榆林市某陕北白绒山羊场多只绒山羊发生严重腹泻,羔羊尤为严重,且抗生素治疗无效.为了查明腹泻病原,对采集的90份腹泻样品进行病毒和寄生虫检测,PCR检测结果表明,牛病毒性腹泻病毒、羊库布病毒、羊肠道病毒、羊冠状病毒、羊诺如病毒、羊札幌病毒和轮状病毒均为核酸阴性;饱和盐水漂浮法检测发现大量的球虫卵囊,且球虫总感染率为85.6％,平均感染强度为9798 OPG.其中2月龄～3月龄羔羊感染率高达100％,感染强度为25393 OPG;6月龄～7月龄羊球虫感染率高达95.6％,感染强度为2800 OPG;成年羊球虫感染率为63.3％,感染强度为1200 OPG;共鉴定出球虫13种,均为多种球虫混合感染.综上所述,该羊场腹泻主要是球虫感染所致,为该病的防治提供了科学依据和技术支撑.

[目的]利用系统药理学构建黄白双花口服液治疗犊牛腹泻的活性化合物—靶点—通路—疾病相关蛋白的关系网络模型,阐述黄白双花口服液治疗犊牛腹泻的分子机制,为犊牛腹泻防治药物研发提供理论依据.[方法]根据口服利用度(OB)≥30％和类药性(DL)≥0.18,利用中药系统药理学数据库(TCMSP)检索黄白双花口服液中每味中药(黄连、白头翁、金银花、黄芩、地榆和乌梅)的活性化合物及与其相对应的作用靶点,导入Cytoscape绘图软件中建立活性化合物与其对应靶点的互作网络图;通过基因数据库(Gene Cards)检索犊牛腹泻的有关靶点基因,使用维恩图求取二者的交集,得到犊牛腹泻与黄白双花口服液共同的靶点基因组合,然后导入String数据库中以获得相关蛋白相互作用网络图;将黄白双花口服液作用于犊牛腹泻的靶点基因导入DAVID数据库中,分别进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析.[结果]从黄白双花口服液中筛选出43种活性化合物,分别对应131个相关靶点基因.黄白双花口服液与犊牛腹泻交集的蛋白质—蛋白质相互作用网络图包括128个节点及205条相互关系,其中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、白介素2(IL-2)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、促分裂素原活化蛋白激酶1(MAPK1)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)的出现频率较高.利用DAVID数据库对黄白双花口服液与犊牛腹泻交集靶点的蛋白进行GO功能富集分析,最终富集到204条GO功能条目(FDR<10-2),其中细胞组成条目8条、分子功能条目12条、生物过程条目184条;黄白双花口服液治疗犊牛腹泻的相关蛋白主要富集于19条信号通路上(FDR<10-2).[结论]黄白双花口服液主要以黄连、白头翁、金银花、黄芩、地榆和乌梅中的槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇及山奈酚等活性化合物成分,通过ATK1、MAPK1、IL-2、IL-6和IL-8等靶点,经Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路、T细胞受体信号通路和B细胞受体信号通路等,发挥抗菌消炎、抑制细胞损伤及调节免疫力等作用,以达到治疗犊牛腹泻的目的.

目的 研究牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea viruses,BVDV)N-端自身蛋白酶(Npro)的生物信息学特征及表达特性.方法 克隆NADL株BVDV Npro基因,利用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、跨膜区、信号肽、二级及三级结构,并进行原核表达、纯化及鉴定.将纯化的重组Npro蛋白免疫昆明小鼠,制备鼠抗Npro蛋白多克隆抗体,采用ELISA法、间接免疫荧光试验及Western blot法进行多克隆抗体效价、特异性及蛋白反应原性检测.结果 PCR扩增的Npro基因全长504 bp,编码168个氨基酸,Npro基因与BVDV V026株属于同一分支.Npro蛋白属于外膜蛋白,有亲水性,无信号肽,二级结构以β折叠和无规则卷曲为主.重组表达质粒pET-28a-Npro经PCR及酶切鉴定正确,测序结果与原序列一致;表达的重组Npro蛋白相对分子质量约25000,纯化后纯度达95％以上,且免疫原性良好;制备的鼠抗Npro蛋白多克隆抗体效价为1∶128000,特异性良好.结论 成功在大肠埃希菌中表达了BVDV Npro蛋白,表达的Npro蛋白免疫原性良好,为进一步研究BVDV Npro蛋白的功能奠定了基础.

