂肪酸积累中的作用提供参考.[方法]采用生物信息学软件鉴定、分析和预测Δ9去饱和酶(EpFAD9)的核苷酸和氨基酸序列,研究蛋白质结构和功能,并利用qRT-PCR方法测定Δ9去饱和酶基因在不同虫态下的表达水平.[结果]EpFAD9基因开放阅读框由1 056 bp组成,含352个氨基酸,起始密码子ATG位于获得序列的第1 280碱基上,终止密码子TAA位于该序列第2 338碱基.推测该蛋白无信号肽,共4个跨膜结构域,整体表现为亲水性蛋白,主要在内质网中发挥生物学作用.EpFAD9基因在幼虫期表达量较高,分别是成虫期和蛹期的17.75和29.58倍.[结论]EpFAD9基因基因在香梨优斑螟不同虫态下存在表达差异,在幼虫体内的表达量最高,成虫和蛹期的表达很低,尤其是虫蛹,其表达量更低于成虫,虫蛹和成虫状态下的香梨优斑螟对低温抵抗能力都低于幼虫.