[目的]探究CC趋化因子受体7(CC chemokine receptor 7,CCR7)基因编码蛋白的生物学特性及其mRNA在健康和炎性奶牛乳腺组织中的表达量.[方法]使用PCR扩增并克隆中国荷斯坦奶牛CCR7基因CDS区,测序后进行相似性比对及系统进化树构建;使用多种生物信息学软件分析CCR7蛋白的组成、理化性质及结构等;使用实时荧光定量PCR技术检测CCR7基因在健康和炎性奶牛乳腺组织中的表达差异.[结果]中国荷斯坦奶牛CCR7基因CDS区全长1 325 bp,与绵羊的相似性较高(95.2％),亲缘关系较近;与鸡的相似性较低(56.4％),亲缘关系较远.CCR7基因编码379个氨基酸,其中亮氨酸含量最多,缬氨酸含量次之,组氨酸和色氨酸含量最低;CCR7蛋白分子质量为14.56 ku,理论等电点为8.89,平均亲水系数为0.640,是一种跨膜疏水性蛋白.CCR7蛋白信号肽切割位点可能存在于第24和25位氨基酸之间.CCR7蛋白二级结构中α-螺旋占比最大,高达51.72％,三级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲.CCR7基因在炎性奶牛乳腺组织中的表达量极显著高于健康乳腺组织(P＜0.01),其可能在奶牛乳腺炎的免疫调控中有着重要的作用.[结论]试验成功克隆出牛CCR7基因CDS区序列,并进行了相应的生物信息学分析及组织定量表达,为进一步研究CCR7基因的具体功能提供材料,对于探究CCR7基因在奶牛乳腺炎中的调控功能具有重要的意义.

以奶牛乳腺组织cDNA为模板,采用PCR技术扩增奶牛Klf4基因CDS区和3'UTR,同时构建PMIR-Klf4-3'UTR表达质粒;应用生物信息学方法对Klf4基因CDS区及其编码蛋白的理化性质、亚细胞定位、翻译后的修饰结构和蛋白结构进行生物信息学分析.结果表明:奶牛Klf4基因CDS区长度为1 434 bp,可编码477个氨基酸,分子质量为50 759.17 u,理论等电点为8.76,属于亲水性蛋白.Klf4基因3'UTR长度为366 bp,酶切重组PMIR-Klf4-3'UTR表达质粒得到长度分别为366和6 470 bp的两条带,表明成功构建了重组质粒.同源性和遗传进化分析可知,牛Klf4基因与山羊、绵羊的亲缘性最近,达到98％以上,与斑马鱼的亲缘关系最远.KLF4蛋白有56个磷酸化位点,包含16个苏氨酸磷酸化位点、37个丝氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点.在二级结构和三级结构中,KLF4蛋白α-螺旋占18.03％,无规则卷曲占68.76％,存在3个锌指结构域.本研究为进一步探讨Klf4基因在奶牛乳腺炎表观遗传学调控过程中的作用提供数据支撑.

本文立足乳品产业信息化发展,重点针对产业链条上游奶源环节,从奶牛养殖管理、奶站和生乳运输车监管、生乳质量监测、信息社会化服务四个方面,分析了我国奶源环节生产监管信息化情况,并从提高奶业生产水平、加强奶源重点环节监管、提升生鲜乳质量安全水平、完善奶业服务及拓展等需要,提出了奶源生产监管信息化的发展需求和相关措施建议,为研究乳业信息化建设与发展进程提供参考.

为进一步探明Foxl3的结构、功能信息,及其在鱼类性别决定和分化中的作用,利用生物信息学方法对欧洲黑鲈、青鳉、斑马鱼和虹鳟的Foxl3蛋白进行同源性、蛋白质理化性质、二级结构、功能结构域和三级结构分析.结果表明:欧洲黑鲈与青鳉、斑马鱼同源性较高,和虹鳟相似度不高,只有79％;鱼类的Foxl3蛋白分别编码269、264、260和296个氨基酸;该蛋白定位于细胞核,无明显信号肽和跨膜结构;主要的二级结构元件是α-螺旋和无规则卷曲,且α-螺旋所占百分比:虹鳟>青鳉>欧洲黑鲈>斑马鱼,无规则卷曲所占百分比:欧洲黑鲈>虹鳟>青鳉>斑马鱼;均包含1个Forkhead家族(FH superfamily)功能结构域.

无标记细胞分析法(RTCA)与CCK-8法,可用于奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)活性监测.本研究选择RTCA和CCK-8两种方法,在0、5、10、20ng/μL4种不同浓度LPS条件下,研究LPS对MAC-T增殖的影响.结果表明,RTCA和CCK-8法均在不同浓度LPS条件下使MAC-T活力下降,均在浓度20ng/μL、时间6h时,下降最为明显.但相比之下,CCK-8法在定点测定时有局限性,而RTCA方法可以不间断、无标记和实时监测细胞贴壁、迁移和增殖的动态等生物反应过程,观察效果更加直观、准确,可较好地弥补CCK-8法的缺点,是较理想的研究奶牛乳腺上皮细胞增殖的方法.

试验旨在克隆牛白细胞介素-6 (IL-6)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析,对荷斯坦奶牛进行尾根采血提取RNA后逆转录为cDNA,根据NCBI数据库中已知的牛IL-6基因mRNA序列设计特异性引物,应用RT-PCR技术克隆得到CDS区全长序列,利用生物信息学软件分析牛IL-6基因序列特征、同源性及编码产物的理化性质等.结果 表明,试验成功克隆了牛IL-6基因CDS区,全长627 bp,分子质量为23.759 ku,共编码208个氨基酸,理论等电点为7.58,脂溶系数为93.37,属于亲水性蛋白;牛IL-6基因与猪、绵羊、大鼠、人、猫、犬、鸡、小鼠、马和兔的同源性分别为84.4％、96.2％、66.7％、77.5％、75.9％、79.3％、48.5％、67.0％、79.5％和67.5％;系统进化树分析发现,牛与绵羊亲缘关系最近,猪次之,鸡最远;在二级结构预测中,该蛋白无规则卷曲与α-螺旋分别为34.6％和60.1％;亚细胞定位于细胞质;该蛋白含有信号肽和跨膜螺旋结构.本研究为进一步分析牛IL-6基因的功能奠定了一定的理论基础.

畜禽种业在现代畜牧业发展中发挥着重要基础作用,本文通过从法律法规、 规划发展、 政策设计、 技术保障等方面,初步分析了中国畜禽种业和畜禽遗传资源发展的总体情况及其呈现的4个发展特点,总结了畜禽种业发展取得的工作成效,为了解和研究我国畜禽种业状况、 畜禽种质资源保护、 畜禽良种培育等工作提供参考依据.

猫会阴疝是一种少见的猫外科疾病.通过临床、血常规、生化指标、血气、DR以及B超等检测方法对一例狸花猫进行了诊断,确诊该猫所患疾病为会阴疝,并通过手术治疗和术后护理,患猫恢复良好且未复发.