PRDM6属于PRDM蛋白家族的一员,PRDM6基因编码1个转录抑制因子,具有与DNA、RNA、蛋白质结合的能力,同时还具有组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶活性.全基因组关联分析结果显示,PRDM6基因遗传变异与骨密度和体质量等性状显著相关,且该基因插入/缺失(Indel)遗传变异还被发现与陕北白绒山羊的多个生长性状显著相关.因此,本研究将PRDM6基因作为研究对象,以期挖掘到与内蒙古绒山羊生长性状相关的关键遗传变异位点.结合Ensembl数据库提供的山羊PRDM6遗传变异信息和已发表文章中的遗传变异位点,本研究探究了2个InDel位点(rs656578433、rs651603667)多态性及其在内蒙古绒山羊群体中的分布规律.发现在本研究检测的群体中,只有第一内含子区的12 bp InDel(rs651603667)存在多态性.不同基因型与生长性状的关联分析结果显示,rs651603667存在3种基因型,即纯合插入型(Ⅱ)、杂合型(ID)和纯合缺失型(DD),频率分别为0.399、0.444、0.159.在育成羊群体中,此rs651603667突变与体质量、胸深显著相关(P<0.05);在成年羊群体中,rs651603667突变与体长、髋宽显著相关(P<0.05),和体高、胸深极极显著相关(P<0.01);此外,皮尔逊(Pearson)相关分析结果显示,该突变位点显著影响的生长性状均与体质量存在极显著相关(P<0.01).综上,PRDM6基因12 bp InDel突变位点与内蒙古绒山羊体长、髋宽和体高、胸深具有显著或极显著相关性,可作为内蒙古绒山羊生长性状选育的有效分子标记.

实验旨在研究不同浓度β-胡萝卜素对猪精液在17℃下保存的质量影响.实验在Modena基础稀释液中添加不同浓度(0、10、15、20、25 mg/L)β-胡萝卜素并在17℃环境下保存精液,在保存1、2、3、4、5 d分别检测猪精子活率、精子活力、运动性能和畸形率.结果表明:添加β-胡萝卜素嫩能显著提高精子质量,20 mg/Lβ-胡萝卜素组精子活率、活力等优于其他组(P<0.05),同时畸形率显著降低.综上,添加20 mg/Lβ-胡萝卜素对17℃保存的公猪精液有利,可为生产实践中公猪精液的保存提供实验依据.

作为有效抵御DNA病毒感染的方式,环腺苷酸鸟苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)及其下游干扰素刺激基因(stimulator of interferon genes,STING)在宿主细胞中通过识别DNA分子,可级联放大反应调节宿主干扰素(interferons,IFNs)及促炎细胞因子的表达,从而发挥抗DNA病毒感染作用.针对cGAS-STING抗病毒感染的信号通路,许多DNA病毒也已经进化出多种拮抗策略,通过作用于该通路中不同的蛋白分子逃逸宿主的免疫应答.本文就cGAS-STING通路识别DNA病毒并诱导宿主天然免疫反应以及DNA病毒拮抗cGAS的识别策略的研究进展作一综述,以期为深入理解DNA病毒与宿主之间的相互作用奠定基础,也为基于cGAS-STING通路为靶点的疫苗研发及药物设计提供重要的理论支撑.

