Введение. Язвенный колит – хроническое воспалительное заболевание с первичным поражением слизистой прямой кишки и различным по протяженности ободочной, которое характеризуется непрерывным или рецидивирующим течением. В настоящее время при рефрактерной форме язвенного колита перспективным является применение аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток. При этом селективный путь доставки биомедицинского клеточного продукта в мезентериальное артериальное русло к пораженным клеткам толстой кишки в отличие от внутривенного и местного фактически не изучен. Цель. Оценить безопасность и терапевтическую эффективность однократной селективной инфузии в брыжеечные артерии биомедицинского клеточного продукта на основе аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток при лечении язвенного колита. Материалы и методы. В ангиографическом отделении УЗ «Минская областная клиническая больница» выполнили селективную инфузию в устья брыжеечных артерий биомедицинского клеточного продукта на основе аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток ТУ BY 100185131.002-2022 четырем пациентам с язвенным колитом. Результаты. По клиническим признакам (частота стула, ректальное кровотечение, эндоскопическая оценка слизистой, активность заболевания), суммарному баллу шкалы Мейо, уровню лабораторных маркеров воспаления в течение первого месяца после инфузии биомедицинского клеточного продукта на основе аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток у всех пациентов отмечена положительная динамика. Заключение. Селективная инфузия в брыжеечные артерии биомедицинского клеточного продукта на основе аутологичных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток не имела непосредственных осложнений и позволила достигнуть и поддержать клиническую ремиссию, отсрочить хирургическое вмешательство, лучше подготовить пациента и выполнить операцию в плановом порядке. Introduction. Ulcerative colitis is a chronic inflammatory disease with a primary lesion of the rectal mucosa and varying in extent of the colon, which is characterized by a continuous or recurrent course. Currently, in the refractory form of ulcerative colitis, the use of autologous multipotent mesenchymal stromal cells is promising. At the same time, the selective route of delivery of a biomedical cellular product into the mesenteric arterial bed to the affected cells of the colon, in contrast to intravenous and local delivery, has not been virtually studied. Purpose. To evaluate the safety and therapeutic efficacy of a single selective infusion into the mesenteric arteries of a biomedical cell product based on autologous multipotent mesenchymal stromal cells in the treatment of ulcerative colitis. Materials and methods. In the angiographic department of the Minsk Regional Clinical Hospital, a selective infusion of a biomedical cell product based on autologous multipotent mesenchymal stromal cells, TU BY 100185131.002-2022, was performed into the orifices of the mesenteric arteries into four patients with ulcerative colitis. Results. According to clinical signs (stool frequency, rectal bleeding, endoscopic assessment of the mucous membrane, disease activity), total Mayo scale score, level of laboratory markers of inflammation during the first month after infusion of a biomedical cell product based on autologous multipotent mesenchymal stromal cells, positive dynamics were noted in all patients. Conclusion. Selective infusion into the mesenteric arteries of a biomedical cell product based on autologous multipotent mesenchymal stromal cells had no immediate complications and made it possible to achieve and maintain clinical remission; delay surgery; It is better to prepare the patient and perform the operation as planned.
