目的 研究牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea viruses,BVDV)N-端自身蛋白酶(Npro)的生物信息学特征及表达特性.方法 克隆NADL株BVDV Npro基因,利用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、跨膜区、信号肽、二级及三级结构,并进行原核表达、纯化及鉴定.将纯化的重组Npro蛋白免疫昆明小鼠,制备鼠抗Npro蛋白多克隆抗体,采用ELISA法、间接免疫荧光试验及Western blot法进行多克隆抗体效价、特异性及蛋白反应原性检测.结果 PCR扩增的Npro基因全长504 bp,编码168个氨基酸,Npro基因与BVDV V026株属于同一分支.Npro蛋白属于外膜蛋白,有亲水性,无信号肽,二级结构以β折叠和无规则卷曲为主.重组表达质粒pET-28a-Npro经PCR及酶切鉴定正确,测序结果与原序列一致;表达的重组Npro蛋白相对分子质量约25000,纯化后纯度达95％以上,且免疫原性良好;制备的鼠抗Npro蛋白多克隆抗体效价为1∶128000,特异性良好.结论 成功在大肠埃希菌中表达了BVDV Npro蛋白,表达的Npro蛋白免疫原性良好,为进一步研究BVDV Npro蛋白的功能奠定了基础.

[目的]了解大庆市某牧场牛白血病病毒(BLV)感染情况.[方法]随机选取大庆市某规模化牧场泌乳期奶牛107头,采用ELISA方法进行BLV血清流行病学调查,并采用荧光定量PCR方法加以验证.[结果]ELISA检测结果阳性率为31.78％(34/107),荧光定量PCR检测结果阳性率为37.38％(40/107),两种检验方法的阳性重合率为85.00％;BLV高载量牛占总数的26.17％,低载量牛占总数的11.21％.[结论]调查结果表明,该牧场奶牛存在一定程度的BLV感染,在牛群中传播的风险较高.

2020年5-6月份,黑龙江省某奶牛场的新生犊牛出现精神沉郁、消瘦、水样腹泻等临床症状.为确诊发病原因,采集腹泻犊牛肛拭子、粪便等样品20份,采用PCR技术检测牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻黏膜病病毒及隐孢子虫,细菌分离培养和致病性试验鉴定可能的致病细菌.结果表明,在20份腹泻粪样中,未检出牛轮状病毒、牛冠状病毒及牛病毒性腹泻黏膜病毒,隐孢子虫的阳性率为25％(5/20),致病性大肠杆菌检出率为75％(15/20).说明该奶牛场犊牛养殖区存在较为严重的大肠杆菌及隐孢子虫感染.