为了更好地了解常用驱虫药的驱虫效果,选择陕北白绒山羊开展驱虫研究.试验选取3种市场常用驱虫药(伊维菌素注射液、芬苯达唑粉、伊维菌素芬苯达唑预混剂),应用饱和食盐水漂浮法和虫卵计数法对陕北白绒山羊的消化道线虫驱虫前后的感染情况进行检测.结果表明,伊维菌素注射液组驱虫后虫卵转阴率为6.25％,感染强度由766.7降低至233.3;芬苯达唑组驱虫后虫卵转阴率为31.25％,感染强度由766.7降低至100;伊维菌素芬苯达唑预混剂组驱虫后虫卵转阴率为50％,感染强度由766.7降低至167.0.建议在陕北白绒山羊生产中将伊维菌素芬苯达唑预混剂作为消化道线虫的首选驱虫药.

本研究旨在探讨陕北白绒山羊MHC(主要组织相容性复合体)基因与疾病抗性的关系,通过对98只陕北白绒山羊DRB1基因外显子2多态性与球虫病的相关性研究,共获得17条等位基因和29种基因型,其中10条等位基因是首次发现.生物信息学分析表明DRB1位点具有高度多态性,且不同等位基因预测的蛋白质结构存在明显差异,说明这种基因可能通过抗原呈递分子结构的改变影响宿主对病原体的免疫应答.相关性分析发现DRB1*16等位基因频率与球虫感染强度呈显著负相关(p＜0.05),提示该等位基因可能与相关抗原呈递及抗性的产生有关.本次对陕北白绒山羊DRB1基因多态性及其与球虫病的相关性分析有助于筛选疾病抗性和易感性相关基因,进而可加速绒山羊抗病品系的培育进程.

为了解榆林市散养比利时兔球虫的感染情况,选取榆林市某散养比利时兔场采用饱和盐水漂浮法和重铬酸钾培养法对采集的散养比利时兔粪便样品进行感染情况检查.结果 表明,散养比利时兔球虫平均感染率为62.3％,其中成年兔感染率是57.6％,感染强度为500;幼龄兔感染率是71.4％,感染强度为800.经检测发现8种球虫,分别为盲肠艾美尔球虫(E.coecicola Cheissin,1947)、纳格浦尔艾美尔球虫(E.nagpurensis Guil et Ray,1966)、斯氏艾美尔球虫(E.stiedae Kiss kalt et Hartmann,1907)、梨形艾关尔球虫(E.piri formis Kotlan et Pospesch,1934)、肠艾美尔球虫(E.intestinalis Cheissin,1948)、马氏艾美尔球虫(E.matsuba yashii Tsunoda,1952)、小型艾美尔球虫(E.imeriaexigua Yakimoff,1934)、中型艾美尔球虫(E.mebia Kcsscl,1929),其中盲肠艾美尔球虫、纳格浦尔艾美尔球虫、斯氏艾美尔球虫为优势虫种,所占比例分别为25.3％、23.1％、14.3％.本调查结果可为榆林市防治散养比利时兔球虫病提供一定的数据参考和理论依据.

为了解榆林市某兔场笼养比利时兔球虫的感染情况,试验采用饱和盐水漂浮法、司陶尔虫卵计数法和重铬酸钾培养法对57份粪便样品进行兔球虫感染情况调查.结果 表明:该兔场兔球虫平均感染率为64.9％.成年兔感染率为61.5％,感染强度为400个;幼兔感染率为72.2％,感染强度为600个.共检出8种球虫,分别为小型艾美耳球虫(E.exigua)、纳格浦尔艾美耳球虫(E.nagpurensis)、黄艾美耳球虫(E.flavescens)、梨形艾美耳球虫(E.piriformis)、大型艾美耳球虫(E.magna)、斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)、盲肠艾美耳球虫(E.coecicola)、松林艾美耳球虫(E.matsubayashii),其中黄艾美耳球虫、梨形艾美耳球虫、斯氏艾美耳球虫所占比例较高,分别为23％、19％、17％.说明该兔场笼养兔球虫感染率较高,黄艾美耳球虫、梨形艾美耳球虫、斯氏艾美耳球虫为优势种.