Введение. В настоящее время общепринятым подходом к оценке иммунного статуса является характеристика лимфоидных клеток периферической крови. Вместе с тем актуальными остаются исследования показателей локального мукозального иммунитета желудочно-кишечного тракта при иммунопатологических состояниях и последующее сопоставление полученных данных с таковыми циркулирующих лимфоидных клеток – для выявления взаимосвязи локальных реакций с системными эффектами. В статье представлена методология выделения и предложен алгоритм фенотипирования интраэпителиальных лимфоидных клеток (IEL) и лимфоидных клеток собственной пластинки слизистых оболочек (LPL) тонкой и толстой кишки у пациентов с болезнью Крона. Цель. Оценить фенотипический состав лимфоидных клеток периферической крови и слизистой оболочки тонкой и толстой кишки у пациентов с болезнью Крона. Материалы и методы. Материал исследования – биопсийный материал тонкой и толстой кишки, а также периферическая кровь 10 пациентов с болезнью Крона в возрасте 28,0 (22,7÷36,8) года, из них – 6 мужчин и 4 женщины. Мукозальные лимфоидные клетки получали путем комбинированной программной диссоциации тканей кишки. Иммунофенотипирование лимфоидных клеток осуществляли с использованием набора моноклональных антител и проточного цитометра. Статистическую обработку данных проводили в программе Statistica 8.0. Результаты. Основная популяция мукозальных лимфоидных клеток тонкой и толстой кишки у пациентов с болезнью Крона представлена СD3+Т-лимфоцитами, долевое содержание которых коррелировало с количеством Т-лимфоцитов периферической крови (R=0,7; p<0,05). При этом среди Т-клеток IEL тонкой кишки выявлена инверсия Т-хелперов и Т-киллеров. В обоих отделах кишки установлено увеличение количества минорных популяций γδIEL (преимущественно за счет Vδ1+T-клеток) относительно LPL (p<0,01) и мукозально-ассоциированных СD161+T-клеток относительно периферической крови (p<0,05). Мукозальные В-лимфоциты и NK-клетки локализировались преимущественно среди LPL-компартмента, при этом в толстой кишке большая половина В-клеток определялась как B1-лимфоциты (p<0,01). Заключение. С использованием предложенного алгоритма фенотипирования у пациентов с болезнью Крона выявлены изменения в основных и минорных популяциях мукозальных лимфоидных клеток врожденного и приобретенного иммунитета, которые, предположительно, вовлекаются в формирование аутоиммунного воспаления в тонкой и толстой кишке, а также циркулируют в периферической крови и могут являться диагностически значимыми маркерами развития рецидива заболевания. The work was financially supported by the state research program "Biotechnologies-2", subprogram 3.1 "Molecular and cellular biotechnologies-2", registration number 20230295. Abstract Introduction. Currently the generally accepted approach to the immune status assessment is the characterization of lymphoid cells in the peripheral blood. However, the investigation of local mucosal gut immunity under immunopathological conditions remain highly relevant as well as its following comparison with circulating lymphoid cells for the identification the relationship between local reactions and systemic effects. This article presents a methodology for mucosal cells isolation and proposed an algorithm for the phenotyping of intraepithelial lymphoid cells (IEL) and lamina propria lymphoid cells (LPL) obtained from the small and large intestine in patients with Crohn’s disease. Purpose. To evaluate the phenotype of peripheral blood and mucosal lymphoid cells of the small and large intestine in patients with Crohn’s disease. Materials and methods. The study material was biopsy of the ileum and colon as well as peripheral blood from 10 patients with Crohn’s disease, aged 28.0 (22.7÷36.8) years, including 6 men and 4 women. Mucosal lymphoid cells were obtained by combined mechanical and enzymatic dissociation of intestinal tissues. Lymphoid cells were immunophenotyped using a set of monoclonal antibodies and a flow cytometer. Statistical data processing was done using the Statistica 8.0 program. Results. The major population of mucosal lymphoid cells in the small and large intestine of patients with Crohn’s disease was represented by CD3+T-lymphocytes, the percentage of which correlated with the number of peripheral blood T-lymphocytes (R=0.7; p<0.05). At the same time, the inversion of T-helpers and T-killers was revealed among T-cells of enteric IEL. An increase in the number of minor γδIEL subsets (mainly due to Vδ1+T- cells) as compared to LPL (p<0.01) and mucosa-associated CD161+T-cells as compared to peripheral blood (p<0.05) was established in both parts of the intestine. Mucosal B-lymphocytes and NK-cells were localized predominantly among the LPL compartment, while more than half of the B-cells were defined as B1-lymphocytes in the colon (p<0.01). Conclusion. Using the proposed phenotyping algorithm changes in the major and minor subsets of mucosal lymphoid cells of innate and acquired immunity were detected in patients with Crohn’s disease, assuming their involvement in the gut autoimmune inflammation as well as circulation in the peripheral blood what may be used as diagnostic significant markers for disease progression.
