猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的一种损害猪只繁殖系统以及呼吸系统的病毒性免疫抑制性传染病.妊娠母猪感染PRRSV后会出现流产现象,产死胎和木乃伊胎,保育猪感染后则表现出生长发育性能大幅降低[1].

2021年10月,某集团公司猪场保育猪出现皮肤发绀、突然瘫痪和急性死亡等症状.为确定致病原,遂对送检的心脏、肺脏、脾脏、肝脏、下颌淋巴结、腹股沟浅淋巴结等病料组织进行实验室检测.结果显示,猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)5种病毒核酸和猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae,ER)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、沙门氏菌(Salmonella)4种细菌核酸检测均为阴性,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)、猪链球菌(Streptococcus suis,SS)核酸检测阳性,并分离鉴定出3株猪链球菌9型(Streptococcus suis type 9,SS9)及1株猪链球菌10型(Streptococcus suis type 10,SS10);4株SS分离株对复方新诺明、青霉素、红霉素、甲氧苄胺嘧啶、头孢曲松、庆大霉素、四环素、链霉素、多黏菌素B、头孢噻肟的耐药率为100％,对氧氟沙星、氟苯尼考、林可霉素、环丙沙星、卡那霉素、多西环素的耐药率为75％,对阿莫西林和新霉素的耐药率为50％.综合猪群的发病情况、临床症状、病理变化以及实验室检测结果,诊断该猪场保育猪的发病主要为SS、APP混合感染所致.

为制备猪链球菌(SS)三价灭活苗并评价其对小鼠的免疫效果,本研究利用筛选出的3株SS菌株(代号/血清型分别为HF2/SS2、BB15-4/SS3、HBgu18-4/SS4)作为疫苗株,甲醛为灭活剂、ISA 201VG矿物油为佐剂制备灭活前分别为1.0×109cfu/mL、2.0×109cfu/mL,4.0×109cfu/mL3种活菌浓度的SS三价灭活苗,分别命名为V-a、V-b和V-c.以昆明鼠为实验动物模型,将V-a、V-b、V-c、商用疫苗均以0.2 mL/只的剂量采取颈背部皮下多点注射的方式依次免疫A～D组小鼠后进行以下免疫效果评价:采集首免后14d与二免后7d的小鼠血清,每组3只,通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中IgG抗体效价;以血清杀菌试验检测血清中功能性抗体水平.血清中IgG抗体检测结果显示,在各个免疫阶段,A～D组小鼠的IgG抗体含量始终保持相同水平且均显著高于阴性对照组(P＜0.05),二免后7d,A～D组小鼠的IgG抗体水平显著上升,抗体效价均为1:12 800;血清杀菌试验结果显示,二免后7d,A～D组均能诱导小鼠血清中功能性抗体水平持续升高且无显著差异(P＞0.05),具有高度杀菌活性.利用噻唑蓝溴化四唑溶液(MTT)测定小鼠脾淋巴细胞增殖指数(SI);采用双抗夹心ELISA方法检测小鼠血清相关细胞因子含量(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1);利用流式细胞术测定CD4+与CD8+外周血T淋巴细胞亚群的百分比.结果显示,二免后7d,A～D组均能刺激小鼠血清中相关细胞因子水平、SI及CD4+与CD8+外周血T细胞亚群百分比持续上升且均显著高于阴性对照组(P＜0.05).二免7d后,均以BZ1、BB15-4和HBgu18-4菌株攻毒各免疫组和攻毒对照组小鼠,阴性对照组接种等体积灭菌生理盐水,每组15只,观察7d,计算小鼠死亡率;在小鼠攻毒3d、7d后,采用平板计数法测定攻毒菌株在小鼠体内的定植情况;并于攻毒7 d后取各组小鼠的肺、肝、脾、肾脏制作组织病理切片,观察各组织病理变化.结果显示,腹腔攻毒后7 d,A～D组及攻毒对照组小鼠免疫保护率依次为86.67％、100％、100％、80％和0;A～C免疫组小鼠各脏器的细菌定植量均显著降低且低于免疫组D(P＜0.05);与D组相比,A～C组小鼠各器官病理变化均较为轻微.本研究结果表明,V-a、V-b和V-c免疫小鼠后均能产生良好的体液免疫和细胞免疫反应,其中V-b和V-c的免疫效力最优,均可有效抵抗SS2、SS3、SS4强毒株的攻击,可作为SS三价(血清2、3、4型)灭活苗的候选疫苗.本研究首次制备了新型SS三价灭活苗,并初步进行了免疫效果评价,为SS疫苗研发提供技术储备.

猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumoniae, PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobczcillus pleuropeumonicze, APP)引起的猪高度致死性呼吸道传染病,主要临诊特征为肺出血、坏死和纤维素性渗出.PCP传染性强,任何生长阶段的猪均有易感性,世界范围内各养猪场PCP发病率不断上升,对养猪业造成的危害不容忽视.根据APP荚膜多糖(CPS)和脂多糖(LPS)抗原性差异,可将其分为18种血清型;依据生长是否需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD),又分为两个生物型,即生物Ⅰ型(NAD依赖型)和生物Ⅱ型(非NAD依赖型),其中血清13、14型为生物Ⅱ型,血清17型菌株生物Ⅰ型和Ⅱ型都有,其他血清型均为生物Ⅰ型.不同国家和地区的APP优势血清型存在差异,但随着种猪交流日益增多,一些非典型菌株逐渐流行,其中血清15型菌株分离率呈现上升趋势[1-2].不同血清型或同一血清型不同菌株之间临床致病力不尽相同,且不同血清型之间没有或仅有较弱的交叉保护力,尤其是目前市场上存在的商品化疫苗仅涉及血清1、2、3和7型,致使疫苗免疫效果常不确实或免疫失败,从而使该病的防治难度进一步增大.

为明确安徽某猪场断奶仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及分离菌株的血清型、基因型、毒力基因型间的关系,通过常规细菌学方法对送检发病猪病料进行细菌分离培养,PCR技术鉴定分离菌株的种属、血清型及毒力基因型,多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)方法确定分离菌株的ST型并构建系统发育树.结果显示,共获得6株猪链球菌(Streptococcus suis,SS)血清9型(SS9),命名A～F;A、D、E、F分离株均为ST1330,其中A、D分离株毒力基因型相同,为epf-mrp+sly+gapdh+fbps+orf2-,E、F分离株毒力基因型相同,为epf-mrp+sly+gapdh+fbps+orf2+;而B、C分离株为ST243,毒力基因型均为epf-mrp+sly-gapdh+fbps+orf2-.表明同一血清型SS的ST型各异,同一ST型的SS9毒力基因型也存在不同.