蜱及蜱传疾病对人类和动物健康的威胁越来越大,备受社会关注.近年来,研究主要集中于蜱的分类与系统学、生物学与生态学特性以及蜱的生理、生化等方面,阐明蜱与病原体的相互作用在蜱传疾病控制中发挥重要作用,日趋成为研究热点.本文从蜱传病原体、蜱与病原体相互作用的生物学过程、蜱体微生物种群与媒介能力、蜱与病原体相互作用在蜱传疾病防控中的应用几个方面来进行综述,以期更深入地了解蜱及蜱传疾病,为有效防控及其他相关领域研究奠定基础.

为了解我国东北地区猪嵴病毒(PKV)的流行情况及其VP1基因的遗传进化特征,试验通过巢式RT-PCR法对2015-2017年采集自中国东北地区(黑龙江省、吉林省、辽宁省)的122份样品进行PKV检测,分析PKV感染与腹泻的相关性,并针对PKV VP1基因进行遗传进化分析.结果 表明:利用RT-PCR法检测本试验采集的122份样品,扩增PKV 3D基因的PCR产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳,得到的目的片段与预期大小相符.PKV总检出率为88.5％(108/122),其中腹泻样品和健康样品的阳性率分别为87.9％(94/107)和93.3％(14/15).通过卡方检验分析发现,PKV的感染与腹泻发生不存在统计学相关性(P＞0.05).本试验鉴定的7株PKV的VP1基因核苷酸同源性为80.8％～99.9％,推导氨基酸同源性为86.6％～ 99.6％.PKV毒株被划分为4个进化分支,本试验鉴定的7株PKV毒株在1,3,4分支均有分布.说明PKV在中国东北地区猪群中有较高的感染率,且其毒株呈现出遗传多样性.

为了解我国东北三省地区(黑龙江省、辽宁省、吉林省)规模化猪场新生仔猪的猪A群轮状病毒(GARV)、猪B群轮状病毒(GBRV)和猪C群轮状病毒(GCRV)的流行情况.利用巢式PCR方法对2015年1月至2016年10月从我国东北三省地区多个规模化猪场采集的108份仔猪腹泻病料和15份健康仔猪粪便样品进行分析.结果 显示:黑龙江省GARV阳性率为47.4％,GBRV未检出,GCRV阳性率为5.3％;辽宁省GARV阳性率为51.5％,GBRV阳性率为3.03％,GCRV阳性率为6.1％;吉林省GARV的阳性率为21.1％,GBRV阳性率为7.1％,GCRV阳性率7.1％;并且存在GARV/GCRV混合感染的情况,因此,我国东北三省地区猪轮状病毒病的主要病原是GARV,但GBRV和GCRV也是幼龄猪群潜在的重要致病风险.为我国猪轮状病毒病的提前预防和综合防控提供流行病学参考数据.

目的 利用高通量测序技术(Illumina平台)对感染牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的MDBK细胞进行转录组学分析,并对筛选出的差异表达基因进行功能归类及相关分子机制研究.方法 用BVDV感染MDBK细胞,分别在12、24、48和72 h收集细胞,提取总RNA进行转录组学分析.通过信号通路数据库(KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)及基因功能(Gene Ontology,GO)对差异基因进行功能的注释和富集分析.结果 与未接毒的细胞相比,在0～12、13～24、25～ 48、49 ～ 72 h分别共有差异基因56、390、487、164个.感染病毒后12与24 h、24与48 h、48与72 h分别有9、55、270个相同差异基因;经KEGG和GO分析,在感染病毒24、48、72 h后,差异基因主要富集到P53、FoxO、NF-kB和PI3K-AKT信号通路等;筛选出感染后与免疫等相关的差异基因P21、FOX01、GABARAPL1等,主要集中在细胞周期复制、凋亡和免疫等相关信号通路上.结论 本研究通过对筛选出的差异表达基因初步归类分析,为后续BVDV感染MDBK细胞并在细胞内复制的相关分子机制研究奠定了基础.