Введение. Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК) представляют собой основу развития перспективной стратегии регенеративной медицины, используемой для терапии широкого спектра заболеваний. В настоящее время особое внимание уделяется исследованию секретома ММСК, посредством которого клетки участвуют в репарации и восстановлении поврежденных тканей, а также обеспечивают антиоксидантную защиту организма при патологических состояниях, сопровождающихся гипоксией. Цель. Оценить регенеративный и антиокислительный потенциал ММСК костного мозга и жировой ткани человека в условиях экспериментального моделирования гипоксии. Материалы и методы. Материалом исследования явились 20 культур ММСК доноров, которые предоставили информированное согласие. Мононуклеары периферической крови, нейтрофилы и макрофаги получали от 10 здоровых доноров. Условия гипоксии создавали с помощью микробиологического набора Anaerocult A® mini. Для оценки поверхностного фенотипа и внутриклеточных молекул ММСК использовали метод проточной цитометрии, для внеклеточной продукции ростовых факторов и цитокинов – метод иммуноферментного анализа. Оксидантную активность клеточных культур и кокультур оценивали методом хемилюминесценции. Обработку данных проводили в программе Statistica 8.0. Результаты. В условиях гипоксии изменялись морфология и фенотип ММСК посредством снижения экспрессии маркеров CD105 и CD90, что может влиять на клеточную адгезию и межклеточную кооперацию. В то же время гипоксия стимулировала продукцию репаративных факторов (рецептор 2-го типа фактора роста эндотелия сосудов, матриксная металлопротеиназа 3, фактор роста тромбоцитов D), что усиливало репаративные и ангиогенные свойства ММСК, а также увеличивала синтез антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы 3, каталазы, глутатиона, NO-синтазы), предотвращающих избыточное образование активных форм кислорода. В условиях дефицита кислорода ММСК проявляли иммуномодулирующий эффект в отношении нейтрофилов и макрофагов, что проявлялось увеличением интенсивности хемилюминесценции. Заключение. Для оптимизированной пробоподготовки биомедицинских клеточных продуктов на основе ММСК необходимо учитывать, что гипоксия влияет на морфологию, изменяет фенотип и стимулирует секретом клеток, а также проявляет иммуномодулирующий эффект в отношении клеток врожденного иммунитета. Introduction. Multipotent mesenchymal stromal cells (MMSCs) represent a promising strategy of regenerative medicine used for the treatment of a wide range of diseases. Currently, particular attention is paid to the study of MMSCs secretome, through which cells participate in the repair and regeneration of damaged tissues, and also provide antioxidant protection of the body in pathological conditions accompanied by hypoxia. Purpose. To evaluate the regenerative and antioxidant potential of human bone marrow and adipose tissue derived MMSCs under experimental hypoxia. Materials and methods. The material was 20 MMSCs cultures from donors who provided informed consent. Peripheral blood mononuclear cells, neutrophils and macrophages were obtained from 10 healthy donors. Hypoxia condition was created using the Anaerocult A® mini microbiological kit. The flow cytometry method was used for the assessment of the surface phenotype and intracellular molecules of MMSCs while extracellular growth factors and cytokines were estimated by enzyme immunoassay. The oxidant activity of cell cultures and co-cultures was evaluated by chemiluminescence. Data processing was carried out with Statistica 8.0 program. Results. MMSCs morphology and phenotype were changed via decreased CD105 and CD90 expression under hypoxia conditions, what may affect cell adhesion and intercellular cooperation. Hypoxia stimulated the production of reparative factors (vascular endothelial growth factor type 2 receptor, matrix metalloproteinase 3, platelet- derived growth factor D), what enhanced the reparative and angiogenic properties of MMSCs as well as increase the synthesis of antioxidant enzymes (superoxide dismutase 3, catalase, glutathione, NO-synthase) preventing the excessive formation of reactive oxygen species. In conditions of oxygen deficiency MMSCs showed an immunomodulatory effect on neutrophils and macrophages, what was proved by an increase in the intensity of chemiluminescence. Conclusion. For optimized MMSC-based biomedical cell products preparation it is important to take into account that hypoxia affects MMSCs morphology, changes their phenotype and stimulates cell secretion as well as enhances an immunomodulatory effect of MMSCs on innate immunity cells.
