目的:通过网络药理学和分子对接技术探讨芪归药对调控肿瘤免疫微环境(tumor immune microenviroment,TIME)的机制和物质基础.方法:通过TCMSP数据库筛选黄芪、当归的有效活性成分及相关靶点蛋白,将经GeneCards数据库挖掘的TIME相关靶标与药物靶点蛋白交集;运用Cytoscape 3.7.1软件构建活性成分-靶点-疾病网络图,运用STRING数据库构建交集靶点的PPI网络并拓扑分析核心靶点,运用David数据库进行KEGG通路和GO功能富集分析;利用Auto Dock Vina软件将主要活性成分、阳性对照药与核心靶蛋白进行分子对接、PyMol 2.3软件绘制对接模式图.结果:筛选出芪归药对的有效活性成分18个,靶点蛋白100个,芪归药对与TIME的交集靶点79个,分析得到78条KEGG富集通路、304条GO功能富集条目,涉及microRNA、PI3K/Akt、TNF、MAPK、HIF-1等通路及炎症、增殖凋亡、缺氧等生物过程;活性成分槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇与IL-6、VEGF、EGFR、CAPS3、MAPK8等潜在核心靶点蛋白均存在较强的分子对接关系.结论:初步揭示了芪归药对可通过多成分、多途径和多靶点协同调节TIME的作用机制,为临床筛选调节TIME药物提供可靠理论依据.

肺癌是我国乃至全球致死率最高的恶性肿瘤,仅2020年新增肺癌死亡人数就达179. 6万,远高于位居第二位的胃结肠癌[1].肺癌发病隐匿,易与其他呼吸道疾病相混淆,早期诊断率低.患者确诊肺癌时大多已属晚期,错失了手术的最佳时机,多采用放化疗、靶向治疗、免疫疗法等多模式治疗方案,患者预后极差.

目的 探讨"芪归药对"干预NF-κB通路调控骨髓造血干细胞(HSCs)辐射旁效应损伤的机制.方法 模拟辐射旁效应HSCs与BMSCs的共培养模型.共培养细胞被随机分为4组:模型组(MX)、"芪归药对"载药血清组(QG)、SN50组(SN50)、药物联用组(LY).各实验组共培养48h后,镜下观察旁细胞集落数,荧光探针DAFFM-DA、DCFH-DA检测旁细胞的NO、ROS水平,流式细胞仪检测旁细胞凋亡率;realtime RT-PCR检测旁细胞的NF-κB通路及凋亡相关基因mRNA水平.结果 与MX组相比,QG组旁细胞HSCs集落增多(P＜0.05),凋亡率降低(P＜0.05),ROS与NO水平下降(P＜0.05),在基因转录水平,NF-κB、COX2、iNOS及Bax表达呈下调趋势,Bcl-2表达上调,Caspase-3表达下调(P＜0.05);SN50组旁细胞HSCs集落增多(P＜0.05),凋亡率、ROS水平呈下降趋势,在基因转录水平,NF-κB、COX2、iNOS、Bax表达均呈下调趋势,Bcl-2表达上调(P＜0.05);LY组旁细胞HSCs集落增多(P＜0.05),凋亡率降低(P＜0.05),ROS、NO的水平下降(P＜0.05),在基因转录水平,NF-κB、iNOS表达下调(P＜0.05),COX2、Bax、Caspase-3表达均呈下降趋势.与SN50组相比,QG组凋亡率降低(P＜0.05),ROS、NO的水平下降(P＜0.05);LY组旁细胞HSCs集落增多(P＜0.05),凋亡率呈下降趋势,ROS、NO的水平下降(P＜0.05),在基因转录水平,NF-κB、COX2、iNOS、Bax、Caspase-3表达均呈下降趋势.结论 "芪归药对"载药血清可能通过抑制NF-κB通路,使旁细胞HSCs内ROS和NO水平下降,促进HSCs增殖、抑制其凋亡,降低了HSCs辐射旁效应损伤程度.

[目的]基于p62-核因子红细胞样2相关因子2(Nrf2)通路探讨黄芪甲苷(ASTⅣ)对抗小鼠淋巴细胞白血病耐药株的机制.[方法]复制白血病细胞耐药模型,将细胞分为6组,即空白组(blank)、模型组(model)、黄芪甲苷组(ASTⅣ)、盐酸维拉帕米(VER)、Nrf2通路抑制剂(ML385)组及抑制剂与黄芪甲苷组(ML385+ASTⅣ),药物干预48 h.细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测耐药细胞对顺铂的敏感性,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)变化,明确ASTⅣ对耐药细胞的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率变化,荧光实时定量聚合酶链式反应(Real time PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)检测p62-Nrf2通路p62、Nrf2、血红素氧化酶-1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)等表达变化明析ASTⅣ对耐药细胞的作用机制.[结果]ASTⅣ通过下调p62-Nrf2通路节点基因p62、HO-1、bcl-2/bax,上调Caspase-3的表达量,降低耐药细胞ROS水平,增加其对顺铂敏感性,使其增殖受抑,细胞周期呈现DNA合成期(S)、合成后期(G2)/有丝分裂期(M)阻滞,凋亡率升高.[结论]ASTⅣ具有逆转白血病耐药的功效,可能与p62-Nrf2通路调控相关,但细胞最终命运受多条通路共同调控仍需探讨.

目的 基于自噬-NF-κB通路探讨阿魏酸钠对白血病化疗耐药株增敏的机制.方法 复制白血病化疗耐药细胞模型,Western blot法观察L1210、L1210/DDP细胞自噬-NF-κB通路的基础表达水平,将L1210/DDP随机分为control组(L1210/DDP)、model组(L1210/DDP+ 8μg/ml DDP)、SF组(model组+0.5mmol/L SF)、3-MA组(model组+10μmol/L 3-MA)、SN50组(model组+2μmol/L SN50)、SF+3-MA组(model组+0.5mmol/L SF+ 10μmol/L 3-MA)及SF+SN50组(model组+0.5mmol/L SF+ 2μmol/L SN50)7组.据实验分组进行药物干预48h,行指标检测.cck-8法检测实验各组细胞活力,流式细胞仪检测实验各组细胞凋亡率、细胞周期的变化;Western blot检测实验各组细胞自噬-NF-κB通路关键节点蛋白表达变化.结果 与L1210细胞相比,L1210/DDP细胞自噬与NF-κB通路异常激活(P＜0.05);与model组相比,各给药组细胞活力降低、G0/G1期细胞百分比减少(P＜0.05)、S期细胞百分比增加(P＜0.05)、凋亡率增加(P＜0.05),且SF与抑制剂联用效果更佳,LC3BⅡ/Ⅰ表达减少(P＜0.05)、p-p65/p65比值降低、bcl-2/bax表达减少(P＜0.05);与SF组相比,SF与抑制剂联用组Beclin1、LC3BⅡ/I蛋白减少(P＜0.05),bcl-2/bax比值降低(P＜0.05).结论 SF通过抑制耐药株自噬-NF-κB通路,增加耐药株对DDP的敏感性,具有抑制癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡的功效.