为了解2015-2017年东北地区猪星状病毒(Porcine astrovirus,PAstV)流行情况,试验采用半巢式RT-PCR方法对2015-2017年东北地区的122份仔猪小肠及粪便样品(107份来自腹泻仔猪,15份来自健康仔猪)进行PAstV检测,对阳性产物进行测序,并对测序结果进行同源性分析及构建系统进化树.结果 表明:半巢式RT-PCR扩增得到大小约为422 bp的片段,样品总阳性率为9.02％(11/122),其中腹泻仔猪样品的阳性率为10.28％(11/107),健康仔猪样品的阳性率为0(0/15);有4株PAstV ORF1b基因测序成功;毒株间核苷酸同源性为99.1％～ 100％,氨基酸同源性为97.4％～100％;与PAstV 2型参考毒株核苷酸的同源性最高,为75.9％～92.3％;获得的4株PAstV均属于PAstV 2型.说明东北地区有PAstV的流行,且以PAstV 2型为主.

为了对黑龙江省规模化奶牛场牛病毒性腹泻/黏膜病进行检疫净化,试验应用qRT-PCR法检测了黑龙江省4个规模化奶牛场(A～D场)奶牛耳组织样品(共1 286份,58组),qRT-PCR法检测得到的阳性组样品再用双抗夹心ELISA进行每份样品的检测.阳性牛间隔1个月用RT-PCR方法复检.结果 表明:A场牛病毒性腹泻病毒阳性率为0.5％(1/193),B场为0.1％ (2/875),C场为1.8％ (1/55),D场未检测出牛病毒性腹泻/黏膜病抗原阳性牛(0/163).间隔1个月,用RT-PCR方法复检,阳性符合率100％.说明qRT-PCR结合双抗夹心ELISA方法适合于规模化奶牛场牛病毒性腹泻/黏膜病的快速、特异性的检疫净化.

近年来,随着国际市场自由贸易的冲击,国内更多的养殖企业大力引进或培育产肉性能突出的肉用绵羊,如杜柏、萨福克等,以获取更可观的经济利润.据调查,很多肉羊养殖基地陆续出现直肠脱垂或直肠黏膜水肿外脱的病例,由于未达到有效控制,导致病羊死亡或提前淘汰,给养殖企业带来严重的经济损失,给养殖工作者带来一定困扰.

从校企深度合作的角度,分析了执业兽医制度与兽医人才培养的关系,探讨了执业背景下校企深度合作的必要性和合作面临的困难,并阐述了校企深度合作的体系建设,从而提升兽医的培养质量.

This paper analyzed and discussed teaching situation of animal derived food hygiene in traditional teaching mode.On that basis,the application of participatory teaching method is doing the exploration and the practice in animal derived food hygiene teaching.The practice result shows that participatory instruction had a significant effect on stimulating students interest in learning,and improved the quality of instruction for a course in animal derived food hygiene,which is a kind of teaching method worth promoting.

目的 制备牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕,并对裂解条件进行优化.方法 将裂解质粒pHH43电转入牛肠产毒素性大肠埃希菌中,37℃培养至A600值为0.6时,升温至42℃诱导裂解,制备菌蜕.同时对起始诱导A600值(0.4、0.6、0.8、1.0、1.2)和培养基成分含量(2/3、3/4、4/5和正常含量)进行优化,并计算裂解效率.结果 在起始诱导A600值为0.6,培养基营养成分为正常含量的3/4时,裂解效率最高,达99.93％.结论 成功制备了牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕,并对其制备条件进行了优化,为进一步开展对其免疫效果和佐剂效应等研究奠定了基础.