Введение. Язвенный колит – это хроническое рецидивирующее воспалительное заболевание прямой и ободочной кишок, главной целью консервативного лечения которого является купирование клиники заболевания и поддержание ремиссии. В последнее время при данном заболевании стало перспективным экспериментальное изучение трансплантации стволовых клеток и различных путей их введения для стимуляции репаративного процесса в очагах воспаления.Цель. Оценить терапевтический эффект мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга при внутривенном и внутриаортальном путях введения на модели острого язвенного колита у крыс.Материалы и методы. Экспериментальное исследование проведено на 13 половозрелых крысах линии Wistar. У животных из опытной группы (n=9) после трансректального введения спиртового раствора 2,4-динитробензолсульфоновой кислоты сформирована экспериментальная модель язвенного колита. На 3-и сутки эксперимента произведена клеточная терапия посредством введения микронизированного раствора мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток внутривенным и внутриаортальным путями. Анализ эффективности терапии произведен на 6-е и 10-е сутки эксперимента путем макроскопической и микроскопической оценки состояния толстой кишки.Результаты. После клеточной терапии отмечена положительная динамика по ряду признаков: изменение массы тела, загрязнение кожи вокруг ануса и консистенция стула. Макроскопическое исследование толстой кишки крыс опытной группы без клеточной терапии установило наличие отечного, плотного и дилатированного нисходящего отдела ободочной кишки. При аутопсии животных с клеточной терапией на 10-е сутки отмечено значительное уменьшение воспаления кишки с сохранением единичных очагов гиперемии слизистой, а микроскопически зафиксировано формирование грануляционной ткани. При оценке миграционнойспособности стволовых клеток в очаг воспаления выявлена их более выраженная флуоресценция на 6-е сутки при внутриаортальном введении, которая сохранялась на 10-е сутки.Заключение. На экспериментальной модели язвенного колита получен положительный клинический, макроскопический и микроскопический эффект от клеточной терапии мультипотентными мезенхимальными стромальными клетками красного костного мозга крыс преимущественно при внутриаортальном введении. Introduction. Ulcerative colitis is a chronic recurrent inflammatory disease of the rectum and colon, the main goal of conservative treatment of which is to stop the clinical picture of the disease and maintain remission. Recently, it has become promising to experimentally study the transplantation of stem cells and various ways of their introduction to stimulate the preparative process in the foci of inflammation.Purpose. To evaluate the therapeutic effect of multipotent mesenchymal stromal bone marrow cells after intravenous and intra-aortic administration in the rat model of acute ulcerative colitis.Materials and methods. An experimental study was performed on 13 sexually mature Wistar rats. The experimental model of ulcerative colitis was formed in the experimental group of animals (n = 9) after transrectal administration of alcoholic solution of 2,4-dinitrobenzenesulfonic acid. Сell therapy was performed with intra-aortic and intravenous administration of micronized solution of multipotent mesenchymal stromal cells оn the 3rd day of the experiment. The analysis of the effectiveness of therapy was carried out on the 6th and 10th day of the experiment by means of macroscopic and microscopic assessment of the state of the colon.Results. After cell therapy, there was a positive trend in a number of signs: changes in body weight, contamination of the skin around the anus, and stool consistency. Macroscopic colon evaluation of experimental group rats without cell therapy revealed the edematous, dense and dilated descending colon. Autopsy of animals with the cell therapy on the 10th day found a significant decrease of intestinal inflammation with preservation of a single focus of mucosal hyperemia, and the formation of granulation tissue was microscopically recorded. In assessment of migration potential of stem cells into the inflammation focus, there was revealed their more pronounced fluorescence on the 6th day in intra-aortic administration, which was preserved during 10 days.Conclusion. In experimental model of ulcerative colitis, a positive clinical, macroscopic and microscopic effect of cell therapy with multipotent mesenchymal stromal cells of the rat red bone marrow was demonstrated, mainly after intra-aortic administration.
Введение. Болезнь Паркинсона (БП) - одно из наиболее распространенных нейродегенеративных заболеваний в мире. Лечение БП с использованием аутологичных мезенхимальных мультипотентных стромальных клеток (ММСК) рассматривается как перспективный метод патогенетической терапии данного заболевания, способный изменять течение тяжелой хронической патологии. Цель исследования. Оценить эффективность малоинвазивных способов введения аутологичных ММСК в дозах, составляющих менее 0,5 млн\кг массы тела пациента. Материалы и методы. В исследование включено 34 пациента с БП. В группу А вошли 9 пациентов, которым однократно внутривенно медленно вводили суспензию ММСК в дозе Ме=11,85 [10,00-19,20] ×106 клеток в 10,0 мл приготовленного раствора. Суммарная доза клеток составила 0,16 млн\кг массы тела. В группу В вошли 12 пациентов с однократным трансназальным введением аутологичных ММСК в дозе Ме=10,15 [10,00-13,02] ×106 клеток в объеме 5 мл приготовленного раствора. В группу сравнения вошли 13 пациентов с однократным введением 0,9% физиологического раствора в объеме 5 мл трансназально или в объеме 10 мл внутривенно медленно. Мониторинг клинико-неврологического статуса с оценкой моторных симптомов осуществляли до введения ММСК и через 7 дней после трансплантации. Результаты. Внутривенное введение ММСК в малой дозе пациентам группы А привело к статистически значимому снижению двигательных расстройств по сравнению с исходными данными в День 0 (Рoff =0,020, Рon=0,012) и составило 4 балла (11%) в off-периоде и 7 баллов (29%) в on-периоде UPDRS. Трансназальное введение ММСК в аналогичной дозе пациентам группы В также способствовало статистически значимому улучшению двигательных расстройств (Рoff =0,003, Рon=0,024) и составило 5 баллов (14%) в off-периоде и 4,5 балла (16 %) в on-периоде UPDRS. В группе сравнения на 7 сутки после введения плацебо динамики моторных симптомов не наблюдали. Заключение. Результаты нашего исследования позволяют рассматривать применение ММСК в качестве терапии, изменяющей течение болезни Паркинсона. Эффективность малоинвазивных способов введения в малых дозах ММСК может быть принята во внимание при разработке длительной поддерживающей терапии болезни Паркинсона. Background. Parkinson's disease (PD) is one of the most common neurodegenerative diseases in the world. Treatment of patients with Parkinson disease (PD) using autologous mesenchymal stem cells (MSCs) is a promising method to influence the pathogenesis of the disease. The aim of the study was to evaluate the effectiveness of minimally invasive methods of transplantation autologous MSCs in doses less than 0.5 million / kg of patient's body weight. Methods. The study included 34 patients with PD. Group A included 9 patients who received a single intravenous injection of MSCs suspension (the dose Me = 11.85 [10.00-19.20] × 106 cells in 10.0 ml of the prepared solution). The total dose was 0.16 × 106 / kg of patient's body weight. Group B included 12 patients who received a single transnasal injection of autologous MSCs (the dose Me = 10.15 [10.00-13.02] × 106cells in a volume of 5 ml of the prepared solution). The comparison group included 13 patients who received placebo. Effectiveness of the therapy was evaluated 7 days post-transplantation by assessing motor symptoms of the disease. Results. We found a statistically significant decrease in the severity of motor symptoms in the groups A and B in the post-transplant period. In the comparison group the dynamics of motor symptoms was not observed. Conclusions. Positive results allow us to consider MSCs transplantation as a disease-modifying therapeutic strategy in PD. The effectiveness of minimally invasive methods of MSCs transplantation can be considered in the development of long-term maintenance therapy for Parkinson's disease. Кіріспе. Паркинсон ауруы (ПА) - әлемдегі ең көп таралған нейродегенеративті аурулардың бірі. Аутологиялық мезенхималық мультипотентті стромальді жасушаларды (ММСК) пайдалана отырып, ПА емдеу ауыр созылмалы патологияның ағымын өзгертуге қабілетті осы аурудың патогенетикалық терапиясының перспективті әдісі ретінде қарастырылады. Зерттеу мақсаты. Науқастың дене салмағының 0,5 млн/ кг-нан аз мөлшерін құрайтын дозаларда аутологиялық ММСК енгізудің аз инвазивті әдістерінің тиімділігін бағалау. Материалдары мен әдістері. Зерттеуге ПА бар 34 науқас енгізілді. А тобына ХБ=11,85 [10,00-19,20] =10,0 мл дайындалған ерітіндідегі 106 жасуша дозасында бір рет көктамыр ішіне ММСК суспензиясын баяу енгізген 9 пациент кірді. Жасушалардың жалпы дозасы дене салмағының0,16 млн / кг құрады. В тобына 5 мл ерітінді көлемінде ХБ=10,15 [10,00-13,02] ×106 жасуша дозасында аутологиялық ММСК бір реттік трансназалды енгізумен 12 пациент кірді. Салыстыру тобына трансназалды 5 мл көлемінде немесе көктамыр ішіне баяу 10 мл көлемінде 0,9% физиологиялық ерітіндіні бір реттік енгізумен 13 пациент кірді. Клиникалық-неврологиялық статус мониторингі ММСК енгізілгенге дейін және трансплантациядан кейін 7 күн өткен соң жүзеге асырылды. Нәтижелер. А тобындағы пациенттерге аз дозада ММСК көктамыр ішіне енгізу 0 (Рoff =0,020, Рon=0,012) күніндегі бастапқы деректермен салыстырғанда қозғалыс бұзылыстарының статистикалық маңызды төмендеуіне алып келді және off-кезеңінде 4 балл (11%) және UPDRS on-кезеңінде 7 балл (29%) құрады. В тобының пациенттеріне ұқсас дозада ММСК трансназалды енгізу сондай-ақ қозғалтқыштың бұзылуының статистикалық маңызды жақсаруына ықпал етті (Рoff =0,003, ӨКМ=0,024) және OFF-кезеңінде 5 балл (14%) және UPDRS on-кезеңінде 4,5 балл (16 %) құрады. Салыстыру тобында плацебо енгізгеннен кейін 7 тәулікте мотор симптомдарының қарқыны байқалмады. Қорытынды. Біздің зерттеуіміздің нәтижелері ММСК қолдануды Паркинсон ауруының ағымын өзгертетін терапия ретінде қарастыруға мүмкіндік береді. ММСК кіші дозаларда енгізудің шағынинвазивті әдістерінің тиімділігін Паркинсон ауруының ұзақ мерзімді демеуші терапиясын әзірлеу кезінде назарға алуға болады.
Objectives. To evaluate the reproducibility of renal ischemia-reperfusion injury model in rats using transabdominal access with bilateral renal pedicles clamping within 50 minutes. Methods. The experiment was conducted in sexually mature, albino, purebred male rats (n=8, 270-310 g). The referent group (n=4) consisting of intact animals comparable in sex and weight was formed. The laboratory animals were anesthetized with transperitoneal sodium thiopental injection. Bilateral renal clamping through median laparotomy was used to reproduce ischemia-reperfusion (I/R) model with 50 min ischemia, the reperfusion period 24 and 48 hours. The control (Sham) group (n=2) was allocated, the rats underwent to all stages of the surgery except renal clamping. Efficiency of ischemia development was evaluated by measuring serum creatinine and urea determined by the standard methodology and histological changes of renal tissue. Results. None of the animals died during the post-operative period. Increasing of the serum creatinine level by 1,5 folds and more in comparison with referent data was fixed in 5 out of 6 laboratory animals whereas serum creatinine was not different from normal level in Sham group. Histological evaluation of the renal tissue revealed the different changes indicating the development of proximal tubular injury in 100% of rats. Conclusion. The obtained results testify to the development of acute renal failure in 83,3% rats after 50 min. ischemia and independently on 24 or 48 hours reperfusion that allows using transabdominal access with bilateral renal clamping for the reproduction of the ischemia-reperfusion model of acute kidney injury.
IgA-nephropathy (IgAN) is one of the most common forms of the glomerulonephritis in the world. The aetiology and pathogenesis of IgAN are still unknown. The production of «pathogenic» IgA followed by the formation of immune complexes with high affinity to mesangial cells (MC) of the glomeruli is considered as an initiating factor. In 15-20% of patients, mesangial depositions content secretory IgA1 and this pattern is associated with activation of complement by the lectin path. In the majority of patients with IgAN (70-80%) IgA1 depositions having galactose defect are detected in mesanium. O-glycans without galactose act as autoantigenes these stimulate the producing of antiglacans antibodies from immunoglobulin G class. Such macromolecules containing IgA immunocomplex are not effectively excreted from circulation by reticuloendothelial system that is why they are filtrated and are accumulated in glomerular mesangium. The next stage of IgAN is the interaction between IgA1 deposits and mesangium that stimulates cells proliferation and increases mesangial matrix synthesis.
Peripheral nerves damages are one of the most complex problems in reconstructive surgery. The disadvantages of the autonervous plastic method encourage development of other ways of nerves restoration: cellular technologies methods being considered the most perspective among them. The purpose of our research was definition of possibility of regeneration of the damaged peripheral nerves at transplantation of mesenchymal stem cells in experiment for working out of a new surgical method of restoration on the basis of combined graft. The research used 24 white male non-purebred rats. The model of peripheral nerve damage has been created by the standard technique. Mesenchymal stem cells from adipose tissue of rats was carried out by mechanical and enzymatic disaggregation. In control group anastomosis was formed between PTFE prosthesis and both ends of the nerve. In the second experimental group, the compound of 1× 106 / ml of MSC, preliminary stained by fluorescent dye PKH26,was added into the anastomosis gap. The anastomosis zone was excised for histlogic research after 8 weeks reconstruction.
The estimation of proliferative potential, morphological and phenotypic characteristics of mesenchymal origin cultures for the purpose of a choice of the difficult multicomponent biological transplants cellular component for reconstructiveregenerative surgery was done. It's determined that the primary culture of adipose tissue-derived multipotent mesenchymal stromal cells (adMSCs) is superior to skin fibroblasts and aponeurosis cultures in proliferative capacity. adMSCs, skin fibroblasts, the aponeurosis and the postnatal fibroblasts (Foreskin line) cultures are characterized by identical morphological features with the high viability and resistance to environmental factors. Primary cultures of adMSCs are characterized by heterogeneous structure with the presence of cells with hemopoietic CD34, CD31, CD45 markers. Cultures from the 1 till 3 passages assumed cellular phenotype as CD90+/CD105+/CD44+/CD119+/CD34 -/CD45 -/ CD31 characteristic for MSCs. Level of ССЙ7 expression was high and did not change while passaging that possible could be one of the specific for adMSCs phenotype features. High proliferative potential, expressed migratory ability, morphological and phenotypic similarity with the fibroblasts cultures, the elimination from adipose tissue well-tested protocol indicates the advantages of adMSCs application as a cell-component to build biological transplants.